1、精選ppt1紫外分光光度法紫外分光光度法有機(jī)物定性定量有機(jī)物定性定量?jī)x器分析實(shí)驗(yàn)精選ppt2一、一、目的要求目的要求v1.掌握紫外分光光度法的基本原理和條件。v2.掌握吸收曲線的測(cè)繪和測(cè)量波長(zhǎng)的選擇，了解最大吸收波長(zhǎng)的重要性。v3.熟悉朗伯一比爾定律的應(yīng)用，掌握標(biāo)準(zhǔn)曲線法定量的技術(shù)。v4.熟練掌握紫外分光光度計(jì)和石英比色皿的使用方法。精選ppt3二、基本原理二、基本原理v【名稱】 苯甲酸 Benzoic Acid v【其他名稱】 安息香酸 （carboxybenzene ）、 苯酸（phenylformic acid）、苯蟻酸 v【適應(yīng)】與水楊酸合用于成人皮膚真菌病，淺部真菌感染如體癬、手癬及

2、足癬等，用于食品和藥物制劑的消毒防腐劑，一般濃度為0.2%，或用0.5%的苯甲酸鈉，溶解度更好。 精選ppt4二、有機(jī)物吸收光譜與電子躍遷ultraviolet spectrometry of organic compounds有機(jī)化合物的紫外可見吸收光譜是三種電子躍遷的結(jié)果：電子、電子、n電子。分子軌道理論分子軌道理論：成鍵軌道反鍵軌道。當(dāng)外層電子吸收紫外或可見輻射后，就從基態(tài)向激發(fā)態(tài)(反鍵軌道)躍遷。主要有四種躍遷四種躍遷所需能量大小順序大小順序?yàn)椋簄 n n s sp p *s s *RKE,Bnp p ECOHnp ps sH精選ppt52躍遷 所需能量最大；電子只有吸收遠(yuǎn)紫外光的能量

3、才能發(fā)生躍遷； 飽和烷烴的分子吸收光譜出現(xiàn)在遠(yuǎn)紫外區(qū)； 吸收波長(zhǎng)200 nm；例：甲烷的max為125nm , 乙烷max為135nm。 只能被真空紫外分光光度計(jì)檢測(cè)到； 作為溶劑使用；s sp p *s s *RKE,Bnp p E精選ppt63n躍遷 所需能量較大。 吸收波長(zhǎng)為150250nm，大部分在遠(yuǎn)紫外區(qū)，近紫外區(qū)仍不易觀察到。 含非鍵電子的飽和烴衍生物(含N、O、S和鹵素等雜原子)均呈現(xiàn)n* 躍遷。600215CH3NH2365258CH3I200173CH3CL150184CH3OH1480167H2Omaxmax（nm）化合物精選ppt74 躍遷 所需能量較小，吸收波長(zhǎng)處于遠(yuǎn)紫

4、外區(qū)的近紫外端或近紫外區(qū)，max一般在104Lmol1cm1以上，屬于強(qiáng)吸收。 （1 1） 不飽和烴不飽和烴* *躍遷躍遷 乙烯*躍遷的max為162nm，max為: 1104 Lmol-1cm1。 K帶共軛非封閉體系的p p* 躍遷 C=C 發(fā)色基團(tuán)， 但 p p*200nm。ccHHHH取代基 -SR -NR2 -OR -Cl CH3 紅移距離 45(nm) 40(nm) 30(nm) 5(nm) 5(nm) max=162nm 助色基團(tuán)取代 p p（K帶)發(fā)生紅移。精選ppt8165nm 217nm p* p p p* p* p p p p* (HOMO LVMO) max 基基-是由非

5、環(huán)或六環(huán)共軛二烯母體決定的基準(zhǔn)值；是由非環(huán)或六環(huán)共軛二烯母體決定的基準(zhǔn)值；無環(huán)、非稠環(huán)二烯母體： max=217 nm共軛烯烴（不多于四個(gè)雙鍵）p p*躍遷吸收峰位置可由伍德伍德沃德沃德菲澤菲澤 規(guī)則估算。 max= 基基+ ni i （2）共軛烯烴中的）共軛烯烴中的 p p p p*精選ppt9三、儀器與試劑三、儀器與試劑v1.儀器v T6型（或其他型號(hào)）紫外可見分光光度計(jì)v 石英比色皿 1cm 2只v 比色管 50mL 6只v 吸量管 25mL 、 l0mL 、5mL 各 1支精選ppt10精選ppt11三、儀器與試劑三、儀器與試劑v2.試劑v1mg/mL苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。v100 ug/

6、mL苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確吸取1mg/mL的苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液25.00mL，在250mL容量瓶中定容。 精選ppt12四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟 v 1.溶液的配制 取50mL的比色管6只，蒸餾水清洗干凈，編 號(hào) ， 用 5 . 0 0 m L 吸 量 管 分 別 準(zhǔn) 確 加 入l00g/ml的苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，靜置。 準(zhǔn)確移取10.00mL苯甲酸試液，在50mL比色管中用蒸餾水定容 精選ppt13四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟v2.石英比色皿配套性檢查 石英比色皿在波長(zhǎng)220nm處盛蒸餾水，以在一號(hào)格的比色

7、皿為參比，調(diào)節(jié)其透光率T為100%，測(cè)量第二個(gè)比色皿的的透光率，透光率的偏差小于0.5%的比色皿可以陪套使用。記錄校正值精選ppt14四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟v3.有機(jī)物的定性 選用苯甲酸試樣溶液，以蒸餾水為參比，用1cm的石英比色皿，在波長(zhǎng)210250nm范圍內(nèi)，每隔5 nm測(cè)量一次。以吸光度為縱坐標(biāo)，波長(zhǎng)為橫坐標(biāo)，繪制吸收曲線。與苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)曲線比對(duì)定性。v選擇吸收曲線的最大吸收波長(zhǎng)max=227nm為本實(shí)驗(yàn)的測(cè)定波長(zhǎng)。精選ppt15四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟v3.有機(jī)物的定性 精選ppt16四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟v4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 在選定的測(cè)量波長(zhǎng)max=227nm處，以蒸餾水為參比，用1cm的比色皿盛溶液，準(zhǔn)確測(cè)定以上配制好的各個(gè)苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度A，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液讀三次取其平均值。以濃度C作橫坐標(biāo)，吸光度A作縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。精選ppt17四、實(shí)驗(yàn)步驟四、實(shí)驗(yàn)步驟v5.試樣吸光度的測(cè)定 在測(cè)量波長(zhǎng)max=227nm處，與標(biāo)準(zhǔn)曲線同樣的條件下，測(cè)量樣液吸光度A，測(cè)三次取其平均值。精選ppt18五、實(shí)驗(yàn)記錄五、實(shí)驗(yàn)記錄 v1測(cè)定波長(zhǎng)的確定 儀器型號(hào) 比色皿厚度 精選ppt19五、實(shí)驗(yàn)記錄五、實(shí)驗(yàn)記錄 v2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制及樣品測(cè)定精選ppt20六、數(shù)據(jù)處理及計(jì)算結(jié)果v1測(cè)定波長(zhǎng)的確定v根據(jù)上述數(shù)據(jù)繪制吸收曲線，確定最大吸收波長(zhǎng)即為測(cè)定波長(zhǎng)。v2標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪