1、急性腎功能不全周曉泉浙江中醫藥大學09臨床1班，20091090128【實驗目的】學習用氯化汞復制急性中毒性腎功能不全的動物模型。觀察急性腎功能不全時動物尿蛋白、血肌酐、尿肌酐、腎酚紅排泄率的變化以及腎臟的形態改變，分析和討論其致病因素及發生機制。【實驗原理】采用腎毒物重金屬HgCl2溶液造成家兔急性腎小管壞死，復制急性腎功能不全的動物模型，通過觀察動物的尿蛋白、血肌酐、尿肌酐、腎酚紅排泄率的變化以及腎臟的形態改變，學習急性腎衰時內環境的變化。1 材料家兔；分光光度計，光學顯微鏡，離心機，恒溫水浴箱；1%HgCl2溶液，氨基甲酸乙酯溶液，生理鹽水，酚紅，NaOH,醋酸，堿性苦味酸，肌酐標準應用

2、液，葡萄糖；兔臺，手術器械，1ml和5ml注射器，試管，滴管，漏斗，吸管，試管夾，酒精燈，試管架，頸動脈插管。 2 方法2.1 急性腎功能不全模型復制 取家兔兩只，于實驗前一天稱重后，一只為正常對照組，一只為中毒實驗組。實驗兔皮下或肌肉注射1%HgCl2（按0.81.0ml/kg），造成急性腎功能不全模型；對照兔則在相同部位注射同量的生理鹽水，作為對照。2.2麻醉固定 用200g/L的氨基甲酸乙酯按5ml/kg體重劑量給家兔耳緣靜脈注射麻醉，將家兔仰臥位固定于固定架上。2.3 心臟采血 先用手摸到第2,3肋間，心臟活動最為活躍處，垂直進針，有落空感，緩慢抽取血液約2ml于干燥試管中，作血肌酐檢

3、查。2.4 采集尿液 下腹部剪毛，從恥骨聯合向上沿中線作約4cmd切口，沿腹白線打開腹腔，暴露膀胱，用注射器抽取膀胱內尿液2ml于干燥試管中,作尿肌酐、尿常規檢查。2.5 輸尿管插管 在膀胱底部仔細分離兩側輸尿管。用出線結扎近膀胱處的兩側輸尿管，以阻斷尿流，結扎固定。將兩側導尿管外端用線扎在一起，用于收集尿液。手術完畢后，用溫熱的生理鹽水紗布覆蓋腹部的創傷。2.6 實驗觀察 血清和尿肌酐含量測定 將各組裝有血液的試管放入離心機內，靜置10min后，3000r/min離心15min。離心完畢后，小心吸取血清置于另一干凈試管中，測血肌酐用。去硬質試管3支編號，分別為空白管、標準管及測定管。按表1加

4、樣，混勻，37水浴30min，用分光光度計一波長510nm，空白管調零，讀OD值。然后加50%乙酸溶液兩滴，放置6min后，再測OD值。按（1）式計算血清肌酐（Crp）：表1 血清肌酐測定單位/ml標準管測定管空白管肌酐標準應用液/（0.05mg/ml） ul0.2_血清_0.2_蒸餾水_0.2堿性苦味酸0.20.20.2Crp（mg%）= (OD測OD測)/ (OD標OD標)×0.01/0.2×100 (1) 按表2加樣，混勻，放10min后加蒸餾水6.0ml，搖勻，用分光光度計以波長530nm，空白管調零，讀OD值。按（2）式計算尿肌酐（Cru）:表2 尿肌酐測定單位/

5、ml標準管測定管空白管尿液0.1_肌酐標準應用液/（0.05mg/ml） ul_0.1_蒸餾水_0.1堿性苦味酸0.20.20.2125g/L NaOH0.50.50.5Cru(mg%)=OD測×0.05mg×100ml/0.1ml (2)酚紅排泄試驗從耳緣靜脈快速注入1ml/kg酚紅并計時，再從耳緣靜脈緩慢注入30ml/kg葡萄糖溶液。記入30min分鐘尿量，并算出每分鐘尿量。將30min內尿液移入500ml的量筒內，加入10%NaOH10ml，使之顯色。加自來水至500ml,攪拌均勻。從量筒中吸出尿液置于比色皿中用分光光度計以530波長分別測定酚紅標準液及尿液的吸光度，

6、按下式求出酚紅的排泄率或排出量：酚紅排泄率=OD尿/OD標×0.5×100% 酚紅排出量(mg)= OD尿/OD標×0.6×0.5×0.5腎形態學觀察 夾住家兔的氣管處死家兔，解剖取出腎臟，稱重，計算腎臟與體重之比。比較兩組家兔腎臟外形、質地，縱向剖開腎臟，觀察腎切面包膜、皮髓質分界、皮髓質條紋、色澤等。3 結果對照組腎臟外形飽滿，質地柔軟，腎切面包膜光滑，皮髓質分界清楚，皮髓質條紋明顯，整體色澤明亮；而實驗組腎臟外觀有小顆粒顯現，觸摸彈性小，腎切面包膜粗糙，皮質增厚，皮髓質條紋模糊，整體色澤暗淡。急性腎功能不全對家兔血氣指標的影響實驗組血肌酐

7、尿肌酐酚紅代謝率腎比重19.53.85小于5%0.0106210.6253.4小于5%0.007935.8335.35小于5%0.01247.93小于5%0.0083±8.4645±2.0803423.9±1.07132小于5%0.0097±0.991941對照組血肌酐尿肌酐酚紅代謝率腎比重51.1213.6545%0.0069264.7736.3545%0.012970.03810.26550%0.00723830.950%0.00827±2.232775±0.0055185.29125±6.2058020.475

8、7;0.0288680.00883±0.002774P值0.0055180.6867360.627742實驗總結果分組 血肌酐 尿肌酐 酚紅代謝率 腎比重實驗組 8.46+2.08 3.90+1.03 小于5% 0.0097+0.0019對照組 2.23+2.08 5.29+6.21 大于45% 0.0088+0.0028實驗組與對照組相比，尿肌酐/血肌酐值降低，酚紅排泄率下降，腎比重減小，皮髓質分界不清，顏色蒼白。4 討論腎功能不全是當各種病因引起腎功能嚴重障礙時，會出現多種代謝產物、藥物和毒物在體內蓄積，水、電解質和酸堿平衡紊亂，以及腎臟內分泌功能障礙的臨床表現。引起急性腎功能不

9、全的主要原因有腎前性、腎性和腎后性三種。氯化汞是重金屬鹽，肌肉注射10g/L氯化汞可引起以腎小管壞死為主的急性腎功能不全。腎中毒可直接損害腎小管上皮細胞，其病變均勻分布，以近端小管為主。壞死的腎小管上皮細胞及脫落上皮細胞和微絨毛碎屑、細胞管型或血紅蛋白、肌紅蛋白等阻塞腎小管，使原尿不易通過，引起少尿。同時，管腔內壓升高，繼而使腎小球囊內壓力升高，當后者壓力與膠體滲透壓之和接近或等于腎小球毛細管內壓時，遂引起腎小球濾過停止。有效濾過壓降低，導致腎小球濾過率下降，近曲小管重吸收水鈉減少，致密斑分泌腎素，激活腎素-血管緊張素系統，促進水鈉潴留。且毛細血管內皮損傷、腫脹，致濾過膜通透性降低也引起腎小球

10、率過濾下降。在腎毒物作用下，腎小管上皮細胞變性、壞死、脫落，原尿可經受損腎小管壁出返漏入周圍腎間質，除可直接造成尿量減少外，還引起腎間質水腫，壓迫腎小管，造成囊內壓升高，使GFR減少，出現少尿。由于腎小球濾過率降低引起少尿或無尿，致使排出氮質和其他代謝廢物減少，血漿肌酐和尿素不氮升高，其升高速度與體內蛋白分解狀態有關。內生肌酐清除率與尿肌酐成正比關系而與血肌酐成反比關系。在尿量固定的情況下，尿肌酐越高，血肌酐越低，肌酐清除率就越高。急性腎功能不全時由于腎小球濾過功能降低使得血肌酐難以排出而增多，尿肌酐難以生成而減少，使得內生肌酐清除率大大下降，內生肌酐清除率是衡量腎功能不全的良好指標。注射大量的葡萄糖溶液是為了造成滲透性利尿，利于排除酚紅。酚紅是一種對人體無害的紅色染料，經靜脈注射后，大部分與血漿蛋白結合，除20%為肝臟清除，經膽道排出外，其余則由腎臟排出。在腎臟的排泌過程中，94%由近曲小管上皮細胞主動排泌，小部分不與白蛋白結合者可從腎小球濾過，尿中排出4%左右，2%通膽汁到大腸由糞便排出，因為酚紅大部分通過近曲小管分泌、排出，所以其尿中排出量，可作為判斷近曲小管排泌功能的指標。氯化汞中毒導致腎小管上皮細胞損傷，尿量減少，酚紅排泄率降低。5 結論氯化汞中毒導致的急性腎功能不全時，家兔尿肌酐/血肌酐1，酚紅排泄率