1、化學法誘導DNA直接轉化v以原生質體為受體，借助特定的化學物誘導DNA直接導入植物細胞的方法。v化學誘導DNA直接轉化的主要方法有PEG介導基因轉化和脂質體介導基因轉化。物理法誘導DNA直接轉化v物理轉化法是基于物理因素對細胞膜的影響，通過機械損傷直接將DNA直接導入植物細胞的方法。v物理轉化法主要有電激法介導基因轉化、超聲波介導基因轉化、顯微注射介導基因轉化、激光微束介導基因轉化、基因槍法介導基因轉化等。種質轉化系統v還有一類轉化系統不同于以上兩種轉化系統，而是借助生物自身的種質細胞為媒體，特別是植物生殖系統的細胞及其結構來實現轉化的目的，將之稱為種質轉化系統。 種質轉化系統主要有： 花粉管

2、通道法介導基因轉化、生殖細胞浸泡法介導基因轉化、花粉管通道法介導基因轉化、生殖細胞浸泡法介導基因轉化、胚囊、子房注射法介導基因轉化。胚囊、子房注射法介導基因轉化。種質轉化系統的特點v轉化的DNA可以是裸露的，也可以重組在質粒DNA上。v轉化過程不依賴于物理化學過程，而依靠生物自身的種質系統或細胞功能來實現。v不需要植物組織、細胞、原生質體等的離體培養。v植物整體水平上的轉化。v方法簡便易行，并預常規育種緊密結合。植物基因轉化系統的選擇策略v一個好的基因轉化系統應該具備的特點： 轉化率高；工作效率高； 宿主范圍廣；重復性高； 簡單方便，易于操作； 快速第四章 轉基因植物的檢測與鑒定v進行基因轉化

3、后，要回答以下問題： 外源基因是否進入植物細胞？ 進入植物細胞的外源基因是否整合到植物染色體上？ 整合到植物染色體上的外源基因是否表達？轉基因植物的證據v要有嚴格的對照：包括陽性和陰性對照v轉基因當代要提供外源基因整合與表達的分子生物學證據、物理證據、表型證據v提供外源基因控制的表型性狀證據（如抗病、抗蟲等）v根據該植物的繁殖方式提供遺傳證據基因轉化后要進行的工作v篩選轉化細胞v對轉基因候選植株進行分子生物學鑒定 PCR、Southern雜交、Northern雜交、Western雜交v進行性狀鑒定和外源基因的表達調控研究轉基因植株的PCR檢測v外源基因是否整合可先用PCR進行檢測。但因為PCR

4、有時會出現假陽性擴增，最后的確定仍然需要用Southern雜交進行驗證。v外源基因的表達可先用RT-PCR進行檢測。但最后的確定仍然需要用Northern雜交進行驗證。報告基因的表達檢測v報告基因：指其編碼產物可被快速測定的基因?？捎脕碜粉櫶囟―NA結構是否已導入寄主細胞或是器官、組織。v報告基因要具備的兩大特點：其表達產物或產物的類似功能在未轉化的細胞內并不存在；便于檢測。v報告基因的檢測：生化方法或免疫方法目前常用的報告基因v-葡萄糖苷酸酶基因（gus基因）v抗卡那霉素基因（npt-基因）v綠色熒光蛋白基因（gfp)等目的基因的的整合及表達檢測v證明目的基因在植物染色體上整合最可靠的方法是

5、分子雜交。v轉基因植物分子雜交鑒定包括兩部分： 核酸分子雜交： Southern雜交、Northern雜交 蛋白質分子雜交：Western雜交核酸分子雜交的原理v非同一來源但具有互補序列的兩條核苷酸鏈，其中一條鏈被人為標記，該標記可通過某種方法撿出，即成為所謂的探針。探針與互補的核苷酸鏈雜交后，雜交體也被帶上同樣的標記，可被檢測出來。v這種方法靈敏度高（可撿出1pg的DNA樣品），特異性強（可鑒別出20個堿基對的同源序列）。外源基因整合的Southern雜交鑒定基本步驟v植物總DNA提取v雜交探針的制備v雜交v分析結果Southern雜交的種類vSouthern斑點雜交 可較快大略檢測一下植物

6、基因組是否含有外源基因。這種方法的主要問題是假陽性率較高。vSouthern印跡雜交 可清晰而準確的顯示特異雜交體的數量及位置。 Southern印跡雜交的實驗程序v植物DNA的限制性酶切v凝膠電泳分離各酶切片斷v各酶切片斷于凝膠中變性v將變性的各DNA酶切片斷轉移到固相膜上v預雜交，掩蓋非特異位點v探針與膜上同源DNA片斷雜交v漂洗去除未結合的非特異結合的探針v雜交體選出外源基因轉錄的Northern雜交鑒定v可檢測轉基因植物中外源基因的轉錄水平，是研究外源基因表達調控的重要手段。Northern雜交的基本程序v植物細胞總RNA的提取v探針的制備v印跡及雜交Northern雜交的種類 Nor

7、thern斑點雜交 是檢測植物基轉錄本穩定表達量的有效方法，可用于外源基因表達及表達調控的研究。 Northern印跡雜交 Northern斑點雜交的步驟：材料的預處理；材料總RNA提??；將實驗樣品稀釋，點在固相膜上，設立陰陽性對照；膜與不含探針的雜交液溫育，以封閉非特異性位點；加入經變性處理的探針，進行雜交；根據標記物質進行撿出；分析雜交結果，通過與陽性對照比較來估計外源基因表達量。外源基因表達蛋白的檢測v外源基因編碼的蛋白在轉基因植物中能正常表達并表現出應有的功能是植物基因轉化的最終目的。v表達的蛋白應具有一定的穩定性，不被細胞內的蛋白酶降解，同時應對植物細胞無毒性。外源基因表達蛋白檢測的

8、主要方法v利用免疫學原理，ELISA和Western雜交是經典方法。ELISA檢測vELISA是酶聯免疫吸附法（enzyme-linked immuno sorbent assay）的簡稱。v是一種利用免疫學原理檢測抗原、抗體的技術。v這種方法建立了固-液抗原-抗體反應體系，并采用酶來標記。v抗體抗原的結合通過酶反應來檢測。v由于酶反應的放大作用，使測定的靈敏度極高，可撿出1 pg的目的物。v同時酶反應具有很強的特異性，因此，ELISA是基因表達研究中不可缺少的方法。v抗體的制備v抗原或抗體的包被v免疫反應及檢出ELISA檢測的基本程序ELISA檢測應注意的問題v用于定量分析時，微孔板上同時設

9、有標準樣品及待測樣品。檢測結果的準確性與樣品的重復數及樣品在板上的配制有關。vELISA的靈敏度與實驗操作程序有關。v容易出現本底過高的問題v缺乏標準化Western雜交vWestern雜交是將蛋白質電泳、印跡、免疫測定融為一體的蛋白質檢測方法。v靈敏度很高（15ng）v據檢測結果，可知植物細胞內目的蛋白表達與否，濃度大小及大致的分子量。Western雜交程序v轉基因植株蛋白質的提取vSDS-PAGE電泳分離蛋白質v蛋白質條帶印跡v探針制備v雜交第五章 轉基因植物的遺傳特性及表達調控v轉基因植物中外源基因的整合特性v轉基因植物中外源基因整合的遺傳效應v轉基因植物中外源基因的遺傳特性v轉化外源基

10、因的瞬時表達和穩定表達v轉化外源基因的表達調控轉基因植物中外源基因的整合特性v外源DNA的整合位點 轉基因導入植物細胞以后，通過細胞分裂時遺傳物質的復制整合到核基因組中，整合后的轉基因遵循該細胞遺傳物質的復制和表達規律。 轉基因在受體染色體上的整合位點和拷貝數與轉基因本身的存在、遺傳表達以及傳遞穩定性都有必然的聯系。 v轉基因導入植物細胞后，通過細胞分裂時遺傳物質的復制過程整合到核基因組中。v現在普遍認為，轉基因在寄主染色體內的整合位點是隨機的，外源DNA可插入植物基因組的任何一條染色體，可插入染色體上的任何位點或者說沒有固定的插入位點，但對轉錄活躍區域具有優先插入特性。v關于共轉化多個基因的

11、研究表明，多個外源基因在植物基因組中的整合特點同單基因相似。v整合拷貝數 外源DNA的插入拷貝數有以下幾種： 單拷貝單位點插入； 串聯多拷貝單位點插入； 多拷貝多位點插入。 多數情況下外源基因以單拷貝在單位點整合；但在同一位點，也存在較多的多拷貝串聯整合現象，形式主要有頭對尾式串聯和頭對頭式串聯。v目前，兩類轉化方法農桿菌介導的遺傳轉化和DNA直接轉化方法影響著轉基因整合時的拷貝數和整合位點。v前者的拷貝數較少，為13個拷貝，整合位點特異性較強；直接導入法拷貝數相差較大，且表現出較大的隨機性。有研究者發現啟動子對轉基因的拷貝數大有影響。v外源DNA結構對整合的影響v外源DNA結構一般分為四種類

12、型：單鏈線形DNA,單鏈環形DNA，雙鏈線形DNA及雙鏈環形DNA。其中，單鏈線形DNA被研究的較多。v一般認為單鏈DNA可以有效的通過不正常的整合參與同源染體序列的重組。v有實驗表明，外源DNA的結構同整合拷貝數無直接相關。v轉化后整合位點的DNA結構變化v保持整合外源基因的完整性是實現轉基因功能表達的基本條件，外源基因整合后的完整性與其結構變化有關。v對于植物基因組來講，外源DNA作為侵入者的整合，會引起不同程度的基因重排，涉及到缺失、易位、倒位及重復等一系列現象，這主要與細胞本身的重復和修復功能有關。v關于整合外源基因的大小，目前研究認為，插入植物染色體的外源DNA的大小是有限制的。v近

13、年來新發現了T-DNA邊界外的轉移。v以前認為只有T-DNA邊界之間的DNA序列轉移進入植物的基因組。Martineau等（1994）檢測了不同作物的幾百株轉基因植株整合的外源DNA時發現T-DNA左右邊界以外的DNA序列同樣能夠整合進植物基因組中，而且這種轉移在轉基因植株中的比例很高，約占2030。v轉化方法對整合外源基因結構的影響v通常情況下,外源DNA以兩種分子結構形式進行轉化：一種是外源DNA插入T-DNA質粒載體中導入，另一種是裸露的DNA分子直接進入。v由于其轉化原理明顯不同，因此與整合后的外源DNA結構必然有著直接的聯系。T-DNA轉化的外源DNA的結構變化v應用于植物基因轉化的

14、農桿菌介導轉化方法主要是通過Ti質粒轉化系統。v在農桿菌介導轉化細胞中T-DNA結構完整，轉化機制清楚，整合位點較為穩定，多數情況下在25bp處與植物DNA連接，整合后的外源基因結構變異較少。v農桿菌介導的外源DNA也會出現結構的變化，主要表現在T-DNA的串連和截短現象。裸露DNA直接轉化的外源DNA結構變化v用裸露的DNA直接轉化時，整合的外源DNA往往出現復雜的雜交圖譜，在轉化當代及子代中常出現DNA環化甲基化片斷分離和丟失等現象。vCzernilofsky等1986觀察到導入的DNA片斷發生重排。轉基因植物中外源基因整合的遺傳效應v位置效應 轉基因在寄主染色體內的整合位點是隨機的，顯然

15、，不同插入位點的遺傳背景不同，對其表達會有很大影響，產生的遺傳效應也必然不同。 在同一實驗中，得到的不同轉化植株，外源基因的表達水平有很大差異，這主要是由于外源基因在染色體上的插入位點不同造成，該現象成為位置效應。v位置效應可引起轉基因的失活，其原因可能是插入位點周圍的DNA序列組成起重要作用。v位置效應的明顯表現是外源基因的整合位置對其表達頻率的影響，可以說位置效應是轉基因表達不一致的主要原因之一。v重組效應 轉基因易被植物基因組存在的重組和修復系統所識別，致使轉基因不同程度的重排，這必然引起DNA的缺失、易位及重復等一系列的結構變化。轉基因沉默v分子雜交證明轉基因已整合到寄主植物基因組中，

16、并且仍保留著完整的拷貝，但是轉基因不能穩定表達或表達水平低下，有時甚至完全不表達，這種外源基因在轉基因植物中表達受到抑制的現象稱為轉基因沉默（transgene silencing）。v近年來，轉基因沉默已成為研究的焦點。 轉基因沉默主要發生在兩個階段： 轉錄水平的基因沉默（transcriptional gene silencing，TGS） 轉錄后水平的基因沉默 （post-transcriptional gene silencing，PTGS）v轉錄水平的基因沉默（TGS）是指對轉基因專一的細胞核RNA合成的失活。它的發生主要是由于轉基因無法被順利轉錄成相應的RNA而導致沉默。 TGS的

17、特點： 轉錄活性的阻塞；啟動子序列發生嚴重的甲基化；沉默和甲基化可以遺傳。 TGS發生后，信使RNA的合成銳減或根本不合成。引起TGS的主要機制：v轉基因及其啟動子甲基化v多拷貝重復轉基因序列引起的TGSv同源基因間的反式失活v轉基因位置效應引起的TGSv染色體包裝對轉基因沉默的影響v轉錄后水平的基因沉默（PTGS）是指轉基因在細胞核里能穩定轉錄，但在細胞質里卻無相應的穩定的mRNA存在的現象。vPTGS的特點： 核內的轉錄速率正常，但mRNA不在細胞溶膠中積累；在轉錄區有偶然的甲基化；沉默的減數分裂的不可遺傳性?？朔D基因沉默的策略v轉基因的選擇v啟動子的選擇v利用具有組織和發育特異性作用的

18、增強子v利用MAR序列（基質附著區，指染色質被限制酶消化后仍與核骨架結合的DNA序列，位于染色質的端粒附近）v利用位置特異性重組系統v選擇單拷貝轉化體轉基因植物中外源基因的遺傳特性v外源基因在轉化植物中的遺傳傳遞規律 孟德爾式分離：在大多數的轉化植株中，轉基因呈單基因顯性的孟德爾式分離。 多個轉基因在轉化植物后代的分離規律與其整合特性密切相關。如多基因以連鎖形式整合到一個位點上，那么就符合單基因的孟德爾式分離；如整合到不同位點上，那么每個基因的分離符合孟德爾式分離，各個基因間不影響。 非孟德爾式分離： 轉基因丟失 轉基因沉默 轉基因逃 花粉致死（雄配子致死） 誘發隱性致死突變或轉基因純合致死轉

19、基因的遺傳穩定性 轉基因在轉化細胞培養中的穩定性 轉化的外源基因與體細胞內的其他基因一樣在細胞培養和再生過程中是基本穩定的，能夠從轉化的細胞獲得轉基因植株。 轉基因在遺傳傳遞中的穩定性 常規雜交育種的大量實驗已確證整合到受體細胞染色體的基因能夠穩定遺傳。 轉基因植株的倍性變化 在組織培養中體細胞無性系變異的一個常見現象是再生植株的染色體倍性變化，即多倍體變異。 目前的研究認為，多拷貝、復合整合方式的轉化DNA不易穩定，單拷貝或低拷貝的插入具有較高的穩定性。 沉默轉基因的遺傳穩定性 沉默的轉基因可以通過無性繁殖或器官再生，以及嫁接傳遞下來，但是無法預測其通過減數分裂在世代間的傳遞，而多位點的插入

20、使情況變得更復雜。植物基因工程的研究進展 1983年，第一株轉基因植物問世。 迄今為止，全世界已分離了幾百個目的基因，獲得轉基因植物近200種，其中農桿菌轉化成功的植物已達116種。第六章 植物基因工程的研究進展及存在問題全球轉基因植物種植面積全球轉基因植物種植面積 1996年年 170 萬公頃萬公頃 1999 3990 萬公頃萬公頃 2000 4420萬公頃萬公頃 2001 5260萬公頃萬公頃 2002 5870萬公頃萬公頃 2003 6770萬公頃萬公頃2003年與年與1996年比較：增長了年比較：增長了40倍倍 不同國家種植不同國家種植GMC 面積面積（百萬公頃）（百萬公頃）2000

21、2001 2002 2003 美國美國 33.3 35.7 39.0（66） 42.8（63%）阿根廷阿根廷 10.0 11.8 13.5（23%） 13.9（21）加拿大加拿大 3.0 3.2 3.5 （6%） 4.4（6）中國中國 0.5 1.5 2.1（4%） 2.8（4）巴西巴西 3.0（4）南非南非 0.2 0.2 0.3 0.4（1）澳大利亞澳大利亞 0.2 0.2其它其它（16） 0.1 0.1 99%52.6 58.7 67.7轉基因農產品和食品轉基因農產品和食品2001 年，全球獲準上市年，全球獲準上市GMC產品達產品達120個個2002年，年， 140個個作物種類：作物種類

22、： 大豆大豆 3650萬公頃，萬公頃，51 （占全球該作物面積）（占全球該作物面積） 玉米玉米 1140萬公頃，萬公頃， 21 棉花棉花 980萬公頃，萬公頃， 20% 油菜油菜 30萬公頃萬公頃 5轉基因食品和食品成分達轉基因食品和食品成分達4000多種多種v迄今美國1/4的耕地種植轉基因植物，其中抗除草劑基因的大豆占大豆種植面積的55%；抗蟲棉占棉田總面積的60%以上；轉基因玉米占總種植面積的30%以上。v我國僅1999年就有73項轉基因申請，批準環境釋放18項中間試驗24項，商品生產6項。v轉基因棉已種植100多萬畝，使我國成為世界上轉基因植物推廣面積最大的國家之一。近年來植物基因工程研

23、究的有關進展v高等植物質體基因轉化v農桿菌介導大片斷DNA轉化v目的基因定位重組轉化 高等植物質體基因轉化v高等植物的細胞中，細胞核質體（葉綠體）和線粒體都含有DNA，他們構成了既相對獨立又相互聯系的三個遺傳系統。v自從基因工程技術誕生以來，核基因轉化一直是植物基因工程的主要研究方向。v隨著研究的深入進展，人們逐漸認識到質體基因轉化的獨特優越性，開始成為植物基因工程新的研究熱點。質體基因轉化系統的優點v高效表達：質體基因組的拷貝數很大v原核基因無需修飾改造：質體大多數基因的結構轉錄與翻譯系統均與原核生物類似v安全性好：只進行母系遺傳v便于遺傳操作：多種植物的質體基因組序列已被測定v可以實現定點

24、整合v容易保持純系后代不分離質體基因轉化存在的問題v轉化植物的同質化困難v外源基因轉化頻率低質體基因轉化的應用前景v提高作物的光合效率，實現高產、穩產v葉綠體生物反應器的應用v提高農作物抗逆性v提高蔬菜營養價值農桿菌介導大片斷DNA轉化v以前的轉基因植物，其中絕大多數是通過單個目的基因的遺傳轉化獲得的。v自然界中的很多性狀是由多個基因控制的，一般的生化代謝過程需多種酶的催化作用才能完成。v長期以來，培育高產、優質、抗病蟲害、抗逆境等具有多個優良性狀的作物品種是每一個植物遺傳改良科學家的共同愿望。v研究者對發展多基因轉化系統，將多個目的基因轉入到植物基因組中進行了探索，并成功的實現了多個目的基因

25、在植物中的表達。多基因轉化系統的建立v構建多基因表達載體v構建多個表達載體v人工染色體轉化載體構建目的基因定位重組轉化v目前已經發展了四種定位重組系統： Cre/loxP、FLP/FRT、R/Rs、Gin/gir 通過同源重組向植物基因組特定位點引入目的基因的研究剛起步，效率較低。目前，植物基因工程存在的問題v技術問題v提高基因轉化率重要的禾本科糧食作物的轉化率較低，成為植物基因工程 發展的主要限制因子。v建立高頻再生的基因轉化受體系統v植物組織培養的水平要隨著基因工程的需要進一步提高。 提高對轉化外源基因表達的調控能力目前轉基因植株的表達調控存在著表達水平低，可操作性差等問題，基本處于一種失

26、控隨機狀態。v潛在的應用問題 植物基因工程與常規育種的關系 植物基因工程與農業資源遺傳多樣性保護 植物基因工程與病原體抗藥性 植物基因工程與環境生態平衡 轉基因食品的安全性提高轉化外源基因的遺傳穩定性 外源基因在植物核基因組中的整合遠比常規育種復雜。環境及生態安全性環境及生態安全性食品及飼料安全性食品及飼料安全性轉基因食品的安全性評價1 生存競爭性生存競爭性2 演變雜草的可能性演變雜草的可能性2 生殖隔離距離生殖隔離距離3 與近緣野生種的可交配性與近緣野生種的可交配性4 對非靶生物的影響對非靶生物的影響 生長勢生長勢差別不大，一般差別不大，一般 轉基因植株稍差轉基因植株稍差 種子活力及越冬能力

27、種子活力及越冬能力 轉基因棉花、油菜、煙草、轉基因棉花、油菜、煙草、水稻、番茄、馬鈴薯等均未提高水稻、番茄、馬鈴薯等均未提高 抗病及抗逆能力抗病及抗逆能力 除抗蟲、抗病、抗除草劑及抗除抗蟲、抗病、抗除草劑及抗逆的轉基因植物外，無提高逆的轉基因植物外，無提高演變成雜草的可能性：演變成雜草的可能性：1、現有的轉基因作物本身失去了雜草的一系列遺傳特性，、現有的轉基因作物本身失去了雜草的一系列遺傳特性， 離開了人類栽培就無法生存，不可能變為雜草。離開了人類栽培就無法生存，不可能變為雜草。2、轉基因作物發生基因漂流，使得一種雜草能抗兩種或多、轉基因作物發生基因漂流，使得一種雜草能抗兩種或多種除草劑，人們

28、還可研制出新的除草劑將其殺死。種除草劑，人們還可研制出新的除草劑將其殺死。視物種和地理環境而定，在自然條視物種和地理環境而定，在自然條件下件下一般很?。ǖ锌赡埽┮话愫苄。ǖ锌赡埽?。主要看近緣野生種主要看近緣野生種 + 轉化的基因轉化的基因 無（安全）無（安全） 如抗除草劑（危險）如抗除草劑（危險）基因漂流基因漂流土壤微生物區系：土壤微生物區系： 一般無一般無益蟲和有害昆蟲：益蟲和有害昆蟲： 可能（如可能（如Bt基因）基因）殘渣對后季作物：殘渣對后季作物： 無無兩個基本觀點：兩個基本觀點：1、安全性是一個相對和動態的概念，不同時期其認識、安全性是一個相對和動態的概念，不同時期其認識可能會發生

29、變化?？赡軙l生變化。2、任何時候的食品供應都不可能、任何時候的食品供應都不可能100安全。如麥角中安全。如麥角中毒、黃曲霉素等污染食物時有發生，因而毒、黃曲霉素等污染食物時有發生，因而100安全是安全是不可能做到的。不可能做到的。經合組織經合組織1993年提出了實質等同性原則：年提出了實質等同性原則：轉基因生產的產品與傳統產品具有實質等同性，則認轉基因生產的產品與傳統產品具有實質等同性，則認為安全，如來源于植物病毒的基因。為安全，如來源于植物病毒的基因。若不存在實質等同性，則嚴格評價。若不存在實質等同性，則嚴格評價。有無抗營養因子有無抗營養因子有無毒性物質有無毒性物質有無過敏性蛋白有無過敏性

30、蛋白標記基因的安全性標記基因的安全性 科學家在轉基因植物育種時，一般科學家在轉基因植物育種時，一般會避免使用對人類有毒或過敏的蛋白基會避免使用對人類有毒或過敏的蛋白基因。如果是一種新蛋白，則：因。如果是一種新蛋白，則：1、分析基因來源、分析基因來源2、可查過敏性蛋白序列庫、可查過敏性蛋白序列庫無抗營養因子無抗營養因子無毒性物質無毒性物質無過敏蛋白無過敏蛋白1 對動植物未發現危害性對動植物未發現危害性2 轉入腸道微生物的可能性：轉入腸道微生物的可能性： 小小 Dr.Arpad Pusztai in Rowett institute in Scotland 1998（電視節目，未經發表）（電視節目

31、，未經發表） 雪花蓮凝集素基因雪花蓮凝集素基因 馬鈴薯馬鈴薯 老鼠老鼠 體重和重量減輕體重和重量減輕 對內臟和免疫有損對內臟和免疫有損 引起國際轟動引起國際轟動1、Pusztai 事件：事件：英國皇家學會組織同行評審英國皇家學會組織同行評審1999年年5月得出結果，月得出結果， 認為試驗有認為試驗有6條缺陷：條缺陷：1、不能確定轉基因和非轉基因馬鈴薯的化學成分差異；、不能確定轉基因和非轉基因馬鈴薯的化學成分差異；2、喂養轉基因土豆的老鼠未補充蛋白質以防止饑餓；、喂養轉基因土豆的老鼠未補充蛋白質以防止饑餓；3、共試動物數量少，喂幾種不同的食物，且都不是老鼠的、共試動物數量少，喂幾種不同的食物，且

32、都不是老鼠的 標準食物，很少統計意義；標準食物，很少統計意義；4、試驗設計差，未作雙盲測定；、試驗設計差，未作雙盲測定；5、統計方法不當；、統計方法不當；6、試驗結果無一致性、試驗結果無一致性結論：否定結果結論：否定結果處理：辭退工作處理：辭退工作Bt 轉基因玉米轉基因玉米 斑蝶取食花粉斑蝶取食花粉 死亡死亡1999年年5月，月，Conell大學一個研究組報道，在實大學一個研究組報道，在實驗室內結果表明：驗室內結果表明：后來許多科學家研究證實：后來許多科學家研究證實：1、該研究缺乏花粉量數據。、該研究缺乏花粉量數據。2、2000年在美國年在美國3個州和加拿大田間試驗證明，個州和加拿大田間試驗證

33、明，Bt玉米玉米花粉對斑蝶成蟲和幼蟲的死亡和生長發育沒有影響。花粉對斑蝶成蟲和幼蟲的死亡和生長發育沒有影響。3、實驗室生物測定表明，、實驗室生物測定表明，10倍于田間的花粉量，對斑蝶倍于田間的花粉量，對斑蝶成長和發育也無影響。成長和發育也無影響。墨西哥玉米事件墨西哥玉米事件 加州大學加州大學Berkeley分校的分校的David Chapela和和David Quist 2001年年11月在月在Nature上發表文章，聲稱：上發表文章，聲稱： 在墨西哥南部在墨西哥南部Oaxaca地區采集了地區采集了6個玉米地方品種，在樣個玉米地方品種，在樣本中發現有本中發現有CaMV35S啟動子及啟動子及No

34、vartis BtII抗蟲玉米中地抗蟲玉米中地adhl基因相似序列。基因相似序列。對該文的核實：對該文的核實：1、Transgene Research的編委的編委Paul Christou批評該文批評該文在方法學上有許多錯誤，測出的在方法學上有許多錯誤，測出的35S啟動子被證啟動子被證 明是假明是假陽性；陽性；2、BtII的首席科學家的首席科學家Dr.Mettler Irvin指出，指出，BtII中插中插入的是玉米入的是玉米adhl-IS基因，而非作者報道的基因，而非作者報道的adhl-F基因；基因；3、Nature編輯部在編輯部在2002年初正式聲明，該文證據不充年初正式聲明，該文證據不充分

35、，原不應該發表。分，原不應該發表。我國首次進行轉基因植物大田試驗我國首次進行轉基因植物大田試驗煙草：煙草： 在河南生產，出口美國，被拒，全部在河南生產，出口美國，被拒，全部 銷毀，銷毀， 損失損失7億多元億多元中國中國Bt抗蟲棉破壞環境事件抗蟲棉破壞環境事件 2002年年6月月3日，日，China Daily發表南京環保所作者發表南京環保所作者的文章，提出在的文章，提出在Bt抗蟲棉田中：抗蟲棉田中：1、棉鈴蟲的寄生天敵、棉鈴蟲的寄生天敵寄生蜂數量減少；寄生蜂數量減少；2、棉蚜、紅蜘蛛、盲春象、夜蛾等次要害蟲上升為、棉蚜、紅蜘蛛、盲春象、夜蛾等次要害蟲上升為主要害蟲；主要害蟲；3、有可能抗性很快喪失。、有可能抗性很快喪失。結論：破壞環境結論：破壞環境Bt.抗蟲棉抗蟲棉1、Bt抗蟲棉的生態效應