1、淺談金針菇多糖對小鼠急性肝損傷的保護作用    摘要：  目的 探討金針菇多糖(polysaccharides of Flammulina velutipes, FVP)對CCl4誘導的急性肝損傷的保護作用。方法 小鼠腹腔注射CCl4橄欖油溶液(0.5%,5 mL·kg-1)12、24、48、72 h后測定血清ALT，確定CCl4急性肝損傷造模最佳時間為24 h。 FVP (75,150,300 mg·kg-1)連續口服給藥8 d，第7天采用CCl4制備小鼠急性化學性肝損傷模型，24 h后測定FVP對血清ALT、AST活性，

2、肝勻漿SOD活性、MDA含量的影響。結果 FVP能顯著降低CCl4致急性肝損傷小鼠血清ALT、AST活性，提高肝勻漿SOD的活性,降低MDA的含量。結論 金針菇多糖對CCl4誘發的小鼠應激性肝損傷有一定的保護作用。 關鍵詞：  金針菇多糖(FVP);肝損傷;CCl4;ALT;AST;MDA;SOD金針菇 (Flammulina velutipes) 屬擔子菌亞門、金錢菌屬，是一種食藥兼用菌，含有多糖、糖蛋白、蛋白聚糖、樸菇素等多種生物活性物質1，具有較高的藥用價值2,3。金針菇功能蛋白性蛋白諸如核糖體失活蛋白(robosome inactitating proteins,RIP)具有

3、抗腫瘤、抗病毒、抗蟲、抗真菌以及抗人免疫缺陷病毒(HIV) 等活性;真菌免疫調節蛋白(fungal immunomodulatory proteins,FIP) 具有抗癌、抗過敏、抗增殖、刺激免疫細胞產生多種細胞因子和免疫調節功能;金針菇毒素(flammutoxin,FTX) 具有引起哺乳動物紅細胞裂解，使腫瘤細胞溶脹破裂，改變腸上皮細胞的滲透性，促進藥物吸收等作用4-8。近年來，金針菇中另一種重要的生物活性物質即金針菇多糖(polysaccharides of Flammulina velutipes,FVP)也引起人們的關注。研究發現，金針菇多糖有抗腫瘤9-11、免疫調節12,13和一定的

4、保肝作用14，15。CCl4是一種常見的環境污染源和肝臟毒性物質，CCl4肝損傷是經典的急性化學性肝損傷動物模型，也是目前肝病研究的重要模型之一。本實驗通過建立CCl4小鼠急性肝損傷模型，進一步探討金針菇多糖對肝損傷的保護作用。1 材料與方法1.1 藥物與試劑 金針菇多糖(FVP)提取物由廣州農業科學院提供;聯苯雙酯滴丸(BDP)，廣州星群藥業股份有限公司，生產批號：EF40131;谷丙轉氨酶(ALT)、 谷草轉氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、考馬斯亮藍蛋白測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所，批號分別為：20070713，20070713，20080513，20

5、080513。1.2 動物 昆明種小鼠,雄性,體質量(20±2) g,由南方醫科大學動物中心提供，合格證號： SCXK(粵)20032002，飼養溫度(23±2) ，飼養1周后進行實驗。1.3 儀器 318K型臺式高速離心機(Sartorius,Germany);MK3型酶標儀(Labsystem,Helsinki,Finland);BS210S電子分析天平 (Sartorius,Gttingen,Germany);WH861型漩渦混合器(太倉市科教器材廠);pH S25型酸度計(上海偉業儀器廠);ULTRATURRAX T8型組織勻漿機(IKA Labortechnik,

6、Staufen,Germany);WH861    0.01)，且呈劑量依賴性關系。2.3 金針菇多糖對急性肝損傷小鼠肝組織中SOD活性的影響 如表3所示，與正常對照組相比，模型組小鼠肝勻漿中SOD活性顯著降低(P< 0.01)。與模型組相比，陽性藥組和FVP各劑量組肝勻漿中SOD活性顯著升高。2.4 金針菇多糖對急性肝損傷小鼠肝組織中MDA含量的影響 如表3所示，與正常對照組相比，MDA含量顯著增加(P< 0.01)。與模型組相比，陽性藥組和FVP各劑量組肝勻漿中MDA含量顯著降低(P< 0.01)，且呈劑量依賴性關系。表1 CCl4

7、造模后血清ALT在不同時間點的變化表2 FVP對急性肝損傷小鼠血漿ALT和AST的影響與正常對照組比較: #P<0.01;與模型組比較: *P<0.05，*P<0.01表3 FVP對急性肝損傷小鼠肝組織SOD活性和MDA含量的影響與正常對照組比較: #P<0.01;與模型組比較:*P<0.013 討論實驗結果表明，小鼠腹腔注射CCl4 24 h后，血清ALT值達到峰值，因此本實驗在研究金針菇多糖對CCl4急性肝損傷時選擇造模時間為24 h。CCl4肝損傷是經典的急性化學性肝損傷動物模型，也是目前肝病研究的重要模型之一。相關研究表明，CCl4誘導小鼠急性肝損傷的機制

8、為CCl4經肝微粒體CytP450激活后產生了自由基(CCl3·或CCl3OO·)，這些自由基不僅攻擊膜上的磷脂分子引起脂質過氧化反應產生MDA等脂質過氧化產物，而且會與肝微粒體脂質和蛋白質發生共價結合，破壞肝臟細胞膜的結構，導致細胞內的轉氨酶如ALT、AST等釋放進入血液。此外，它們還能抑制細胞膜和微粒體膜上鈣泵的活性，使鈣離子內流增加，造成肝細胞脂質過氧化反應19。本實驗中，模型組小鼠血清ALT、AST的活性顯著升高，作為肝組織自由基清除劑的SOD活性顯著降低，而肝組織MDA含量明顯增多，表明CCl4誘導小鼠急性肝損傷模型建立。實驗結果表明，金針菇多糖對CCl4所致的小

9、鼠血漿ALT和AST活性升高有顯著的降低作用，并明顯升高肝臟SOD的活性，顯著降低脂質過氧化產物MDA的含量，作用呈明顯的量效關系。其作用機制可能為：金針菇多糖能提高抗氧化酶SOD等的活性，從提高自由基清除能力，減少自由基對細胞膜的損害，防止脂質過氧化反應，可能通過誘導肝藥物代謝酶的活性，使肝臟清除自由基的能力加強。最近研究表明，金針菇多糖具有一定的免疫調節作用，通過抑制Kuffer細胞和中性粒細胞的活性以降低炎癥損傷20，抑制NFB、ICAM1等細胞因子的活性，以抑制炎癥介質和白細胞的黏附和遷移,防止肝損傷加重21。其確切作用機理還有待于進一步探索。【參考文獻】  1 柯麗霞,楊曉

10、彤. 金針菇菌絲體糖蛋白(FMGP)的提取及理化性質J. 中國食用菌,1998,17(4): 427.2 曾慶田. 金針菇多糖的抗腫瘤作用J. 中國食用菌,1991,10(2): 11-13.3 張爾賢. 多糖類物質對O2· 和OH·的清除作用J. 中國生化藥物雜志,1995,16(1): 9-11.4 于海,王雪鵬,常維山. 核糖體失活蛋白體內外抗病毒的實驗研究J. 微生物學通報,2005,32 (5): 107-113.5 WANG H X,NG T B. Flammulin: a novel ribosomeiactivating protein from fruit

11、ing bodies of the winter mushroom Flammulina velutipesJ. Biochem Cell Biol, 2000,78: 699-702.6 HSIEH K Y,HSU C I,LIN J Y,et al. Oral administration of an edible mushroom derived protein inhibits the development of food all allergic reactions in miceJ. Clinic & Experimental Allergy,2003,33(11): 1

12、595-1565.7 ENDO Y,TSURUGI K. NGlycosidase activity of ricin A. Machanism of action of toxic ricin on eucaryotic ribosomesJ. J Biol Chem,1987,262: 8128-8130.8 TOMITA T,ISHKAW D,NOGUCHI T,et al. Assembly of flammutoxin,a cytolytic protein from the edible mushroom Flammulina velutipes,into a pore formi

13、ng ring shaped oligomer on the target cellJ. Biochem,1998,333: 129-137.9 嚴茂祥,陳芝蕓,項柏康,等. 金針菇多糖對小鼠移植性腫瘤抗瘤效應的實驗研究J. 中國中醫藥科技,1999,6(6): 397.10 苗立成,王立強,吳迪,等. 金針菇多糖對小鼠抗腫瘤及抗白血病效應的實驗研究J. 解放軍藥學學報,2003,19(3): 171.11 嚴茂祥,陳芝蕓,項柏康,等. 金針菇多糖對Lewis肺癌荷瘤小鼠的抑瘤作用及免疫功能的影響J. 中國中醫藥科技,2003,10(4): 226.12 朱曙東,嚴茂祥,陳芝蕓,等. 金針菇多糖免疫活性的研究J. 浙江中醫學院學報,2001,25(4): 43.13 嚴茂祥,陳芝蕓,項柏康,等. 金針菇多糖對小鼠體內脾淋巴細胞轉化、自然殺傷細胞活性及白細胞介素2產生的影響J. 中國中西醫結合雜志,2001,21(增刊): 105.14 PANG X B,YAO W B,YANG X B,et al. Purification,characterizat