1、醫(yī)學微生物學醫(yī)學微生物學消毒滅菌與病原微生物實驗室生物安全 細菌極易受外界物理和化學因素的影響。細菌極易受外界物理和化學因素的影響。v消毒滅菌消毒滅菌即是用物理或化學方法來抑制或殺滅外環(huán)境中及機即是用物理或化學方法來抑制或殺滅外環(huán)境中及機體體表的微生物，以防止微生物污染或病原微生物傳播的方法。體體表的微生物，以防止微生物污染或病原微生物傳播的方法。v生物安全（生物安全（biosafety）:是是生物技術(shù)安全（生物技術(shù)安全（safety of biotechnology）的簡稱。的簡稱。 狹義的生物安全狹義的生物安全是指現(xiàn)代生物技術(shù)的研究、開發(fā)、應用以及轉(zhuǎn)是指現(xiàn)代生物技術(shù)的研究、開發(fā)、應用以及轉(zhuǎn)

2、基因生物可能對生物多樣性、生態(tài)環(huán)境和人類健康產(chǎn)生潛在的危基因生物可能對生物多樣性、生態(tài)環(huán)境和人類健康產(chǎn)生潛在的危險，特別是各類轉(zhuǎn)基因活生物體釋放到環(huán)境中可能對生物多樣性險，特別是各類轉(zhuǎn)基因活生物體釋放到環(huán)境中可能對生物多樣性構(gòu)成的潛在危險。構(gòu)成的潛在危險。 廣義的生物安全廣義的生物安全是指與生物有關(guān)的各種因素對社會、經(jīng)濟、人是指與生物有關(guān)的各種因素對社會、經(jīng)濟、人類健康及生態(tài)環(huán)境所產(chǎn)生的危害或潛在風險。尤其是病原微生物類健康及生態(tài)環(huán)境所產(chǎn)生的危害或潛在風險。尤其是病原微生物所導致的安全問題。所導致的安全問題。病原微生物實驗室生物安全的核心是病原微生物實驗室生物安全的核心是防擴散防擴散和和防感染

3、防感染。第一節(jié)第一節(jié) 消毒滅菌的常用術(shù)語消毒滅菌的常用術(shù)語滅菌滅菌(sterilization)：殺滅物體上所有微生物的方法殺滅物體上所有微生物的方法，包括殺滅，包括殺滅細菌芽胞、病毒和霉菌在內(nèi)的全部病原微生物和非病原微生物。細菌芽胞、病毒和霉菌在內(nèi)的全部病原微生物和非病原微生物。消毒消毒(disinfection)：殺死物體上或環(huán)境中的病原微生物的方法殺死物體上或環(huán)境中的病原微生物的方法.并不一定能殺死細菌芽胞或非病原微生物的方法。用以消毒的化并不一定能殺死細菌芽胞或非病原微生物的方法。用以消毒的化學藥品稱為消毒劑學藥品稱為消毒劑(disinfectant)。防腐防腐(antisepsis)

4、： 防止或抑制皮膚表面細菌生長繁殖的方法。防止或抑制皮膚表面細菌生長繁殖的方法。細菌一般不死亡。用以防腐的藥品稱為防腐劑。防腐劑的選擇要細菌一般不死亡。用以防腐的藥品稱為防腐劑。防腐劑的選擇要安全和有效。安全和有效。清潔：清潔：通過除去塵埃和一切污穢，以減少微生物數(shù)量的過程。通過除去塵埃和一切污穢，以減少微生物數(shù)量的過程。無菌無菌(asepsis)：不存在任何活菌，多是滅菌的結(jié)果。不存在任何活菌，多是滅菌的結(jié)果。防止細菌防止細菌進入人體或其他物品的操作技術(shù)稱為進入人體或其他物品的操作技術(shù)稱為無菌操作（無菌操作（antiseptic technique）。）。1 1、干熱、干熱滅菌滅菌法法通過脫

5、水干燥和大分子變性達到殺菌通過脫水干燥和大分子變性達到殺菌目的。目的。 （1 1）焚燒）焚燒: :最徹底的滅菌方法，但僅適用于廢棄物品或動最徹底的滅菌方法，但僅適用于廢棄物品或動物尸體等。物尸體等。 （2 2）燒灼）燒灼: :直接用火焰滅菌的方法，適用于微生物學實驗直接用火焰滅菌的方法，適用于微生物學實驗室的接種環(huán)、試管口等的滅菌。室的接種環(huán)、試管口等的滅菌。 （3 3）干烤：）干烤：一般一般160160170170經(jīng)經(jīng)2 2小時，小時，適用于玻璃器皿、適用于玻璃器皿、瓷器、玻質(zhì)注射器等的滅菌。瓷器、玻質(zhì)注射器等的滅菌。 （4 4）紅外線：）紅外線：是一種是一種0.770.7710001000

6、m m波長的電磁波，其中波長的電磁波，其中1 11010m m波長的熱效應最強，但波長的熱效應最強，但只能加熱物體表面只能加熱物體表面，不能使物，不能使物體均勻受熱，體均勻受熱，滅菌所使用的溫度與時間同干烤。滅菌所使用的溫度與時間同干烤。主要用于醫(yī)療主要用于醫(yī)療器械的滅菌。器械的滅菌。 第二節(jié)第二節(jié) 消毒滅菌的方法消毒滅菌的方法一、物理消毒滅菌法：一、物理消毒滅菌法： 干熱滅菌法：干熱滅菌法：焚燒燒灼干烤2 2、濕熱、濕熱消毒、滅菌消毒、滅菌法法 （1 1）巴氏消毒法）巴氏消毒法(pasteurization)(pasteurization)：61.161.162.8 3062.8 30分鐘；

7、分鐘；71.7 1571.7 153030秒；適用于不耐熱物品的消毒秒；適用于不耐熱物品的消毒 （2 2）煮沸法）煮沸法 （3 3）流動蒸氣消毒法）流動蒸氣消毒法 （4 4）間歇蒸氣滅菌法）間歇蒸氣滅菌法(fractional sterilization)(fractional sterilization) （5 5）高壓蒸氣滅菌法：）高壓蒸氣滅菌法：一種最有效、最徹底的滅菌方法。一種最有效、最徹底的滅菌方法。在在103.4 kPa103.4 kPa（1.05kg/cm21.05kg/cm2）蒸氣壓下，）蒸氣壓下，溫度溫度121.3121.3，維持，維持151530min30min，可殺滅包括

8、芽孢在內(nèi)的所有微生物。可殺滅包括芽孢在內(nèi)的所有微生物。 巴氏消毒法 煮沸法流動蒸氣消毒法高壓蒸氣滅菌法濕熱滅菌與干熱滅菌的比較同一溫度下，濕熱滅菌比干熱滅菌效果好同一溫度下，濕熱滅菌比干熱滅菌效果好原因原因1、濕熱中細菌菌體蛋白較易凝固2、濕熱的穿透力比干熱大3、濕熱的蒸汽有潛熱 1 1、紫外線：、紫外線：240-300nm240-300nm波長的紫外線有殺菌作用，其中以波長的紫外線有殺菌作用，其中以265-266nm265-266nm最強，因其正好與最強，因其正好與DNADNA的吸收光譜一致。的吸收光譜一致。v殺菌原理：殺菌原理：紫外線主要作用于紫外線主要作用于DNADNA，使一條，使一條D

9、NADNA鏈上相鄰的兩鏈上相鄰的兩個胸腺嘧啶共價結(jié)合成二聚體，干擾個胸腺嘧啶共價結(jié)合成二聚體，干擾DNADNA的復制和轉(zhuǎn)錄，導致細的復制和轉(zhuǎn)錄，導致細菌的變異和死亡。菌的變異和死亡。v特點：特點：紫外線的穿透力極弱。紫外線的穿透力極弱。v殺菌結(jié)果：殺菌結(jié)果：紫外線對芽胞菌和無芽胞菌的作用不同，導致細紫外線對芽胞菌和無芽胞菌的作用不同，導致細菌的變異和死亡。菌的變異和死亡。v應用范圍：應用范圍：故一般只用于空氣消毒及不耐熱物品的表面消毒，故一般只用于空氣消毒及不耐熱物品的表面消毒，如手術(shù)室、傳染病房、細菌實驗室；如手術(shù)室、傳染病房、細菌實驗室；v注意事項：注意事項：紫外線可損傷皮膚、眼睛，使用時

10、應注意防護。紫外線可損傷皮膚、眼睛，使用時應注意防護。 v殺菌原理：殺菌原理：是干擾是干擾DNADNA合成、破壞細胞膜、引起酶系統(tǒng)紊亂合成、破壞細胞膜、引起酶系統(tǒng)紊亂及水分子經(jīng)輻射后產(chǎn)生游離基和新分子，如過氧化氫，從而殺及水分子經(jīng)輻射后產(chǎn)生游離基和新分子，如過氧化氫，從而殺死細菌。死細菌。v應用范圍：應用范圍：一次性醫(yī)用塑料制品的消毒一次性醫(yī)用塑料制品的消毒食品的消毒食品的消毒, ,而不破壞其營養(yǎng)成分。而不破壞其營養(yǎng)成分。 電離輻射電離輻射主要是主要是和和射線。射線。3 3、微波：、微波：v特點：特點：波長波長1mm1mm至至1000mm1000mm的電磁波，可穿透玻璃、塑料薄膜的電磁波，可穿

11、透玻璃、塑料薄膜與陶瓷等，但不能穿透金屬表面與陶瓷等，但不能穿透金屬表面v殺菌原理：殺菌原理： 微波主要靠熱效應發(fā)揮作用微波主要靠熱效應發(fā)揮作用。微波通過介質(zhì)時，使極性分子。微波通過介質(zhì)時，使極性分子快速運動，摩擦生熱，里外溫度同時上升。快速運動，摩擦生熱，里外溫度同時上升。 但微波的熱效應必須在一定含水量的條件下才能顯示出來，但微波的熱效應必須在一定含水量的條件下才能顯示出來，在干燥條件下，即使再延長消毒時間也不能達到有效滅菌。在干燥條件下，即使再延長消毒時間也不能達到有效滅菌。v應用范圍：應用范圍： 常用于食品、非金屬器械、檢驗室用品、食品用具、藥杯常用于食品、非金屬器械、檢驗室用品、食品

12、用具、藥杯等的消毒。等的消毒。 用物理阻留的方法用物理阻留的方法將液體或空氣中的細菌除去將液體或空氣中的細菌除去, ,以達到除以達到除菌目的，菌目的，但不能除去病毒、支原體、衣原體和但不能除去病毒、支原體、衣原體和L L型細菌型細菌 主要用于不耐高溫的血清、抗毒素、抗生素、藥液的除菌主要用于不耐高溫的血清、抗毒素、抗生素、藥液的除菌 通過初、中、高效分子通過初、中、高效分子空氣過濾器空氣過濾器除掉空氣中除掉空氣中0.55m的的塵埃顆粒塵埃顆粒，并采用合理的氣流方式來達到空氣潔凈的目的，并采用合理的氣流方式來達到空氣潔凈的目的初級過濾初級過濾-塑料泡沫海綿，過濾率塑料泡沫海綿，過濾率50%以下以

13、下中級過濾中級過濾-無紡布，過濾率無紡布，過濾率50%90%高級過濾高級過濾-超細玻璃濾紙，過濾率超細玻璃濾紙，過濾率99.95%99.99%濾菌過程v不同的細菌對干燥的抵抗力不同。不同的細菌對干燥的抵抗力不同。例如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈例如腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、霍亂弧菌、蒼白密螺旋體等在干燥的空氣中會很快死亡；瑟菌、霍亂弧菌、蒼白密螺旋體等在干燥的空氣中會很快死亡；結(jié)核分枝桿菌在干痰中數(shù)月不死結(jié)核分枝桿菌在干痰中數(shù)月不死; ;芽胞的抵抗力更強，如炭疽芽芽胞的抵抗力更強，如炭疽芽胞桿菌的芽胞耐干燥胞桿菌的芽胞耐干燥2020余年。余年。 v干燥法常用于保存食物，干燥法常用于保存食物，濃鹽或糖漬

14、食品可使細菌體內(nèi)水分逸濃鹽或糖漬食品可使細菌體內(nèi)水分逸出，造成生理性干燥，使細菌的生命活動停止，從而防止食物出，造成生理性干燥，使細菌的生命活動停止，從而防止食物變質(zhì)。變質(zhì)。v低溫可使細菌的新陳代謝減慢，故低溫常用于保存菌種低溫可使細菌的新陳代謝減慢，故低溫常用于保存菌種。當溫。當溫度回升至適宜范圍時，又能恢復生長繁殖。度回升至適宜范圍時，又能恢復生長繁殖。v為避免解凍時對細菌的損傷，可在低溫狀態(tài)下真空抽去水分，為避免解凍時對細菌的損傷，可在低溫狀態(tài)下真空抽去水分，此法稱為此法稱為冷凍真空干燥法冷凍真空干燥法。是目前保存菌種的最好方法是目前保存菌種的最好方法，一般，一般可保存微生物數(shù)年至數(shù)十年

15、。可保存微生物數(shù)年至數(shù)十年。 二二 、化學消毒滅菌法、化學消毒滅菌法化學消毒劑的殺菌機制：化學消毒劑的殺菌機制：1、促進菌體蛋白質(zhì)變性或凝固（酚、醇、醛、酸堿類）2、干擾細菌的酶系統(tǒng)和代謝（氧化劑、重金屬鹽類）3、損傷菌細胞膜，增加其通透性，導致細菌死亡（表面活性劑、脂溶劑） 化學消毒劑一般對人體組織有害，只能外用化學消毒劑一般對人體組織有害，只能外用或用于環(huán)境的消毒或用于環(huán)境的消毒消毒劑的種類：消毒劑的種類：第三節(jié)第三節(jié) 消毒滅菌的運用消毒滅菌的運用空氣過濾器空氣過濾器除掉空氣中除掉空氣中第四節(jié)第四節(jié) 影響消毒滅菌效果的因素影響消毒滅菌效果的因素（1 1）微生物的種類：）微生物的種類：（2

16、2）微生物的物理狀態(tài)：）微生物的物理狀態(tài)：（3 3）微生物的數(shù)量：）微生物的數(shù)量：（4 4）消毒劑的性質(zhì)、濃度與作用時間：）消毒劑的性質(zhì)、濃度與作用時間：（5 5）溫度：）溫度： （6 6）酸堿度：）酸堿度：（7 7）有機物）有機物: :第五節(jié)第五節(jié) 病原微生物實驗室生物安全病原微生物實驗室生物安全病原微生物的分類病原微生物的分類: 根據(jù)病原微生物的傳染性、感染根據(jù)病原微生物的傳染性、感染后對個體或群體的危害程度，病原微生物分為四類后對個體或群體的危害程度，病原微生物分為四類第一類：第一類：能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物以及我國能夠引起人類或者動物非常嚴重疾病的微生物以及我國尚未發(fā)現(xiàn)

17、或已經(jīng)宣布消滅的微生物。尚未發(fā)現(xiàn)或已經(jīng)宣布消滅的微生物。第二類：第二類：能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或間接能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。第三類：第三類：能夠引起人類或者動物嚴重疾病，但一般對人、動物或能夠引起人類或者動物嚴重疾病，但一般對人、動物或者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴者環(huán)境不構(gòu)成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預防措施的微生物。重疾病，并且具備有效治療和預防措施的微生物。第四類：第四類：通常情況

18、下不引起人類或動物疾病的微生物。通常情況下不引起人類或動物疾病的微生物。第一類、第二類病原微生物稱為高致病性病原微生物第一類、第二類病原微生物稱為高致病性病原微生物病原微生物實驗室的分級：病原微生物實驗室的分級： 根據(jù)實驗室對病原微生物的根據(jù)實驗室對病原微生物的生物安全防護水平（生物安全防護水平（biosafety biosafety levellevel，BSLBSL）及實驗室安全國家標準，實驗室分為一級、二級、三及實驗室安全國家標準，實驗室分為一級、二級、三級、四級，級、四級，表表3-23-2。 一級、二級實驗室不得從事高致病性病原微生物實驗活動；三一級、二級實驗室不得從事高致病性病原微生

19、物實驗活動；三級、四級從事高致病性病原微生物實驗活動。級、四級從事高致病性病原微生物實驗活動。 從事高致病性病原微生物相關(guān)實驗活動應當有名以上的工作從事高致病性病原微生物相關(guān)實驗活動應當有名以上的工作人員共同進行。在同一個實驗室的同一個獨立安全區(qū)域內(nèi)，只能同人員共同進行。在同一個實驗室的同一個獨立安全區(qū)域內(nèi)，只能同時從事一種高致病性病原微生物的相關(guān)實驗活動。應有健全的安全時從事一種高致病性病原微生物的相關(guān)實驗活動。應有健全的安全保衛(wèi)制度保衛(wèi)制度 。 實驗室工作人員應掌握實驗室技術(shù)規(guī)范、操作規(guī)程、生物安全實驗室工作人員應掌握實驗室技術(shù)規(guī)范、操作規(guī)程、生物安全防護知識和實際操作技能。應有符合要求的

20、防護用品，應建立健康防護知識和實際操作技能。應有符合要求的防護用品，應建立健康檔案；進行預防接種。檔案；進行預防接種。 實驗室應有科學、嚴格的管理制度，定期對實驗室設施設備、實驗室應有科學、嚴格的管理制度，定期對實驗室設施設備、材料等進行檢查、維護和更新，應對廢水、廢氣以及其他廢物進行材料等進行檢查、維護和更新，應對廢水、廢氣以及其他廢物進行合理處置，防止環(huán)境污染。合理處置，防止環(huán)境污染。 實驗室實驗室感染的控制感染的控制以及以及監(jiān)督監(jiān)督和和法律責任法律責任實驗室感染控制工作包括：實驗室感染控制工作包括：定期檢查實驗室的生物安全防護、定期檢查實驗室的生物安全防護、病原微生物菌（毒）種和樣本保存與使用、安全操作、實驗病原微生物菌（毒）種和樣本保存與使用、安全操作、實驗室排放的廢水和廢氣以及其他飛舞處置等實施情況。室排放的廢水和廢氣以及其他飛舞處置等實施情況。高致病性病原微生物泄漏時，預防、控制措施高致病性病原微生物泄漏時，預防、控制措施包括：封閉被病原微生物污染的實驗室或可能造成病原微包括：封閉被病原微生物污染的實驗室或可能造成病原微生物擴散