1、實驗五、實驗五、常見病原性球菌的檢查常見病原性球菌的檢查河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院河南大學(xué)醫(yī)學(xué)院 婁強(qiáng)婁強(qiáng)qiang_目的要求目的要求 掌握常見病原性球菌的主要生物學(xué)性狀掌握常見病原性球菌的主要生物學(xué)性狀 熟悉常見病原性球菌有關(guān)的鑒定方法熟悉常見病原性球菌有關(guān)的鑒定方法病原性球菌病原性球菌 葡萄球菌葡萄球菌(金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、檸金黃色葡萄球菌、白色葡萄球菌、檸檬色葡萄球菌檬色葡萄球菌) 鏈球菌鏈球菌 肺炎球菌肺炎球菌 腦膜炎球菌腦膜炎球菌 淋球菌淋球菌葡萄球菌檢驗程序葡萄球菌檢驗程序 濃汁等標(biāo)本濃汁等標(biāo)本 直接涂片染色鏡檢直接涂片染色鏡檢 初報初報 血液血液 增菌培養(yǎng)增菌培養(yǎng) 分離培養(yǎng)，取可疑

2、菌落鑒定分離培養(yǎng)，取可疑菌落鑒定 糞便、嘔吐物糞便、嘔吐物 分離培養(yǎng)（高鹽甘露醇平板）分離培養(yǎng)（高鹽甘露醇平板） 純培養(yǎng)，煮沸殺菌離心純培養(yǎng)，煮沸殺菌離心 鑒定腸毒素（鑒定腸毒素（ELISA） 細(xì)菌鑒定項目細(xì)菌鑒定項目 涂片鏡檢涂片鏡檢 、 血漿凝固酶實驗、耐血漿凝固酶實驗、耐熱核酸酶實驗熱核酸酶實驗 、甘露醇發(fā)酵、甘露醇發(fā)酵 藥敏試驗藥敏試驗致病性葡萄球菌鑒定依據(jù)致病性葡萄球菌鑒定依據(jù) 金黃色色素金黃色色素 有溶血環(huán)有溶血環(huán) 凝固酶實驗陽性凝固酶實驗陽性 耐熱核酸酶實驗陽性耐熱核酸酶實驗陽性 分解甘露醇分解甘露醇三株葡萄球菌的比較三株葡萄球菌的比較性狀性狀 金葡菌金葡菌 表葡菌表葡菌 腐葡菌

3、腐葡菌色素色素 金黃色金黃色 白色白色 白或檸白或檸血漿凝固酶血漿凝固酶+ - -溶血素溶血素+ -/+ -耐熱核酸酶耐熱核酸酶+ - -A蛋白蛋白 + - -分解甘露醇分解甘露醇 + - -致病性致病性 強(qiáng)強(qiáng) 弱弱 弱弱觀察并記錄實驗結(jié)果觀察并記錄實驗結(jié)果 分離培養(yǎng)、觀察菌落特征：分別取三種葡萄球菌培養(yǎng)物，分離培養(yǎng)、觀察菌落特征：分別取三種葡萄球菌培養(yǎng)物，用分離劃線方法接種血平板，用分離劃線方法接種血平板，37培養(yǎng)培養(yǎng)18-24h以后觀察結(jié)以后觀察結(jié)果（記錄結(jié)果）。果（記錄結(jié)果）。 革蘭染色、觀察形態(tài)學(xué)特征：取葡萄球菌培養(yǎng)物少許涂片，革蘭染色、觀察形態(tài)學(xué)特征：取葡萄球菌培養(yǎng)物少許涂片，革蘭染

4、色、鏡檢（畫圖）。革蘭染色、鏡檢（畫圖）。 生化反應(yīng)（示教）：分別取三種葡萄球菌培養(yǎng)物，用穿刺生化反應(yīng)（示教）：分別取三種葡萄球菌培養(yǎng)物，用穿刺接種的方法接種甘露醇生化反應(yīng)管，接種的方法接種甘露醇生化反應(yīng)管， 37培養(yǎng)培養(yǎng)18-24h以以后觀察結(jié)果（示教）。后觀察結(jié)果（示教）。血漿凝固酶實驗血漿凝固酶實驗實驗原理實驗原理 血漿凝固酶是金黃色葡萄球菌的致病物質(zhì)，有二血漿凝固酶是金黃色葡萄球菌的致病物質(zhì)，有二種：游離型和結(jié)合型；前者可使血漿中纖維蛋白種：游離型和結(jié)合型；前者可使血漿中纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白導(dǎo)致血漿凝固；后者使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白導(dǎo)致血漿凝固；后者使纖維蛋白原變?yōu)槔w維蛋白，使葡萄球

5、菌凝聚成顆粒。原變?yōu)槔w維蛋白，使葡萄球菌凝聚成顆粒。生理鹽水生理鹽水血漿血漿耐熱核酸酶實驗?zāi)蜔岷怂崦笇嶒瀸嶒炘韺嶒炘?致病性葡萄球菌產(chǎn)生，耐受煮沸，能分解致病性葡萄球菌產(chǎn)生，耐受煮沸，能分解DNA，使含甲苯胺藍(lán)核酸瓊脂顯示粉紅色。使含甲苯胺藍(lán)核酸瓊脂顯示粉紅色。鏈球菌形態(tài)與培養(yǎng)鏈球菌形態(tài)與培養(yǎng) 形態(tài)與染色：形態(tài)與染色： G+，鏈狀排列，無鞭毛、芽胞。，鏈狀排列，無鞭毛、芽胞。 血平板培養(yǎng)特性：血平板培養(yǎng)特性：甲型溶血性鏈球菌甲型溶血性鏈球菌乙型溶血性鏈球菌乙型溶血性鏈球菌丙型鏈球菌丙型鏈球菌鑒定試驗（示教）鑒定試驗（示教） 桿菌肽實驗（桿菌肽實驗（A群鏈球菌）群鏈球菌） 奧普托欣敏感試驗（

6、奧普托欣敏感試驗（A群鏈球菌）群鏈球菌） 膽汁溶菌與菊糖發(fā)酵試驗（與肺炎球菌鑒膽汁溶菌與菊糖發(fā)酵試驗（與肺炎球菌鑒別）別） 血清學(xué)分群鑒定試驗（膠乳試劑盒）血清學(xué)分群鑒定試驗（膠乳試劑盒）抗鏈抗鏈“O”測定測定 實驗原理實驗原理 機(jī)體針對鏈球菌溶血素機(jī)體針對鏈球菌溶血素O可產(chǎn)生相應(yīng)抗體可產(chǎn)生相應(yīng)抗體(ASO)，ASO高滴度的病人血清被適量的溶血素中和掉正高滴度的病人血清被適量的溶血素中和掉正常水平的抗體后還有常水平的抗體后還有ASO多余，此多余的抗體即多余，此多余的抗體即與與ASO膠乳試劑反應(yīng)，出現(xiàn)清晰均勻的乳膠顆粒。膠乳試劑反應(yīng)，出現(xiàn)清晰均勻的乳膠顆粒。 實驗材料實驗材料 ASO快速凝集膠乳

7、試劑盒快速凝集膠乳試劑盒 病人血清病人血清 玻片玻片實驗方法實驗方法 加血清加血清1滴滴 加溶血素加溶血素O1滴滴,搖動搖動1min 加加ASO膠乳試劑膠乳試劑1滴，搖動滴，搖動35min結(jié)果結(jié)果 出現(xiàn)清晰凝集顆粒為陽性出現(xiàn)清晰凝集顆粒為陽性 注意事項：玻片扔入廢棄缸注意事項：玻片扔入廢棄缸抗鏈抗鏈“O”測定測定肺炎球菌肺炎球菌 腦膜炎球菌腦膜炎球菌 淋球菌淋球菌 實驗內(nèi)容實驗內(nèi)容 肺炎球菌肺炎球菌 腦膜炎球菌腦膜炎球菌 淋球菌標(biāo)本片觀察淋球菌標(biāo)本片觀察 實驗結(jié)果：畫圖實驗結(jié)果：畫圖肺炎鏈球菌形態(tài)與肺炎鏈球菌形態(tài)與染色染色 革蘭陽性雙球菌革蘭陽性雙球菌 直徑直徑1m。矛頭狀，。矛頭狀，鈍端相對鈍端相對 厚莢膜厚莢膜 + 鞭毛鞭毛 - 芽胞芽胞 - 自溶酶自溶酶 +腦膜炎球菌形態(tài)與染色腦膜炎球菌形態(tài)與染色 G- ，0.6-0.8m 腎形或豆形，成雙腎形或豆形，成雙排列，凹面相對；排列，凹面相對； 病人腦脊液（病人腦脊液（CSF）中典型，多位于中中典型，多位于中性粒細(xì)胞內(nèi)；性粒細(xì)胞內(nèi)； 無鞭毛和芽胞；新無鞭毛和芽胞；新