1、1短期、亞慢性和慢性毒性作用短期、亞慢性和慢性毒性作用2急性毒性試驗的局限性：急性毒性試驗的局限性： 1.1.外源性化學物在長期重復染毒時可產生與急性外源性化學物在長期重復染毒時可產生與急性毒性試驗完全不同的毒作用。如：苯毒性試驗完全不同的毒作用。如：苯 2.2.動物的衰老可影響毒作用的性質和程度動物的衰老可影響毒作用的性質和程度 3.3.許多重要疾病均與年齡增長有關許多重要疾病均與年齡增長有關一、概一、概 述述3分類分類 1. 重復劑量毒性作用（短期）重復劑量毒性作用（短期） 2. 亞慢性毒性作用亞慢性毒性作用 3. 慢性毒性作用慢性毒性作用4（一）蓄積作用（一）蓄積作用 1.1.蓄積作用蓄

2、積作用(accumulation)(accumulation)： 當外源化學物連續地、反復地進入機體，而且吸當外源化學物連續地、反復地進入機體，而且吸收速度（或總量）超過代謝轉化和排泄的速度（或總收速度（或總量）超過代謝轉化和排泄的速度（或總量）時，量）時，化學毒物化學毒物或或其代謝物其代謝物在機體內逐漸增加并貯在機體內逐漸增加并貯留，這種現象為化學毒物的蓄積作用。留，這種現象為化學毒物的蓄積作用。 蓄積作用是發生亞慢性、慢性毒作用的前提蓄積作用是發生亞慢性、慢性毒作用的前提5 2.2.儲存庫（儲存庫（depotdepot）：）： 化學毒物容易蓄積的組織和器官稱為儲存庫。機化學毒物容易蓄積的組

3、織和器官稱為儲存庫。機體常見的儲存庫有血漿蛋白、脂肪組織、肝臟、腎臟、體常見的儲存庫有血漿蛋白、脂肪組織、肝臟、腎臟、骨骼等。骨骼等。 如骨骼為鉛的儲存庫。如骨骼為鉛的儲存庫。 蓄積形式蓄積形式: : 原形原形 代謝產物代謝產物 結合形式結合形式63.3.蓄積的分類：蓄積的分類： 物質蓄積物質蓄積 功能蓄積功能蓄積 73.1 3.1 物質蓄積（物質蓄積（material accumulationmaterial accumulation）：）： 化學毒物反復多次染毒實驗動物后，用化化學毒物反復多次染毒實驗動物后，用化學分析方法能測得機體內或某些器官組織內存學分析方法能測得機體內或某些器官組織內

4、存在該化合物的原型或其代謝產物。在該化合物的原型或其代謝產物。8 3.2 3.2 功能蓄積（功能蓄積（functional accumulationfunctional accumulation）：）： 化學毒物反復多次染毒實驗動物后，機體內雖不能化學毒物反復多次染毒實驗動物后，機體內雖不能檢出化學毒物，然而機體可以出現慢性中毒現象。檢出化學毒物，然而機體可以出現慢性中毒現象。 注：功能蓄積是損害效應累計的結果。也可能是由于存留功能蓄積是損害效應累計的結果。也可能是由于存留的化學毒物或代謝物數量極微，目前技術方法尚不能檢出的一種的化學毒物或代謝物數量極微，目前技術方法尚不能檢出的一種物質蓄積，

5、或者物質蓄積與功能蓄積兼而有之物質蓄積，或者物質蓄積與功能蓄積兼而有之9（二）蓄積作用的意義（二）蓄積作用的意義 毒理學中，評價化學毒物有無蓄積作用，毒理學中，評價化學毒物有無蓄積作用，有助于：有助于： 1.1.化學毒物是否引起潛在的慢性毒性依據化學毒物是否引起潛在的慢性毒性依據 2.2.制定衛生限量標準時選擇安全系數的一制定衛生限量標準時選擇安全系數的一 種依據種依據10（三）蓄積作用的研究方法（三）蓄積作用的研究方法 1 1、蓄積系數法（、蓄積系數法（accumulation coefficientaccumulation coefficient） 2 2、生物半減期法（、生物半減期法（b

6、iological half-life, tbiological half-life, t1/21/2）111 1 蓄積系數法蓄積系數法 1.1 蓄積系數法：以生物效應為指標，用經驗系數（K）評價蓄積作用的方法，即將多次染毒與一次染毒所產生的毒性效應（或死亡）進行比較 K是指多次接觸達到預期效應的累計劑量與一次接觸能出現相同效應劑量的比值。 K=ED50（n）/ED50(1) 如果以動物死亡一半為效應指標，則 K=LD50（n）/LD50(1) 12 K值越小：表示化學物的蓄積性越大 K=5 化合物蓄積性弱13 蓄積系數分級標準蓄積系數（K）蓄積毒級分級 1高度蓄積1明顯蓄積3中等蓄積5輕度蓄

7、積141.2 1.2 蓄積系數法常用試驗方案蓄積系數法常用試驗方案 A 固定劑量法 B 劑量遞增法 C 劑量固定的20天蓄積法15A A 固定劑量法固定劑量法 在事先求出毒物的LD50的前提下，選取相同條件的40只（或更多）動物，隨即分為2組：實驗組和對照組。每組至少20只，雌雄各半。 在1/201/5LD50 之間選擇一個固定劑量，每日固定劑量、定時和相同途徑染毒 試驗組累計發生一半動物死亡。如接觸劑量已累計達5個LD50，也可終止。 實驗期限最短為25天（1/5LD50），最長100天（1/20LD50）16l 常用大鼠或小鼠常用大鼠或小鼠l 染毒途徑多用灌胃或者腹腔注射染毒途徑多用灌胃或

8、者腹腔注射17B B 劑量遞增法劑量遞增法 動物及分組：常用大或小鼠，40（或更多）分染毒組和對照組，每組至少20只，雌雄各半。 終止時間：試驗組累計發生一半動物死亡。在第21天也可結束，因累計劑量已達5.26 LD50。18C C 劑量遞增劑量遞增2020天法：天法： 動物分組：1/20 LD50、1/10LD50、1/5 LD50、1/2LD50和對照組5個組，每組10只，雌雄各半。 每日染毒一次，連續20天 評定標準： （1）各劑量組均無死亡，蓄積性不明顯； （2）僅1/2 LD50劑量組有死亡，其他組無死亡，則為弱蓄積性； （3）若1/20 LD50劑量組無死亡，其他各組間死亡數有劑量

9、反應關系，則為中等蓄積性； （4）若1/20 LD50劑量組有死亡，且有劑量反應關系，則為強蓄積性。191.4 1.4 局限性局限性 1.對于具有免疫毒性的物質不適用 2.不能判斷化學毒物的蓄積是物質蓄積或功能蓄積 3.蓄積系數法，以死亡為指標，用LD50表示生物效應，有急性試驗的局限性，可能漏檢某些指標。 202 2、生物半減期法、生物半減期法 是利用毒物動力學原理闡明化學毒物在機體內的蓄積作用特征。 原理：機體內蓄積的速度和量與單位時間內吸收該物質的速度和量，以及清除的速度和量有關。 t1/2反映物質從機體內清除速度的參數，理論上，在等間距離接觸下，6個生物半減期即可達極限值98.4%。

10、21lt1/2越大，在機體內蓄積的可能性越大lt1/2越小，到達極限的時間越短l 蓄積極限值1.44t1/2每日接觸量22（二）（二） 基本概念基本概念231. 1. 短期重復劑量毒性短期重復劑量毒性 指實驗動物或人連續接觸外源化學物指實驗動物或人連續接觸外源化學物14-3014-30天所產生的中毒效應。天所產生的中毒效應。24 2. 2.亞慢性毒性（亞慢性毒性（subchronic toxicity subchronic toxicity ）：）： 是指人或實驗動物連續較長期接觸某一外源化學毒物所是指人或實驗動物連續較長期接觸某一外源化學毒物所出現的中毒效應。出現的中毒效應。 一般在相當于一

11、般在相當于1/101/10左右生命時間（壽命）內左右生命時間（壽命）內 亞慢性毒性試驗：亞慢性毒性試驗： 指在實驗動物的指在實驗動物的1/101/10左右（如大鼠左右（如大鼠 3 3個月）的生命時間個月）的生命時間內，反復多次給予低劑量化學毒物，觀察試驗動物有無引起內，反復多次給予低劑量化學毒物，觀察試驗動物有無引起有害作用的試驗過程。有害作用的試驗過程。 25 3. 3. 慢性毒性（慢性毒性（chronic toxicitychronic toxicity）：是指人或實）：是指人或實驗動物長期（甚至終生）反復接觸低劑量的化學毒物所驗動物長期（甚至終生）反復接觸低劑量的化學毒物所產生的毒性效應

12、。產生的毒性效應。 一般一般2 2年年 慢性毒性試驗：在受試動物生命的大部分或終生，慢性毒性試驗：在受試動物生命的大部分或終生，連續長期給予低劑量的受試物，觀察有無引起有害作用連續長期給予低劑量的受試物，觀察有無引起有害作用的試驗過程。的試驗過程。2627試驗目的 1. 1. 觀察長期接觸受試物的毒性效應譜、毒作用觀察長期接觸受試物的毒性效應譜、毒作用特點和靶器官；了解其毒性機制。特點和靶器官；了解其毒性機制。 2. 2. 觀察受試物亞慢性毒性作用的可逆性觀察受試物亞慢性毒性作用的可逆性28l可逆毒性可逆毒性: 是指停止接觸后可逐漸消失的毒性作用。一般情況下，機體接觸毒物的濃度越低、時間越短、

13、損傷越輕，則脫離接觸后其毒性作用消失的越快。l不可逆毒性不可逆毒性 是指停止接觸后其毒性作用依然存在甚至對機體造成的損害作用進一步加深。注注： 一種毒物引起的組織病理學損傷，其再生能力在很大程度上決定于毒性效應的可逆和不可逆性 有些毒物所造成的損害是不可逆的，如損傷中樞神經系統多數是不可逆的，因為已分化的中樞神經細胞不能再分裂 29 4. 確定不同動物對受試物的毒效應的差異，為將研究結果外推到人提供依據。 3. 3. 研究重復接觸受試物毒性作用的劑量研究重復接觸受試物毒性作用的劑量- -反應反應（效應）關系，從初步了解到確定未觀察到有害作用（效應）關系，從初步了解到確定未觀察到有害作用的劑量（

14、的劑量（NOAELNOAEL）和觀察到有害作用的最小劑量）和觀察到有害作用的最小劑量（LOAELLOAEL），為制定人類接觸的安全限量提供參考值），為制定人類接觸的安全限量提供參考值30二、研究方法 （一）實驗設計31 1 1 實驗動物選擇實驗動物選擇 （1）物種和品系 32急性原則：急性原則：l * * 盡量選擇急性毒性反應與人近似的動物；盡量選擇急性毒性反應與人近似的動物；l * * 易于飼養管理、試驗操作方便的動物；易于飼養管理、試驗操作方便的動物；l * * 繁殖生育能力較強，數量較大能夠保障供應；繁殖生育能力較強，數量較大能夠保障供應；l * * 價格較低，易與獲得的動物。價格較低，

15、易與獲得的動物。 亞慢性原則：亞慢性原則：n * * 理論上，選取對化學毒物代謝過程、生理反應和生化特性基理論上，選取對化學毒物代謝過程、生理反應和生化特性基本上與人接近，且本上與人接近，且在急性試驗中證明是對化學毒物敏感的物種和品在急性試驗中證明是對化學毒物敏感的物種和品系系 實際上，常用大鼠實際上，常用大鼠 犬犬 豚鼠豚鼠 33l （2）性別、年齡和數量 雌雄各半； 剛斷乳的動物：大鼠68周齡（80-100g），同組動物體重不超過10%、組間平均體重不超過5% 大鼠、小鼠每組不少于20只，犬、猴不少于6只，要求試驗結束時，活的動物數能保證統計學處理。34 亞慢性毒性試驗亞慢性毒性試驗 年齡

16、：大鼠年齡：大鼠80100g 狗狗 812月月 小鼠小鼠1015g數量：小動物數量：小動物20 大動物大動物6性別：雌雄各半性別：雌雄各半 慢性毒性試驗慢性毒性試驗年齡：大鼠年齡：大鼠 5070g 狗狗 8月月 小鼠小鼠 初斷乳初斷乳數量：小動物數量：小動物40 大動物大動物8性別：雌雄各半性別：雌雄各半35（3 3）微生物學寄生蟲學等級和飼養環境）微生物學寄生蟲學等級和飼養環境 應選擇清潔級及以上等級動物 動物室：清潔、溫度22oC3，濕度30-70%，人工控制晝夜交替 籠具：大小適中、動物能自由活動 飼料：營養合理 飲用水：清潔、充足36 2 染毒方式與期限 染毒方式染毒方式原則：原則：

17、1 1）盡量選用與人群實際接觸相同的途徑和方式）盡量選用與人群實際接觸相同的途徑和方式 食品、藥品、環境污染物食品、藥品、環境污染物 2 2）并與預期進行慢性毒性試驗的接觸途徑一致。）并與預期進行慢性毒性試驗的接觸途徑一致。 一般以經口、經呼吸道和經皮膚三種途徑一般以經口、經呼吸道和經皮膚三種途徑 染毒，每日一次，連續給予染毒，每日一次，連續給予37染毒期限染毒期限 取決于實驗具體要求和所選擇的實驗動物取決于實驗具體要求和所選擇的實驗動物 l工業毒理學工業毒理學 3 36 6個月個月l食品毒理學食品毒理學 6 6個月個月1 1年年l環境毒理學環境毒理學 6 6個月個月1 1年年l致癌試驗致癌試

18、驗 接近或等于動物的預期壽命接近或等于動物的預期壽命38注意的問題：注意的問題：（1）小動物：灌胃或喂飼法）小動物：灌胃或喂飼法 大動物：膠囊法或灌胃法大動物：膠囊法或灌胃法喂飼法注意：喂飼法注意： 混合均勻混合均勻 受試物穩定受試物穩定 保證營養保證營養 受試物摻入量嚴格規定受試物摻入量嚴格規定39（2）呼吸道染毒 染毒時間：2-6h/d 亞慢性：4小時 慢性試驗： 間歇性：工業毒物 6-8小時 連續性：環境接觸 22-24小時 40 （3）注射）注射 （4）最好結合毒物動力學血藥濃度的監測，）最好結合毒物動力學血藥濃度的監測，以保持生物學效應的每日相似性以保持生物學效應的每日相似性413

19、劑量選擇和分組 （1 1）分組分組： 原則：一般設3個試驗組和1個陰性（溶劑）對照組。 最高劑量組：要求出現明顯的中毒癥狀或某些觀察指標發生明顯變化，但動物不死亡，即使有死亡，不超過10% 最低劑量組：應無中毒反應或極輕微反應（ NOAEL)。 中劑量組相：當于觀察到有害作用的最低劑量(LOAEL) 高、中、低劑量組距以310倍為宜，不少于2倍42（2 2） 劑量設計：劑量設計： 以相同物種的短期毒性資料為依據。以相同物種的短期毒性資料為依據。 亞慢性毒性試驗可依據急性毒性的閾劑量或以亞慢性毒性試驗可依據急性毒性的閾劑量或以1/201/201/5LD1/5LD5050確定；確定； 慢性毒性試驗

20、以亞慢性毒性試驗效應的最大耐受量（慢性毒性試驗以亞慢性毒性試驗效應的最大耐受量（MTDMTD）為）為最高劑量。最高劑量。 劑量選擇步驟劑量選擇步驟： 急性急性 亞急性亞急性 亞慢性亞慢性 慢性慢性 43 對于人群主動攝入的食品和藥品，可采用人對于人群主動攝入的食品和藥品，可采用人體可能接觸的最高劑量為劑量設計依據體可能接觸的最高劑量為劑量設計依據 大大 鼠：鼠： 3個劑量組：個劑量組：10 30 100 非嚙齒類：非嚙齒類： 3個劑量組：個劑量組：5 15 50l根據專業特殊性和管理部門有所區別根據專業特殊性和管理部門有所區別44l亞慢性毒性的劑量選擇l陰性對照組陰性對照組l低劑量組低劑量組l

21、中劑量組中劑量組l高劑量組高劑量組 急性毒性的閾劑量急性毒性的閾劑量 1/201/5 LD50l組距：組距：310倍，最低不小倍，最低不小于于2倍倍l慢性毒性的劑量選擇l陰性對照組陰性對照組l低劑量組低劑量組l中劑量組中劑量組l高劑量組高劑量組 亞慢性閾劑量或其亞慢性閾劑量或其1/51/2 1/10 LD50l組距：組距：25倍，最低不小于倍，最低不小于2倍倍454 觀察指標46（1）一般觀察1 1）進食量、外觀體征、行為活動）進食量、外觀體征、行為活動 綜合性指標綜合性指標 初步判斷作用部位、損害程度初步判斷作用部位、損害程度472 2）動物體重：）動物體重： 體重的增長情況是綜合反映動物健

22、康狀況最基本的體重的增長情況是綜合反映動物健康狀況最基本的靈敏指標之一，受食欲、消化功能、代謝和能量消化變靈敏指標之一，受食欲、消化功能、代謝和能量消化變化的影響。化的影響。 如發現實驗組動物體重增長減慢，停止或減輕，在如發現實驗組動物體重增長減慢，停止或減輕，在排除由于異味引起食欲不佳的前提下，可說明化學毒物排除由于異味引起食欲不佳的前提下，可說明化學毒物的毒性效應。的毒性效應。 表示方法：表示方法： （1 1）體重絕對增長量）體重絕對增長量 （2 2）體重增長百分率（）體重增長百分率（1010） （3 3）劑量）劑量- -反應關系反應關系 48 3 3）飼料消耗量：）飼料消耗量： 食物利用

23、率：動物每攝入食物利用率：動物每攝入100g100g飼料所增長的體重飼料所增長的體重克數（克數（g g體重體重/100g/100g飼料）飼料） 評價：食物利用率有助于了解化合物毒性效應評價：食物利用率有助于了解化合物毒性效應 觀察內容：影響食欲觀察內容：影響食欲 影響食物的吸收、代謝影響食物的吸收、代謝 食物利用率體重增長食物利用率體重增長/ /進食量進食量 49 （2 2）實驗室監測項目）實驗室監測項目l 血、尿常規和血液生化指標血、尿常規和血液生化指標l 目的：發現受試物所致器官損傷和器官紊亂目的：發現受試物所致器官損傷和器官紊亂l 檢查重點：肝臟、腎臟、血液檢查重點：肝臟、腎臟、血液50

24、1）血液學檢查 包括紅細胞計數、血紅蛋白含量、白細胞計數及分類、凝血時間等2）血液生化檢查（針對肝臟、腎臟及相關可能靶部位選擇） 注：一般只需在實際結束后處死動物采血檢驗 如需在實驗過程中采集血樣，最大采血量不能超過總血量的10% 3）尿液51（3）系統尸解和組織病理學）系統尸解和組織病理學l1）臟器重量和）臟器重量和臟器系數：臟器系數： 臟器系數（比）：指某個臟器的濕重與單位體重臟器系數（比）：指某個臟器的濕重與單位體重的比值，通常是每的比值，通常是每100g100g體重中某臟器所占的質量。體重中某臟器所占的質量。 在不同的年齡期，實驗動物各個臟器與體重比值在不同的年齡期，實驗動物各個臟器與

25、體重比值有一定規律，若化學毒物使某個臟器受損，其比值會有一定規律，若化學毒物使某個臟器受損，其比值會發生變化，是一項靈敏、有效和經濟的指標。發生變化，是一項靈敏、有效和經濟的指標。 52 臟器系數增大：臟器系數增大： 增生、充血、水腫增生、充血、水腫 臟器系數減小：臟器系數減小： 臟器發育不良、萎縮臟器發育不良、萎縮53尸解對象：l實驗過程中死亡的或者試驗結束后未死亡的觀察的主要臟器： 心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、卵巢（睪丸）、腦等54 2 2）病理學檢查）病理學檢查 目的：確定化合物對毒作用的靶部位，損傷的性目的：確定化合物對毒作用的靶部位，損傷的性質和程度，從病理學角度尋找化學毒物與病理改

26、變的質和程度，從病理學角度尋找化學毒物與病理改變的劑量效應關系，為了解化合物的毒效應及機制提供劑量效應關系，為了解化合物的毒效應及機制提供依據。依據。 檢查內容：大體檢查、常規病理組織學檢查、酶檢查內容：大體檢查、常規病理組織學檢查、酶組織化學化學檢查、免疫組織化學檢查、細胞超微結組織化學化學檢查、免疫組織化學檢查、細胞超微結構檢查。構檢查。 55常規病理組織學檢查常規病理組織學檢查 HE染色原理：蘇木素-伊紅染色，又叫常規染色和普通染色。主要用來顯示各種組織正常成分和病變的一般形態，進行總體觀察。56免疫組織化學法免疫組織化學法 間接免疫熒光法 親合素-生物素技術57間接免疫熒光法原理間接免

27、疫熒光法原理 抗原與一抗結合和，再用標記熒光色素的二抗與第一抗結合，在熒光顯微鏡下發出熒光來間接顯現抗原。5859親合素親合素-生物素技術原理生物素技術原理 親合素又稱卵蛋白素，是從卵蛋白中提取的一種糖蛋白，每個親合素上有4個與生物素分子結合力極高的位點，兩者間的親和力比抗原抗體大100萬倍。第二抗體結合上生物素，變為生物素化抗體。再將親合素與過氧化酶標生物素結合在一起，形成親合素-生物素-過氧化物酶復合物（ABC復合物）。 60親合素親合素-生物素技術生物素技術6162 （4）可逆性檢查）可逆性檢查 最后一次給藥后最后一次給藥后24h24h，每組活殺部分動物（如，每組活殺部分動物（如2/32

28、/3），檢測各項指標，余下動物停止染毒，繼續），檢測各項指標，余下動物停止染毒，繼續觀察觀察2-42-4周。周。 重點觀察毒性反應器官，以了解毒性反應的可重點觀察毒性反應器官，以了解毒性反應的可逆性和可能出現的遲緩性毒性逆性和可能出現的遲緩性毒性63（5）指標觀察時間）指標觀察時間 一般狀況和癥狀，每天觀察一次一般狀況和癥狀，每天觀察一次 每周記錄飼料消耗量和動物體重各一次每周記錄飼料消耗量和動物體重各一次 實驗時間實驗時間3個月個月 實驗時間實驗時間3個月個月64（6 6）特異性指標及其它）特異性指標及其它 特異性指標是指能反映毒物對機體毒作用本質的特異性指標是指能反映毒物對機體毒作用本質的

29、特征性指標，常與其毒作用機制有關，有時可作為效特征性指標，常與其毒作用機制有關，有時可作為效應生物學標志。應生物學標志。 對神經行為的檢查對神經行為的檢查 神經系統神經系統 心電圖、血壓心電圖、血壓 心血管系統心血管系統 65（二）長期毒性試驗的注意事項（二）長期毒性試驗的注意事項66重視實驗項目管理重視實驗項目管理合理的實驗設計合理的實驗設計 劑量設置合理劑量設置合理 獲得明確的劑量獲得明確的劑量-反應關系，理想的反應關系，理想的 NOAEL、LOAEL673.3.試驗動物環境的要求試驗動物環境的要求4.4.檢測條件的控制檢測條件的控制68三、結果評價三、結果評價 （一）明確觀察指標是否有差

30、異（一）明確觀察指標是否有差異 1. 1. 劑量相關性分析劑量相關性分析 2. 2. 反應重現性反應重現性69 3. 3. 相關指標的變化相關指標的變化 4. 4. 差異大小和性別差異差異大小和性別差異 5. 5. 歷史性對照的作用歷史性對照的作用70（二）差異是否代表有害效應（二）差異是否代表有害效應71化學品毒性鑒定程序和方法化學品毒性鑒定程序和方法l1）第一階段（急性毒性試驗、眼刺激試驗和皮膚刺激試驗） 主要是急性毒性參數的測定和了解受試樣品對皮膚、粘膜的刺激性以及致敏性，為毒性分級和標簽管理提供依據。同時，可了解受試樣品對機體造成急性損害的可能性和嚴重程度，并為第二階段各項試驗的劑量設

31、計提供依據。在測定LD50時，一般要求用兩種動物，染毒途徑應包括所有人體可能的接觸途徑。72l2 2）第二階段（亞急性毒性試驗和致突變試驗）第二階段（亞急性毒性試驗和致突變試驗） 主要是了解受試樣品的亞急性毒性和遺傳毒性，為第主要是了解受試樣品的亞急性毒性和遺傳毒性，為第三階段各項試驗劑量設計和觀察指標的選擇提供依據，并三階段各項試驗劑量設計和觀察指標的選擇提供依據，并對受試樣品的致癌性進行預測。對受試樣品的致癌性進行預測。 鼠傷寒沙門氏菌回復突變試驗（鼠傷寒沙門氏菌回復突變試驗（AmesAmes試驗）試驗） 體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗體外哺乳動物細胞染色體畸變試驗 體內哺乳動物骨髓細胞染色體畸變試驗體內哺乳動