1、一、基因工程的概念理解一、基因工程的概念理解1.1.供體：提供供體：提供_2.2.操作環(huán)境：操作環(huán)境：_3.3.操作水平：操作水平：_水平水平4.4.原理：原理：_5.5.受體：表達目的基因受體：表達目的基因6.6.本質(zhì)：性狀在本質(zhì)：性狀在_體內(nèi)表達體內(nèi)表達7.7.優(yōu)點：克服優(yōu)點：克服_障礙，定向改造生物障礙，定向改造生物_目的基因目的基因體外體外分子分子基因重組基因重組受體受體遠緣雜交不親和遠緣雜交不親和性狀性狀二、二、DNADNA重組技術(shù)的基本工具重組技術(shù)的基本工具1.1.限制性核酸內(nèi)切酶限制性核酸內(nèi)切酶( (簡稱：限制酶簡稱：限制酶) )(1)(1)來源：主要從來源：主要從_生物中分離純

2、化出來。生物中分離純化出來。(2)(2)作用：識別特定的作用：識別特定的_并切開相應(yīng)兩個核苷酸之并切開相應(yīng)兩個核苷酸之間的間的_。(3)(3)結(jié)果：產(chǎn)生結(jié)果：產(chǎn)生_或平末端。或平末端。2.DNA2.DNA連接酶連接酶(1)(1)種類：按來源可分為種類：按來源可分為EcoliDNAEcoliDNA連接酶和連接酶和T T4 4DNADNA連接酶。連接酶。(2)(2)作用：在兩個核苷酸之間形成作用：在兩個核苷酸之間形成_以連接以連接_。原核原核核苷酸序列核苷酸序列磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵黏性末端黏性末端磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵DNADNA片段片段兩段兩段3.3.載體載體(1)(1)種類：種類：_、噬菌體的衍

3、生物、動植物病毒等。噬菌體的衍生物、動植物病毒等。(2)(2)質(zhì)粒特點質(zhì)粒特點【點撥點撥】提取目的基因和切割載體使用同一種限制酶，目的是提取目的基因和切割載體使用同一種限制酶，目的是能形成相同的黏性末端，形成重組能形成相同的黏性末端，形成重組DNADNA分子。分子。 質(zhì)粒質(zhì)粒能能_；有一個至多個有一個至多個_；有特殊的有特殊的_。自我復(fù)制自我復(fù)制限制酶切割位點限制酶切割位點標(biāo)記基因標(biāo)記基因三、基因工程的基本操作程序三、基因工程的基本操作程序1.1.目的基因的獲取目的基因的獲取(1)(1)目的基因：編碼蛋白質(zhì)的目的基因：編碼蛋白質(zhì)的_。(2)(2)獲取方法；獲取方法； 從從_中獲取；中獲取； 利

4、用利用_擴增目的基因；擴增目的基因； 通過通過_用化學(xué)方法直接人工合成。用化學(xué)方法直接人工合成。基因基因基因文庫基因文庫PCRPCR技術(shù)技術(shù)DNADNA合成儀合成儀2.2.基因表達載體的構(gòu)建基因表達載體的構(gòu)建基因工程的核心基因工程的核心(1)(1)由圖可知載體的組成：由圖可知載體的組成：_、啟動子、終止子、啟動子、終止子、_。(2)(2)構(gòu)建目的構(gòu)建目的: :使使_在在_中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代；一代；使使_能夠表達和發(fā)揮作用。能夠表達和發(fā)揮作用。3.3.將目的基因?qū)胧荏w細胞將目的基因?qū)胧荏w細胞(1)(1)轉(zhuǎn)化：目的基因進入受體細胞內(nèi)轉(zhuǎn)化：目的基因進入受

5、體細胞內(nèi), ,并且在受體細胞內(nèi)維持并且在受體細胞內(nèi)維持_的過程。的過程。目的基因目的基因標(biāo)記基因標(biāo)記基因目的基因目的基因受體細胞受體細胞目的基因目的基因穩(wěn)定和表達穩(wěn)定和表達(2)(2)常用方法：常用方法： 導(dǎo)入植物細胞：導(dǎo)入植物細胞：_、基因槍法、花粉管通、基因槍法、花粉管通 道法；道法； 導(dǎo)入動物細胞：導(dǎo)入動物細胞：_； 導(dǎo)入微生物細胞：感受態(tài)細胞法導(dǎo)入微生物細胞：感受態(tài)細胞法( (或或CaCa2+2+處理法處理法) )。4.4.目的基因的檢測與鑒定目的基因的檢測與鑒定(1)_(1)_目的基因的有無目的基因的有無(2)(2)分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù)_(3)_(3)_目的基因是否翻譯目的基因是

6、否翻譯(4)(4)生物性狀的表達與否生物性狀的表達與否目的基因是否表達目的基因是否表達( (個體水平個體水平) )農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射技術(shù)顯微注射技術(shù)DNADNA分子雜交技術(shù)分子雜交技術(shù)目的基因是否轉(zhuǎn)錄目的基因是否轉(zhuǎn)錄抗原抗原抗體雜交抗體雜交分分子子水水平平【點撥點撥】啟動子、終止子與起始密碼子、終止密碼子不同：啟啟動子、終止子與起始密碼子、終止密碼子不同：啟動子、終止子在動子、終止子在DNA DNA 上上, ,在遺傳信息轉(zhuǎn)錄時起調(diào)控作用；而起在遺傳信息轉(zhuǎn)錄時起調(diào)控作用；而起始密碼子、終止密碼子在始密碼子、終止密碼子在mRNAmRNA上上, ,在翻譯時起作用在翻譯時起作用, ,決定

7、翻譯的決定翻譯的開始和結(jié)束。開始和結(jié)束。 基因工程的工具基因工程的工具1.1.與與DNADNA相關(guān)的酶相關(guān)的酶(1)(1)五種五種DNADNA相關(guān)酶的比較：相關(guān)酶的比較：作用底物作用底物作用部位作用部位形成產(chǎn)物形成產(chǎn)物限制酶限制酶DNADNA連接酶連接酶DNADNA聚合酶聚合酶DNADNA解旋酶解旋酶DNADNA( (水解水解) )酶酶DNADNA分子分子磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵黏性末端或平末端黏性末端或平末端DNADNA片段片段磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵重組重組DNADNA分子分子脫氧核苷酸脫氧核苷酸磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵子代子代DNADNADNADNA分子分子DNADNA分子分子堿基對間的氫鍵堿基對間

8、的氫鍵磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵形成脫氧核苷形成脫氧核苷酸單鏈酸單鏈游離的脫氧核苷酸游離的脫氧核苷酸(2)(2)限制酶和限制酶和DNADNA連接酶之間的關(guān)系圖示：連接酶之間的關(guān)系圖示：2.2.作為載體的條件作為載體的條件條件條件適應(yīng)性適應(yīng)性穩(wěn)定并能復(fù)制穩(wěn)定并能復(fù)制目的基因穩(wěn)定存在且數(shù)量目的基因穩(wěn)定存在且數(shù)量可擴大可擴大有一個至多個限制酶切割有一個至多個限制酶切割位點位點可攜帶多個或多種外源基可攜帶多個或多種外源基因因具有特殊的標(biāo)記基因具有特殊的標(biāo)記基因便于重組便于重組DNADNA的鑒定和選擇的鑒定和選擇【高考警示鐘高考警示鐘】1.1.切割質(zhì)粒需使用限制酶切割質(zhì)粒需使用限制酶1 1次，切割目的基因則需

9、要使用相同的次，切割目的基因則需要使用相同的限制酶限制酶2 2次。因為質(zhì)粒是環(huán)狀次。因為質(zhì)粒是環(huán)狀DNADNA，而目的基因在，而目的基因在DNADNA分子鏈上。分子鏈上。 2.2.質(zhì)粒質(zhì)粒DNADNA分子上限制酶切割位點的選擇必須保證至少有一個標(biāo)分子上限制酶切割位點的選擇必須保證至少有一個標(biāo)記基因是完整的，如果標(biāo)記基因全部被切開則不便于鑒定與選記基因是完整的，如果標(biāo)記基因全部被切開則不便于鑒定與選擇。擇。3.3.基因工程中的載體與細胞膜上物質(zhì)運輸?shù)妮d體不同，基因工程基因工程中的載體與細胞膜上物質(zhì)運輸?shù)妮d體不同，基因工程中的載體是中的載體是DNADNA分子，能將目的基因?qū)胧荏w細胞內(nèi)，膜載體是分

10、子，能將目的基因?qū)胧荏w細胞內(nèi)，膜載體是蛋白質(zhì)，與細胞膜的通透性有關(guān)。蛋白質(zhì)，與細胞膜的通透性有關(guān)。【典例訓(xùn)練典例訓(xùn)練1 1】(2011(2011浙江高考浙江高考) )將將adaada（腺苷酸脫氨酶基因）（腺苷酸脫氨酶基因）通過質(zhì)粒通過質(zhì)粒pET28bpET28b導(dǎo)入大腸桿菌并成功表達腺苷酸脫氨酶。下列導(dǎo)入大腸桿菌并成功表達腺苷酸脫氨酶。下列敘述錯誤的是敘述錯誤的是( )( )A.A.每個大腸桿菌細胞至少含一個重組質(zhì)粒每個大腸桿菌細胞至少含一個重組質(zhì)粒B.B.每個重組質(zhì)粒至少含一個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點每個重組質(zhì)粒至少含一個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點C.C.每個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點至少插入

11、一個每個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點至少插入一個adaadaD.D.每個插入的每個插入的adaada至少表達一個腺苷酸脫氨酶分子至少表達一個腺苷酸脫氨酶分子【解題指南解題指南】1.1.知識儲備：知識儲備：（1 1）重組質(zhì)粒必須具備的條件。）重組質(zhì)粒必須具備的條件。（2 2）目的基因?qū)氤晒Φ臉?biāo)志。）目的基因?qū)氤晒Φ臉?biāo)志。2.2.解題關(guān)鍵：解題關(guān)鍵：（1 1）明確每個重組質(zhì)粒至少含一個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點。）明確每個重組質(zhì)粒至少含一個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點。（2 2）由題干信息）由題干信息“成功表達腺苷酸脫氨酶成功表達腺苷酸脫氨酶”推出目的基因?qū)胪瞥瞿康幕驅(qū)氤晒Γ⒛鼙磉_腺苷酸脫氨酶分

12、子。成功，并能表達腺苷酸脫氨酶分子。【解析解析】選選C C。adaada為目的基因，大腸桿菌為受體細胞，將目的為目的基因，大腸桿菌為受體細胞，將目的基因?qū)氪竽c桿菌時如果能成功表達說明每個大腸桿菌細胞至基因?qū)氪竽c桿菌時如果能成功表達說明每個大腸桿菌細胞至少含一個重組質(zhì)粒；要讓目的基因與質(zhì)粒形成重組質(zhì)粒，兩者少含一個重組質(zhì)粒；要讓目的基因與質(zhì)粒形成重組質(zhì)粒，兩者必須用同種限制性核酸內(nèi)切酶切割，所以每個重組質(zhì)粒至少含必須用同種限制性核酸內(nèi)切酶切割，所以每個重組質(zhì)粒至少含一個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點；質(zhì)粒作為載體的條件之一是一個限制性核酸內(nèi)切酶識別位點；質(zhì)粒作為載體的條件之一是有多種限制性核酸內(nèi)切

13、酶的識別位點，但每種限制性核酸內(nèi)切有多種限制性核酸內(nèi)切酶的識別位點，但每種限制性核酸內(nèi)切酶只有一個識別位點，只能插入一個目的基因（酶只有一個識別位點，只能插入一個目的基因（adaada）；）；adaada導(dǎo)導(dǎo)入大腸桿菌成功的標(biāo)志是表達腺苷酸脫氨酶，因此每個插入的入大腸桿菌成功的標(biāo)志是表達腺苷酸脫氨酶，因此每個插入的adaada至少表達一個腺苷酸脫氨酶分子。至少表達一個腺苷酸脫氨酶分子。【變式訓(xùn)練變式訓(xùn)練】如圖為如圖為DNADNA分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化，分子在不同酶的作用下所發(fā)生的變化，圖中依次表示限制性核酸內(nèi)切酶、圖中依次表示限制性核酸內(nèi)切酶、DNADNA聚合酶、聚合酶、DNADNA

14、連接酶、解連接酶、解旋酶作用的正確順序是旋酶作用的正確順序是( )( )A A B B C C D D 【解析解析】選選C C。限制性核酸內(nèi)切酶是把。限制性核酸內(nèi)切酶是把DNADNA鏈切開，可用表示；鏈切開，可用表示；DNADNA聚合酶用于聚合酶用于DNADNA分子的復(fù)制，用表示；分子的復(fù)制，用表示；DNADNA連接酶把限制連接酶把限制性核酸內(nèi)切酶切開的切口連接起來，用表示；解旋酶是把性核酸內(nèi)切酶切開的切口連接起來，用表示；解旋酶是把DNADNA雙鏈解開，用表示。雙鏈解開，用表示。 基因工程的基本操作程序基因工程的基本操作程序1.1.目的基因的獲取目的基因的獲取(1)(1)從基因文庫中獲取目的

15、基因：如從基因組文庫或從基因文庫中獲取目的基因：如從基因組文庫或cDNAcDNA文庫文庫中獲取。中獲取。(2)(2)利用利用PCRPCR技術(shù)擴增目的基因：利用技術(shù)擴增目的基因：利用DNADNA復(fù)制的原理在體外特復(fù)制的原理在體外特異性的復(fù)制某異性的復(fù)制某DNADNA片段以獲得呈指數(shù)方式增加的目的基因。片段以獲得呈指數(shù)方式增加的目的基因。(3)(3)人工合成法：通過人工合成法：通過DNADNA合成儀用化學(xué)方法直接人工合成。合成儀用化學(xué)方法直接人工合成。2.2.基因表達載體的構(gòu)建基因表達載體的構(gòu)建(1)(1)基因表達載體組成：基因表達載體組成：啟動子、終止子：是基因轉(zhuǎn)錄的起點和終點，在轉(zhuǎn)錄過程中啟動

16、子、終止子：是基因轉(zhuǎn)錄的起點和終點，在轉(zhuǎn)錄過程中起調(diào)控作用。起調(diào)控作用。標(biāo)記基因：作用是為了鑒別受體細胞中是否含有目的基因標(biāo)記基因：作用是為了鑒別受體細胞中是否含有目的基因, ,從而將含有目的基因的細胞篩選出來從而將含有目的基因的細胞篩選出來, ,如抗生素抗性基因。如抗生素抗性基因。目的基因：能控制特定性狀的外源基因。目的基因：能控制特定性狀的外源基因。(2)(2)基因表達載體的構(gòu)建步驟：基因表達載體的構(gòu)建步驟：載體載體( (質(zhì)粒質(zhì)粒) )DNADNA分子分子( (含目的基因含目的基因) )同一種限制酶切割同一種限制酶切割帶有黏性帶有黏性末端切口末端切口帶有相同黏性末端帶有相同黏性末端的目的基

17、因片段的目的基因片段重組重組DNA(DNA(環(huán)狀重組質(zhì)粒環(huán)狀重組質(zhì)粒) )DNADNA連接酶連接酶3.3.將目的基因?qū)胧荏w細胞將目的基因?qū)胧荏w細胞生物種類生物種類植物植物動物動物微生物微生物常用方法常用方法受體細胞受體細胞轉(zhuǎn)化過程轉(zhuǎn)化過程農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法顯微注射技術(shù)顯微注射技術(shù)感受態(tài)細胞法感受態(tài)細胞法體細胞體細胞受精卵受精卵原核細胞原核細胞將目的基因插將目的基因插入到入到TiTi質(zhì)粒的質(zhì)粒的T-DNAT-DNA上上農(nóng)農(nóng)桿菌桿菌導(dǎo)入植導(dǎo)入植物細胞物細胞整合整合到受體細胞的到受體細胞的DNADNA上上表達表達將含有目的基將含有目的基因的表達載體因的表達載體提純提純?nèi)÷讶÷? (受受精卵

18、精卵)顯微注顯微注射射受精卵發(fā)受精卵發(fā)育育獲得具有獲得具有新性狀的動物新性狀的動物CaCa2+2+ 處理細處理細胞胞感受態(tài)細感受態(tài)細胞胞重組表達重組表達載體載體DNADNA分子分子與感受態(tài)細與感受態(tài)細胞混合胞混合感感受態(tài)細胞吸受態(tài)細胞吸收收DNADNA分子分子4.4.目的基因的檢測與鑒定目的基因的檢測與鑒定【典例訓(xùn)練典例訓(xùn)練2 2】（20112011山東高考改編）人類疾病的轉(zhuǎn)基因動山東高考改編）人類疾病的轉(zhuǎn)基因動物模型常用于致病機理的探討及治療藥物的篩選。利用正常大物模型常用于致病機理的探討及治療藥物的篩選。利用正常大鼠制備遺傳性高血壓轉(zhuǎn)基因模型大鼠的流程如圖所示。鼠制備遺傳性高血壓轉(zhuǎn)基因模型

19、大鼠的流程如圖所示。（1 1）圖中的高血壓相關(guān)基因作為）圖中的高血壓相關(guān)基因作為_，質(zhì)粒作為，質(zhì)粒作為_，二，二者需用者需用_切割后連接成重組載體，該過程與質(zhì)粒上含有切割后連接成重組載體，該過程與質(zhì)粒上含有_有關(guān)。有關(guān)。（2 2）重組）重組DNADNA導(dǎo)入的受體細胞是大鼠的導(dǎo)入的受體細胞是大鼠的_細胞，常用的方法細胞，常用的方法是是_。在。在DNADNA重組過程中核心的操作是重組過程中核心的操作是_。（3 3）子代大鼠如果）子代大鼠如果_和和_，即可分別在分子水平和個，即可分別在分子水平和個體水平上說明高血壓相關(guān)基因已成功表達，然后可用其建立高血體水平上說明高血壓相關(guān)基因已成功表達，然后可用其

20、建立高血壓轉(zhuǎn)基因動物模型。壓轉(zhuǎn)基因動物模型。（4 4）在上述轉(zhuǎn)基因大鼠的培育過程中，所用到的主要胚胎工程技）在上述轉(zhuǎn)基因大鼠的培育過程中，所用到的主要胚胎工程技術(shù)是體外受精、早期胚胎培養(yǎng)和術(shù)是體外受精、早期胚胎培養(yǎng)和_。【解題指南解題指南】1.1.考查實質(zhì)：本題主要考查基因工程的操作程序，涉及到胚胎考查實質(zhì)：本題主要考查基因工程的操作程序，涉及到胚胎工程技術(shù)。工程技術(shù)。2.2.解題關(guān)鍵：高血壓相關(guān)基因與質(zhì)粒形成重組解題關(guān)鍵：高血壓相關(guān)基因與質(zhì)粒形成重組DNADNA后導(dǎo)入到受后導(dǎo)入到受精卵細胞中，是精卵細胞中，是DNADNA重組技術(shù)。重組技術(shù)。【解析解析】（1 1）根據(jù)題干中）根據(jù)題干中“利用正

21、常大鼠制備遺傳性高血壓利用正常大鼠制備遺傳性高血壓轉(zhuǎn)基因模型大鼠轉(zhuǎn)基因模型大鼠”推出，目的基因為與高血壓相關(guān)的基因。為推出，目的基因為與高血壓相關(guān)的基因。為使目的基因與載體結(jié)合需用同一種限制性核酸內(nèi)切酶切割。使目的基因與載體結(jié)合需用同一種限制性核酸內(nèi)切酶切割。（2 2）重組）重組DNADNA分子導(dǎo)入受體細胞中，植物細胞、動物細胞和微分子導(dǎo)入受體細胞中，植物細胞、動物細胞和微生物細胞導(dǎo)入目的基因的方式不同，動物細胞主要用顯微注射生物細胞導(dǎo)入目的基因的方式不同，動物細胞主要用顯微注射技術(shù)將重組技術(shù)將重組DNADNA分子導(dǎo)入細胞中。基因工程操作的第二步，即分子導(dǎo)入細胞中。基因工程操作的第二步，即基因

22、表達載體的構(gòu)建是整個過程中的關(guān)鍵。基因表達載體的構(gòu)建是整個過程中的關(guān)鍵。（3 3）如果檢測到相應(yīng)蛋白質(zhì)，即可在分子水平說明目的基因）如果檢測到相應(yīng)蛋白質(zhì)，即可在分子水平說明目的基因已經(jīng)表達，如果檢測子代大鼠已患高血壓，即可在個體水平說已經(jīng)表達，如果檢測子代大鼠已患高血壓，即可在個體水平說明目的基因已經(jīng)表達。明目的基因已經(jīng)表達。 (4)(4)在上述轉(zhuǎn)基因大鼠的培育過程中，所用到的主要胚胎工程在上述轉(zhuǎn)基因大鼠的培育過程中，所用到的主要胚胎工程技術(shù)是體外受精、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植。早期胚胎需要移技術(shù)是體外受精、早期胚胎培養(yǎng)和胚胎移植。早期胚胎需要移植入體內(nèi)，以提供一個穩(wěn)定的環(huán)境和充足的營養(yǎng)供應(yīng)。植

23、入體內(nèi)，以提供一個穩(wěn)定的環(huán)境和充足的營養(yǎng)供應(yīng)。答案：答案：（1 1）目的基因）目的基因 載體載體 同一種限制性核酸內(nèi)切酶同一種限制性核酸內(nèi)切酶 限限制性核酸內(nèi)切酶的切割位點制性核酸內(nèi)切酶的切割位點（2 2）受精卵）受精卵 顯微注射技術(shù)顯微注射技術(shù) 基因表達載體的構(gòu)建基因表達載體的構(gòu)建（3 3）檢測到相應(yīng)蛋白質(zhì)）檢測到相應(yīng)蛋白質(zhì) 已患高血壓已患高血壓（4 4）胚胎移植）胚胎移植【互動探究互動探究】（1 1）如果把鼠換成植物，則導(dǎo)入受體細胞的常）如果把鼠換成植物，則導(dǎo)入受體細胞的常用方法改變嗎？用方法改變嗎？提示：提示：變成農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。變成農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法。分析：分析：植物細胞與動物細胞具有不同的特

24、點，導(dǎo)入的方法是根植物細胞與動物細胞具有不同的特點，導(dǎo)入的方法是根據(jù)操作的需要進行的，如利用農(nóng)桿菌易感染植物的特性。據(jù)操作的需要進行的，如利用農(nóng)桿菌易感染植物的特性。（2 2）分子水平檢測除蛋白質(zhì)檢測外還有什么檢測方法）分子水平檢測除蛋白質(zhì)檢測外還有什么檢測方法? ?提示：提示：DNADNA分子雜交、核酸分子雜交。分子雜交、核酸分子雜交。分析：分析：利用利用DNADNA探針檢測目的基因或相應(yīng)的探針檢測目的基因或相應(yīng)的mRNAmRNA存在與否，說存在與否，說明目的基因是否存在或是否轉(zhuǎn)錄。明目的基因是否存在或是否轉(zhuǎn)錄。1.1.（20122012安徽省示范高中模擬）下列關(guān)于基因工程常用的工具酶安徽省

25、示范高中模擬）下列關(guān)于基因工程常用的工具酶的說法正確的是（的說法正確的是（ ）A A限制酶對雙鏈限制酶對雙鏈DNADNA分子有特定的識別序列和切割位點分子有特定的識別序列和切割位點B BDNADNA連接酶對單、雙鏈連接酶對單、雙鏈DNADNA分子都能起作用分子都能起作用C C逆轉(zhuǎn)錄酶不是逆轉(zhuǎn)錄酶不是DNADNA聚合酶聚合酶D DPCRPCR技術(shù)需要用到解旋酶和耐高溫的技術(shù)需要用到解旋酶和耐高溫的DNADNA聚合酶聚合酶【解析解析】選選A A。本題主要考查基因工程的原理。限制酶具有特異性，。本題主要考查基因工程的原理。限制酶具有特異性，對雙鏈對雙鏈DNADNA分子有特定的識別序列和切割位點，故分

26、子有特定的識別序列和切割位點，故A A正確；正確；DNADNA連接連接酶是對雙鏈酶是對雙鏈DNADNA分子都能起作用，故分子都能起作用，故B B錯；逆轉(zhuǎn)錄酶催化錯；逆轉(zhuǎn)錄酶催化DNADNA合成，合成，應(yīng)是應(yīng)是DNADNA聚合酶，故聚合酶，故C C錯；錯；PCRPCR技術(shù)不需用解旋酶，故技術(shù)不需用解旋酶，故D D錯。錯。2.2.（20122012蕭山模擬）下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是蕭山模擬）下列有關(guān)基因工程的敘述，正確的是 ( )( )A A載體上的標(biāo)記基因有利于促進目的基因在受體細胞中表達載體上的標(biāo)記基因有利于促進目的基因在受體細胞中表達B B用反轉(zhuǎn)錄法合成胰島素基因時可以從胰島用反轉(zhuǎn)錄

27、法合成胰島素基因時可以從胰島B B細胞中提取相關(guān)的細胞中提取相關(guān)的模板模板C C目的基因?qū)胧荏w細胞后，引起受體細胞的變異屬于基因突變目的基因?qū)胧荏w細胞后，引起受體細胞的變異屬于基因突變D D限制性核酸內(nèi)切酶和限制性核酸內(nèi)切酶和DNADNA聚合酶是基因工程中兩類常用的工具聚合酶是基因工程中兩類常用的工具酶酶【解析解析】選選B B。載體上的標(biāo)記基因是為了便于檢測目的基因是否。載體上的標(biāo)記基因是為了便于檢測目的基因是否導(dǎo)入受體細胞；目的基因?qū)胧荏w細胞后，引起受體細胞的變導(dǎo)入受體細胞；目的基因?qū)胧荏w細胞后，引起受體細胞的變異屬于基因重組；基因工程中兩類常用的工具酶是限制性核酸異屬于基因重組；基

28、因工程中兩類常用的工具酶是限制性核酸內(nèi)切酶和內(nèi)切酶和DNADNA連接酶。連接酶。3.3.下列關(guān)于基因工程的敘述中，正確的是下列關(guān)于基因工程的敘述中，正確的是( )( )A A目的基因的核苷酸序列都是已知的目的基因的核苷酸序列都是已知的B B接受外源基因的轉(zhuǎn)基因植物成為一個新物種接受外源基因的轉(zhuǎn)基因植物成為一個新物種C C可從人肝臟細胞中提取胰島素原的可從人肝臟細胞中提取胰島素原的mRNAmRNA，反轉(zhuǎn)錄獲得人胰，反轉(zhuǎn)錄獲得人胰島素原基因島素原基因D D培育轉(zhuǎn)基因動物時常選擇受精卵作為受體細胞培育轉(zhuǎn)基因動物時常選擇受精卵作為受體細胞【解析解析】選選D D。目的基因即我們所需要的基因，有的目的基因

29、。目的基因即我們所需要的基因，有的目的基因的核苷酸序列是已知的，但許多目的基因的核苷酸序列是未的核苷酸序列是已知的，但許多目的基因的核苷酸序列是未知的。接受外源基因的生物只是發(fā)生了基因重組，并未與原知的。接受外源基因的生物只是發(fā)生了基因重組，并未與原物種產(chǎn)生生殖隔離，故并沒有成為一個新物種。肝臟細胞是物種產(chǎn)生生殖隔離，故并沒有成為一個新物種。肝臟細胞是高度分化的細胞，其核基因中的人胰島素原基因不表達，故高度分化的細胞，其核基因中的人胰島素原基因不表達，故不可能從人肝臟細胞中提取胰島素原的不可能從人肝臟細胞中提取胰島素原的mRNAmRNA；由于動物體細；由于動物體細胞的全能性不易表達，所以培育轉(zhuǎn)

30、基因動物時常選擇受精卵胞的全能性不易表達，所以培育轉(zhuǎn)基因動物時常選擇受精卵作為受體細胞。作為受體細胞。4.4.如圖為如圖為DNADNA分子的某一片段，其中分別表示某種酶的分子的某一片段，其中分別表示某種酶的作用部位，則相應(yīng)的酶依次是作用部位，則相應(yīng)的酶依次是( )( )A.DNAA.DNA連接酶、限制酶、解旋酶連接酶、限制酶、解旋酶B.B.限制酶、解旋酶、限制酶、解旋酶、DNADNA連接酶連接酶C.C.解旋酶、限制酶、解旋酶、限制酶、DNADNA連接酶連接酶D.D.限制酶、限制酶、DNADNA連接酶、解旋酶連接酶、解旋酶【解析解析】選選C C。使堿基對內(nèi)氫鍵斷裂的是解旋酶；限制酶將特。使堿基對

31、內(nèi)氫鍵斷裂的是解旋酶；限制酶將特定部位的相鄰兩脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開；連接定部位的相鄰兩脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷開；連接DNADNA片段間磷酸二酯鍵的是片段間磷酸二酯鍵的是DNADNA連接酶。連接酶。5.(20115.(2011海南高考海南高考) )回答有關(guān)基因工程的問題：回答有關(guān)基因工程的問題：（1 1）構(gòu)建基因工程表達載體時，用不同類型的限制酶切割）構(gòu)建基因工程表達載體時，用不同類型的限制酶切割DNADNA后，后，可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生_末端。若要在限制酶切割末端。若要在限制酶切割目的基因和質(zhì)粒后使其直接進行連接，則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生目的基因和

32、質(zhì)粒后使其直接進行連接，則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生_（相同、不同）黏性末端的限制酶。（相同、不同）黏性末端的限制酶。（2 2）利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時，構(gòu)建的表達載體含有人胰）利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時，構(gòu)建的表達載體含有人胰島素基因及其啟動子等，其中啟動子的作用是島素基因及其啟動子等，其中啟動子的作用是_。在用表達。在用表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時，常用載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時，常用_處理大腸桿菌，以利于表達載處理大腸桿菌，以利于表達載體進入；為了檢測胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了體進入；為了檢測胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNAmRNA，可用標(biāo)記的胰，可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與島素基因片段作探針與mRNAmRN

33、A雜交，該雜交技術(shù)稱為雜交，該雜交技術(shù)稱為_。為了。為了檢測胰島素基因轉(zhuǎn)錄的檢測胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNAmRNA是否翻譯成是否翻譯成_，常用抗原，常用抗原抗體抗體雜交技術(shù)。雜交技術(shù)。（3 3）如果要將某目的基因通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細胞，）如果要將某目的基因通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細胞，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌先要將目的基因插入農(nóng)桿菌TiTi質(zhì)粒的質(zhì)粒的_中，然后用該農(nóng)中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細胞，通過桿菌感染植物細胞，通過DNADNA重組將目的基因插入植物細胞的重組將目的基因插入植物細胞的_上。上。【解析解析】（1 1）限制酶切割產(chǎn)生兩種末端：黏性末端和平末端；）限制酶切割產(chǎn)生兩種末端：黏性末端和平末端；若用若用DNADNA連接酶連接兩個末端，兩個末端必須是相同的。連接酶連接兩個末端，兩個末端必須是相同的。（2 2）基因工程檢測的方法：檢測目的基因是否導(dǎo)入，使用）基因工程檢測的方法：檢測目的基因是否導(dǎo)入，使用DNADNA分子雜交技術(shù)；檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄，使用分子雜交技術(shù)；分子雜交技術(shù)；檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄，使用分子雜交技術(shù)；檢測是否形成蛋白質(zhì)，使用抗原檢測是否形成蛋白質(zhì)，使用抗原抗體