1、I群4型禽腺病毒滅活疫苗的試制及質量評價1987年,一種由禽腺病毒(Fowlaviadenoviruses,FAdVs)引起的心包積水肝炎綜合征(Hydropericardialhepatitissyndrome,HHS)為典型病理變化的疾病在巴基斯坦靠近卡拉奇的安卡拉地區被發現,故該病又稱為安卡拉病、安哥拉病(Angola'sdisease,ADV)、荔枝病,經鑒定病原為禽腺病毒4型(Fowladenovirusserotype-4,FAdV-4)。2015年6月以來,該病在我國安徽、河南、遼寧、山東、吉林、河北等部分地區暴發,死亡率高達20%30%給我國的養禽業帶來了較大的,損失。

2、近幾年,在國內報道的主要流行株是血清4型和8b型禽腺病毒,其中血清4型毒株占據主導地位,而目前市場上沒有正規商品化疫苗進行針對性預防。因此,血清4型的疫苗研制對防控該病就顯得尤為重要。1 .禽腺病毒4型(Fowladenovirusserotype-4,FAV-4)的培養方式選擇：為了能夠加快試制進度,避免中間試制過程出現阻礙,在試制開始之前,需要對FAdV-4進行初步的培養特性研究，以選擇一種最佳的培養擴毒載體。當前疫苗企業在大生產過程中培養禽病毒的主要方式有兩種,一是雞胚擴毒,二是細胞擴毒,兩種方式各有其優缺點。但是,FAdV-4究竟適合哪種方式培養擴毒，需要通過試驗來獲悉。本試驗通過接種

3、無特定病原體(SpecficpathogenFree,SPF)雞胚與雞肝癌細胞(LMH細胞)兩種方式培養FAdV-4,結果發現從培養的效果來看，接種SPF®胚培養FAdV-4,會隨著傳代次數的增多,病毒的效價會逐漸降低,通過接種卵黃囊能獲得較高的效價,通過尿囊腔接種培養獲得的FAdV-4病毒液效價并不高。但,實際的大生產,通過卵黃囊接種的方式比通過尿囊腔接種的方式效率低,不利于后期大生產。通過LMHffl胞培養擴毒，不僅可以連續培養，傳代次數的增多對病毒效價的影響不大,而且LMHffl胞培養擴毒,能夠獲得較高的病毒效價。2 .接毒方式篩選：確立了LMHffl胞培養FAdV-4的方案，

4、對于當前運用較多的幾種接毒方式,哪一種更適合于FAdV-4的接種呢?本研究試制通過篩做三種接毒方式（吸附接種法、不吸附接種法、同步接種法）的對比試驗,最終確定以不吸附接種法更適合于FAdV-4的培養,而同步接種法適合于FAdV-4的病毒含量測定。3.兩種血清的對比:血清對細胞的培養起著關鍵的作用,因此,血清也是運用細胞生產線生產疫苗的企業最大成本項,選出最合適、最經濟的培養血清,有利于后期規模化生產FAdV-4疫苗，本試制研究通過對當前市場上較為暢銷的兩家企業（金源康及維克生）血清做對比試驗,獲得的試驗結果表明維克生血清更加適合于LMHffl胞的培養；而金源康血清更加適合于LMHffl胞的換液

5、接毒。4.生產種毒的制備、保種、檢測：由于本試驗需采用LMHffl胞培養FAdV-4,因此所需的種毒量較多,故前期需制備足夠量的生產種毒,并且為了防止種毒的效價隨著保存時間的延長而降低,所以須對種毒進行擴繁,同時篩選效價高的批次作為生產種毒，并同時對該批次進行凍干保種。本試驗采用LMHffl胞培養FAdV-4,本試驗采用不吸附接種法接種LMFffl胞培養FAdV-4擴毒，共獲得6000mL種毒,凍干保種100瓶。按照生物品檢驗規程進行病毒含量、外源病毒、細菌、支原體等進行檢測,所有檢測指標均滿足要求。5.半成品的制備及檢測:本試制研究將FAdV-4生產種毒按0.1%的接毒比但J接種到LMHff

6、l胞中，以轉瓶培養的方式進行生產，制備抗原液,共制備了5批半成品,經檢測,本次試制所獲得的5批半成品的所有檢測指標均符合要求,表明該工藝流程能夠穩定生產出合格的半成品,可推廣到大生產中。6.成品的制備及質量評價:本試驗制通向獲得的5批半成品中加入礦物油佐劑,進行混合乳化制得5批I群4型禽腺病毒滅活疫苗,用于預防I群4型禽腺病毒引起的心包積水肝炎綜合征(HHS),按照生物品檢驗規程對此5批成品的質量進行性狀、裝量、無菌、安全性、效價、甲醛殘留量等指標的檢測,各評價指標均滿足要求。同時,還制備了一批新流腺三聯滅活疫苗,與其他廠家的新流腺三聯滅活疫苗進行了對比,對比顯示,試制的這批新流腺三聯滅活疫苗的質量,與國