1、實踐十培養基的制作與接種一、教學目標： 解釋：培養基、接種 說出培養基配制的原則。 會配制“肉湯培養基”和“馬鈴薯葡萄糖培養基” 會用劃蛇形線法蛇形線法接種和點種法點種法接種。互動A 培養基是（）培養基是（） 配制培養基的四原則（）（）（）配制培養基的四原則（）（）（）（）（） 培養基有多少種？培養基有多少種？ 專性需氧菌在液體培養基呈（專性需氧菌在液體培養基呈（ ）生長生長1.1. 炭疽桿菌在肉湯培養基上如何生長？炭疽桿菌在肉湯培養基上如何生長？互動A6.6.微生物在固體培養基上如何生長？微生物在固體培養基上如何生長？7.7.微生物在半固體培養基上如何生微生物在半固體培養基上如何生長？長？8

2、.8.培養結核桿菌需加（培養結核桿菌需加（ ），應用），應用（ ）培養基）培養基9.9.培養石油分解菌用（培養石油分解菌用（ ）培養基，）培養基，加（加（ ）互動A10.10.分離放線菌時應在培養基中加分離放線菌時應在培養基中加（ ），目的是（），目的是（ ）。）。11.11.從膿液中分離葡萄球菌應在培從膿液中分離葡萄球菌應在培養基中加（養基中加（ ），目的是（），目的是（ ）12.12.區別大腸埃希菌與產氣桿菌用區別大腸埃希菌與產氣桿菌用（ ）培養基，屬（）培養基，屬（ ）培養基）培養基13.13.庖肉培養基專用于（庖肉培養基專用于（ ）為（）為（ ）培養基，屬（培養基，屬（ ）培養基）培養

3、基定義培養基：人工配制的供給細菌或其它微生物生長繁殖的營養物質。（二）配制原則（二）配制原則： 含有一定配比的營養物含有一定配比的營養物質質 合適的合適的pHpH值值 本身是無菌的本身是無菌的 合適的物理狀態合適的物理狀態（三）種類：三）種類： 1.1.按物理狀態分：按物理狀態分： 液體培養基液體培養基 無瓊脂無瓊脂 固體培養基固體培養基 1.5-2%1.5-2% 半固體培養基半固體培養基 0.2-0.5%0.2-0.5%、2.2.按用途分：按用途分： 基礎培養基基礎培養基 加富培養基加富培養基 選擇培養基選擇培養基 鑒別培養基鑒別培養基3.3.按營養物質來源分：按營養物質來源分： 天然培養基

4、：天然培養基： 馬鈴薯、牛肉膏馬鈴薯、牛肉膏 合成培養基：合成培養基： 高氏一號、查氏培養基高氏一號、查氏培養基常用培養基種類常用培養基種類厭氧培養厭氧培養基基基礎培養基基礎培養基增菌培養基增菌培養基選擇培養基選擇培養基鑒別培養基鑒別培養基（四）人工培養細菌的用途（四）人工培養細菌的用途醫學中的應用醫學中的應用工農業工農業生產中的應用生產中的應用基因基因工程中的應用工程中的應用感染性疾病的診斷細菌學研究生物制品的制備制造各種產品處理垃圾制造菌肥農藥等表達重組DAN制備產品（五）舉例：（五）舉例：培養細菌培養細菌 肉湯培養基肉湯培養基 營養肉湯培養基營養肉湯培養基 3737 一天一天 pHpH值

5、：值：7.0-7.27.0-7.2培養霉菌培養霉菌 沙保培養基沙保培養基 馬鈴薯葡萄糖培養基馬鈴薯葡萄糖培養基 22-24 22-24 一周一周 pHpH值：值：5-65-6培養放線菌培養放線菌 高氏一號高氏一號 28 28 3-4 3-4天天 pHpH值：值：7.4-7.67.4-7.6培養酵母菌培養酵母菌 麥芽汁培養基麥芽汁培養基 22-24 22-24 4-6 4-6天天 pHpH值：值：5-65-6互動B1.1.細菌在液體培養基中生長現象為細菌在液體培養基中生長現象為( )( )2.2.細菌在固體培養基中生長現象為細菌在固體培養基中生長現象為( )( )3.3.細菌在半固體培養基中生長

6、現象細菌在半固體培養基中生長現象為為( )( )4.4.如何用肉湯瓊脂半固體培養基區如何用肉湯瓊脂半固體培養基區別大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌？別大腸埃希菌和金黃色葡萄球菌？互動B5.5.適合細菌的培養基是（適合細菌的培養基是（ ）6.6.肉湯培養基，肉湯瓊脂培養肉湯培養基，肉湯瓊脂培養基和肉湯半固體培養基有何區基和肉湯半固體培養基有何區別？別？二、細菌的生長情況二、細菌的生長情況固體培養基中固體培養基中菌落（菌落（S型）型）菌苔菌苔菌落（菌落（R型）型）液體培養基中液體培養基中半固體體培養基中半固體體培養基中混濁生長沿穿刺線生長生長無鞭毛無鞭毛細菌細菌無鞭毛無鞭毛細菌細菌互動C1.1.培養一般

7、細菌通常用（培養一般細菌通常用（ ）培）培養基養基2.2.培養一般放線菌通常用（培養一般放線菌通常用（ ）培養基培養基3.3.培養一般真菌通常用（培養一般真菌通常用（ ）培）培養基養基4.4.瓊脂的作用是（瓊脂的作用是（ ）三三 培養基的配置培養基的配置.wmv.wmv（一）目標：（一）目標： 學會配制肉湯瓊脂培養基學會配制肉湯瓊脂培養基 熟悉配制的原則熟悉配制的原則1.1.掌握高壓滅菌鍋的使用方法掌握高壓滅菌鍋的使用方法（二）配方牛肉膏牛肉膏3g 3g 蛋白胨蛋白胨10g10g氯化鈉氯化鈉5g 5g 瓊脂瓊脂2-5g2-5g蒸餾水蒸餾水1000ml ph 7.41000ml ph 7.4(

8、(三三 ) )材料：材料： 牛肉膏、蛋白胨、試管、瓊脂、牛肉膏、蛋白胨、試管、瓊脂、天平、精密天平、精密 pH pH 試紙、玻棒、試紙、玻棒、報紙、線繩、漏斗、紗布、電爐、報紙、線繩、漏斗、紗布、電爐、( (四四 ) )操作步驟操作步驟 1 1、稱量、稱量2 2、熔化、熔化3 3、調、調pHpH值值4 4、分裝、分裝5 5、加塞、加塞 6 6、滅菌、滅菌 7 7、擺斜面、擺斜面8 8、菌檢、菌檢9 9、保存、保存試題類型試題類型試卷內容評分標準（評分標準（4040分）分）分值分配A霉菌接種霉菌接種采用什么采用什么方法，請方法，請操作操作1 1、先檢查超凈工作臺內物品是否、先檢查超凈工作臺內物品

9、是否放置好，并詢問教師是否消毒放置好，并詢問教師是否消毒52 2、從菌種盤中正確取出、從菌種盤中正確取出霉菌菌種霉菌菌種53 3、洗手、用酒精棉球消毒手和菌、洗手、用酒精棉球消毒手和菌種種84 4、打開鼓風機與照明設備、打開鼓風機與照明設備25 .5 . 開開始 操始 操作作進入再消毒進入再消毒2卷好套袖卷好套袖2點燃酒精燈點燃酒精燈2正確拿菌種培正確拿菌種培養基與接種鏟操養基與接種鏟操作作10正確取出正確取出26 6、此種方法稱為點種法，、此種方法稱為點種法，答對答對2試題類型試題類型試卷內容試卷內容評分標準（評分標準（4040分）分）分值分配B細菌接種細菌接種采用什么采用什么方法，請方法，

10、請操作操作1 1、先檢查超凈工作臺內物品是否、先檢查超凈工作臺內物品是否放置好，并詢問教師是否消毒放置好，并詢問教師是否消毒52 2、從菌種盤中正確取出、從菌種盤中正確取出細菌菌種細菌菌種53 3、洗手、用酒精棉球消毒手和菌、洗手、用酒精棉球消毒手和菌種種84 4、打開鼓風機與照明設備、打開鼓風機與照明設備25.5.開開始 操始 操作作（1818分）分）進入再消毒進入再消毒2卷好套袖卷好套袖2點燃酒精燈點燃酒精燈2正確拿菌種培養正確拿菌種培養基與接種環操作基與接種環操作10正確取出正確取出26 6、此種方法稱為劃蛇形線、此種方法稱為劃蛇形線法，答對法，答對2互動D1.1.什么叫接種？什么叫接種

11、？2.2.細菌接種常用的方法有哪細菌接種常用的方法有哪些？些？3.Inoculating loop 3.Inoculating loop 使用使用時應注意什么？時應注意什么？互動D4.4.培養細菌的條件是（培養細菌的條件是（ ）5.5.接種細菌常用方法是（接種細菌常用方法是（ ）6.6.接種霉菌常用的方法是（接種霉菌常用的方法是（ ）7.7.大白菇的培養條件是（大白菇的培養條件是（ ）接種接種（一）一） 目標目標 1.1.鞏固無菌操作技術鞏固無菌操作技術 2.2.學會劃蛇形線法學會劃蛇形線法 3.3.學會點種法學會點種法（二）實驗材料、設備（二）實驗材料、設備設備設備：無菌室、接種箱、超凈工作

12、、接種箱、超凈工作臺臺器材器材：酒精燈、消毒棉球、接種環（針）、接種鏟、火柴、鑷子試劑試劑：大腸埃希菌斜面培養物、斜面肉湯瓊脂培養基 馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基( (三三) )實實 訓訓 原原 理理無菌操作無菌操作：酒精燈火焰周圍10cm處是無菌的，超凈工作臺吹出的風是無菌的.接種技術接種技術：將某一微生物從固體（液體）培養基移到另一適宜的培養基中.實實 訓訓 程程 序序 教師講解教師講解, ,觀看課件觀看課件 教師演示教師演示, ,并請一位同學上臺操作并請一位同學上臺操作 全體同學操作全體同學操作 教師檢查教師檢查, ,做出實訓總結做出實訓總結 布置作業布置作業,24h,24h后觀察結果后觀察結

13、果, ,完成報告完成報告 預習真菌接種、劃線分離法預習真菌接種、劃線分離法Inoculating loop： dry heatHaming： red-hot direct heat互動E 接種環使用前后滅菌有何接種環使用前后滅菌有何不同，應注意什么？為什么？不同，應注意什么？為什么？互動F1.整體屬什么操作？2.有幾種斜面固體 固體接種方法3.什么叫火焰封口，還有其他方法嗎、無菌接種嚴格無菌操作 增強有菌意識 防止污染環境斜面接種法斜面接種法左手平托兩支試管，拇指按住試管底部。外側是大腸埃希菌種試管，內側是待接的空白斜面。（兩支試管的斜面同時向上，保證斜面水平，口部對齊），右手將棉塞旋松，以便

14、在接種時容易拔出。斜面接種法斜面接種法右手拿接種環(針)，在火焰上先將環端燒紅滅菌，然后將有可能伸入試管的其余部位也旋轉過火焰滅菌。斜面接種法斜面接種法將兩支試管的上端并齊，靠近火焰，用右手小指和掌心將兩支試管的棉塞一并夾住拔出，棉塞仍夾在手中，然后讓試管口緩緩過火焰。斜面接種法斜面接種法將已灼燒過的接種環(針)伸入外側的菌種試管內。先冷卻，而后再用環(針)沾取一定量的大腸埃希菌苔，將沾有菌苔的接種環(針)抽出試管。斜面接種法斜面接種法迅速將沾有菌種的接種環伸入另一支待接斜面試管的底部，輕輕向上劃蛇形線。斜面接種法斜面接種法接種后的斜面試管口再次過火焰，棉塞底部過火焰后立即塞入試管內。斜面接種

15、法斜面接種法將沾有菌苔的接種環在火焰上燒紅滅菌。先在內焰中燒灼，使其干燥后，再在外焰中燒紅，以免菌苔驟熱，使菌體爆濺，造成污染。斜面接種法斜面接種法放下環后，再將棉塞旋緊，在試管斜面上距試管口23cm處貼上標簽。包扎好后，37恒溫培養。霉菌接種：點種法（類似移苗）接種工具：接種鏟接種工具：接種鏟接種方法：接種方法： 管口對齊，挑取一小塊連同培養基管口對齊，挑取一小塊連同培養基在內的母種接種在一空白的試管斜在內的母種接種在一空白的試管斜面培養基中間面培養基中間培養：將其放在培養：將其放在20-2420-24恒溫箱內培恒溫箱內培養養4-84-8天天液體接種法：液體接種法：液體接種法：包括從斜面菌種

16、接液體接種法：包括從斜面菌種接入培養液，或從液體菌種接入液入培養液，或從液體菌種接入液體培養液，兩種情況都可以用接體培養液，兩種情況都可以用接種環接種。但在培養量比較大的種環接種。但在培養量比較大的情況下，液體接種宜采用移液管情況下，液體接種宜采用移液管接種，同時要求無菌操作。接種，同時要求無菌操作。穿刺接種法穿刺接種法用接種針經火焰滅菌后，用接種針經火焰滅菌后，沾取少量菌種，垂直地沾取少量菌種，垂直地穿入試管半固體培養基穿入試管半固體培養基中心至底部。中心至底部。穿刺接種法穿刺接種法然后沿著原接種線將針然后沿著原接種線將針拔出，要做到手穩、動拔出，要做到手穩、動作輕巧迅速，最后塞上作輕巧迅速

17、，最后塞上棉塞。再將接種針上殘棉塞。再將接種針上殘留的菌體在火焰上燒掉。留的菌體在火焰上燒掉。作業：作業：接種后接種后24h24h觀察結果觀察結果, ,觀察蛇觀察蛇形線是否明顯？有無污染？形線是否明顯？有無污染？菌苔顏色？菌苔顏色？接種技術的要領是什么？接種技術的要領是什么？作業：作業：接種前后接種環為什么均接種前后接種環為什么均要滅菌？要滅菌？接種為什么要無菌操作？接種為什么要無菌操作？將接后的大腸埃希菌如何將接后的大腸埃希菌如何進行培養？進行培養？作業：培養基按營養物質來源分（培養基按營養物質來源分（ ）和）和（ ），按功能和用途分（），按功能和用途分（ ）、）、（ ）、（）、（ ）、（）、（ ），按物理狀），按物理狀態分（態分（ ）、（）、（ ）、（）、（ ）解釋：菌落解釋：菌落 菌苔菌苔比較：細菌、放線菌、霉菌及酵比較：細菌、放線菌、霉菌及酵母菌菌落特征母菌菌落特征微生物根據生長所需最適溫度