1、交叉配血-酶法和聚凝胺法交叉交叉(jioch)(jioch)配血配血酶法與聚凝胺酶法與聚凝胺法法 by by Cherish KimCherish Kim第一頁，共十八頁。交叉配血-酶法和聚凝胺法酶介質酶介質(jizh)交叉配血法交叉配血法原理RBC表面具豐富表面具豐富唾液酸唾液酸，造成紅細胞表面帶有大量，造成紅細胞表面帶有大量負電荷負電荷，在電場力的，在電場力的作用下，紅細胞在液體中相互作用下，紅細胞在液體中相互排斥排斥，導致紅細胞，導致紅細胞不能凝集不能凝集。蛋白水解酶蛋白水解酶能能消化和破壞消化和破壞這種唾液酸減少紅細胞表面的負電荷，導致紅細胞表這種唾液酸減少紅細胞表面的負電荷，導致紅細

2、胞表面的面的Zeta電勢減小電勢減小，紅細胞間的，紅細胞間的排斥力減弱排斥力減弱，細胞間的，細胞間的距離縮短距離縮短，IgG類紅細類紅細胞血型胞血型(xuxng)抗體分子的兩個抗原結合位點可以分別結合具有相應抗原的抗體分子的兩個抗原結合位點可以分別結合具有相應抗原的紅細胞，導致紅細胞發生凝集反應。紅細胞，導致紅細胞發生凝集反應。酶介質交叉配血試驗可以檢測出獻血者或受血者血清中酶介質交叉配血試驗可以檢測出獻血者或受血者血清中是否存在是否存在IgG類類紅細胞血型抗體紅細胞血型抗體，確保受血者和獻血者血液相容，防止發生溶血性輸血，確保受血者和獻血者血液相容，防止發生溶血性輸血不良反應。不良反應。第二

3、頁，共十八頁。交叉配血-酶法和聚凝胺法實驗(shyn)儀器與試劑儀器：臺式離心機儀器：臺式離心機 37恒溫水浴箱恒溫水浴箱 顯微鏡顯微鏡試劑試劑：1%菠蘿酶溶液菠蘿酶溶液(rngy)、生理鹽水、生理鹽水標本標本：3mlABO同型全血標本同型全血標本2人份人份木瓜木瓜(m u)蛋白酶蛋白酶菠蘿蛋白酶菠蘿蛋白酶第三頁，共十八頁。交叉配血-酶法和聚凝胺法實驗(shyn)步驟1.抽取受血者靜脈血抽取受血者靜脈血34ml，待凝固后分離血清；以，待凝固后分離血清；以生生理鹽水洗滌理鹽水洗滌受血者紅細胞受血者紅細胞3次次配成配成3%紅細胞懸液紅細胞懸液2.將獻血者血標本以同樣方法分離血清；生理鹽水洗滌將獻血

4、者血標本以同樣方法分離血清；生理鹽水洗滌獻血者紅細胞獻血者紅細胞3次，配成次，配成3%紅細胞懸液紅細胞懸液3.取潔凈試管取潔凈試管2支，分別支，分別(fnbi)標記主側管和次側管。標記主側管和次側管。主側管主側管：受血者受血者血清血清2滴滴和獻血者和獻血者紅細胞懸液紅細胞懸液1滴滴次側管次側管：獻血者獻血者血清血清2滴滴和受血者和受血者紅細胞紅細胞1滴滴兩管分別加入兩管分別加入1%菠蘿酶溶液菠蘿酶溶液各各1滴滴第四頁，共十八頁。交叉配血-酶法和聚凝胺法實驗(shyn)步驟 4.陽性對照管陽性對照管：3%RhD陽性陽性O型紅細胞懸液型紅細胞懸液和和人源性人源性IgG類抗類抗D血清血清各各1滴滴，

5、1%菠蘿酶溶液菠蘿酶溶液1滴滴5. 陰性陰性(ynxng)對照對照管管：3%RhD陽性陽性O型紅細胞懸液和正常人型紅細胞懸液和正常人AB型血清各型血清各1滴滴，1%菠蘿酶溶液菠蘿酶溶液1滴滴6. 自身對照自身對照管管：受血者自身血清和受血者自身血清和3%紅細胞懸液各紅細胞懸液各1滴滴7.各試管經各試管經輕輕搖動輕輕搖動后，置后，置37水浴水浴30min8.取出試管，取出試管，輕輕搖動輕輕搖動 或經或經120g離心離心1min（或（或1300g離心離心30s），取出試管輕，取出試管輕輕搖動輕搖動9. 觀察試驗結果并記錄觀察試驗結果并記錄第五頁，共十八頁。交叉配血-酶法和聚凝胺法試驗(shyn)結

6、果1.受血者受血者自身對照管自身對照管內紅細胞內紅細胞不凝集不凝集，陽性陽性對照管紅細胞對照管紅細胞凝集凝集，陰性陰性對照管紅細胞對照管紅細胞不凝集不凝集，主、次主、次側配血管內紅細側配血管內紅細胞均胞均不凝集不凝集，表示，表示(biosh)受血者和獻血者兩血酶介質交叉受血者和獻血者兩血酶介質交叉配血配血相容相容，獻血者血液，獻血者血液可輸注可輸注2.如果受血者如果受血者自身對照管自身對照管內紅細胞內紅細胞不凝集不凝集，陽性陽性對照管紅對照管紅細胞細胞凝集凝集，陰性陰性對照管紅細胞對照管紅細胞不凝集不凝集，主主側或（和）側或（和）次次側管側管內紅細胞內紅細胞凝集凝集，則表明兩血，則表明兩血不相

7、容不相容，獻血者血液，獻血者血液不可輸不可輸注注。第六頁，共十八頁。交叉配血-酶法和聚凝胺法注意事項注意事項1. 酶處理可酶處理可增強增強一些抗原抗體系統的反應一些抗原抗體系統的反應活性活性，例如，例如Rh和和Kidd系統。酶處理后也會系統。酶處理后也會破壞破壞一些一些抗原的結構抗原的結構，例如，例如M、N、Fya、Fyb抗原抗原，導致這些抗原抗體的反應性減弱。，導致這些抗原抗體的反應性減弱。（可用抗球（可用抗球蛋白試驗）蛋白試驗）2. 應應平行進行鹽水介質交叉配血試驗平行進行鹽水介質交叉配血試驗3.紅細胞經蛋白酶修飾后可以改變紅細胞懸液的物理性質，在交紅細胞經蛋白酶修飾后可以改變紅細胞懸液的

8、物理性質，在交叉配血試驗中可以出現叉配血試驗中可以出現非特異性自身凝聚非特異性自身凝聚，因此必須使用，因此必須使用標準標準對照對照(duzho)試驗試驗，才能得出正確的試驗結果，才能得出正確的試驗結果 第七頁，共十八頁。交叉配血-酶法和聚凝胺法方法學評價方法學評價(pngji)優點：優點：操作操作簡單、快捷簡單、快捷，曾廣泛，曾廣泛使用使用(shyng)，適，適用于急診搶救患者的交叉配血用于急診搶救患者的交叉配血 缺點缺點：可能使可能使M、N、Fya、Fyb等抗原的抗等抗原的抗體體漏檢漏檢，存在輸血安全隱患，存在輸血安全隱患因此目前臨床基本已經不再使用酶介質進因此目前臨床基本已經不再使用酶介質

9、進行交叉配血試驗行交叉配血試驗第八頁，共十八頁。交叉配血-酶法和聚凝胺法低離子低離子(lz)聚凝胺介質交叉配血試驗聚凝胺介質交叉配血試驗原理：l聚凝胺（聚凝胺（polybrene）是一種高價陽性季胺鹽多聚物，溶解）是一種高價陽性季胺鹽多聚物，溶解后可以產生較多的后可以產生較多的正電荷正電荷，可以大量，可以大量中和中和紅細胞膜表面的紅細胞膜表面的負負電荷電荷，減弱減弱紅細胞之間的紅細胞之間的排斥力排斥力，使紅細胞彼此間的，使紅細胞彼此間的距離縮距離縮短短，在離心力的作用下，可以引起正常紅細胞，在離心力的作用下，可以引起正常紅細胞可逆性可逆性的的非非特異性凝集特異性凝集。l由于降低介質的離子強度，

10、可以增加由于降低介質的離子強度，可以增加(zngji)抗原抗體間的引力抗原抗體間的引力（或降低紅細胞膜的（或降低紅細胞膜的Zeta點位），可以增強血型抗體凝集紅細點位），可以增強血型抗體凝集紅細胞的能力。胞的能力。第九頁，共十八頁。交叉配血-酶法和聚凝胺法l將紅細胞和血清放置在低離子介質中孵育將紅細胞和血清放置在低離子介質中孵育(f y)，如果血，如果血清中存在不完全性紅細胞血型抗體（清中存在不完全性紅細胞血型抗體（IgG類），可以促類），可以促進抗體和紅細胞膜血型抗原結合，加入聚凝胺促進紅細進抗體和紅細胞膜血型抗原結合，加入聚凝胺促進紅細胞凝集。胞凝集。l離心后，加入離心后，加入重懸浮液重懸

11、浮液，中和中和聚凝胺的凝集作用，使正常聚凝胺的凝集作用，使正常紅細胞的紅細胞的凝集解散凝集解散，而，而抗原抗體結合抗原抗體結合引起的紅細胞凝集引起的紅細胞凝集不不會散開會散開。第十頁，共十八頁。交叉配血-酶法和聚凝胺法第十一頁，共十八頁。交叉配血-酶法和聚凝胺法實驗實驗(shyn)儀器與試劑儀器與試劑儀器儀器： 臺式離心機、顯微鏡臺式離心機、顯微鏡試劑試劑 ：生理鹽水生理鹽水 低離子介質低離子介質(jizh)（LIM） 聚凝胺試劑聚凝胺試劑 重懸浮液重懸浮液標本標本 ：3mlABO同型全血標本同型全血標本2人份人份第十二頁，共十八頁。交叉配血-酶法和聚凝胺法實驗實驗(shyn)步驟步驟1.抽取

12、受血者靜脈血抽取受血者靜脈血34ml，待凝固后，待凝固后分離血清分離血清；以生理鹽水洗滌受血者紅；以生理鹽水洗滌受血者紅細胞細胞3次次，配成，配成3%紅細胞懸液紅細胞懸液2.將獻血者血標本以同樣方法分離血清；以生理鹽水洗滌獻血者紅細將獻血者血標本以同樣方法分離血清；以生理鹽水洗滌獻血者紅細胞胞3次，配成次，配成3%紅細胞懸液紅細胞懸液3.主側管主側管：加受血者血清加受血者血清2滴，獻血者紅細胞懸液滴，獻血者紅細胞懸液1滴；滴； 次側次側管管：加獻血者血清加獻血者血清2滴，受血者紅細胞懸液滴，受血者紅細胞懸液1滴滴4.每管各加每管各加LIM溶液溶液0.6ml，混勻，混勻，室溫孵育室溫孵育1min

13、5.每管各加每管各加2滴聚凝胺溶液滴聚凝胺溶液，混合后，混合后靜置靜置15s6.1300g離心離心15s，棄棄上清上清7.輕輕搖動試管輕輕搖動試管，目測細胞有無凝集，目測細胞有無凝集，如無凝集，必須重做如無凝集，必須重做8.加入加入2滴重懸浮液滴重懸浮液，并，并輕輕混合輕輕混合，肉眼，肉眼(ruyn)觀察結果觀察結果9.取載破片一張，用滴管分別從主側管和次側管內吸取紅細胞懸液各取載破片一張，用滴管分別從主側管和次側管內吸取紅細胞懸液各1滴滴，均勻滴放在載玻片上，用顯微鏡觀察結果并記錄，均勻滴放在載玻片上，用顯微鏡觀察結果并記錄第十三頁，共十八頁。交叉配血-酶法和聚凝胺法實驗實驗(shyn)結果

14、結果1.將如果將如果主側管主側管和和次側管次側管內紅細胞內紅細胞凝集散開凝集散開，則為聚凝胺，則為聚凝胺引起的引起的非特異性凝集非特異性凝集，表示受血者和獻血者兩血聚凝胺介，表示受血者和獻血者兩血聚凝胺介質配血質配血相容相容，獻血者血液，獻血者血液可以輸注可以輸注2.如果主側管或（和）次側管內紅細胞凝集如果主側管或（和）次側管內紅細胞凝集不散開不散開，則表，則表明明抗原抗原(kngyun)抗體結合的特異性反應抗體結合的特異性反應，兩血，兩血不相容不相容，獻血者，獻血者血液血液不可輸注不可輸注（用戶可使用（用戶可使用IgG抗抗D抗體（效價抗體（效價64）與）與RhD陽性紅細胞反應陽性紅細胞反應做

15、陽性對照實驗，測試本試劑的有效性。）做陽性對照實驗，測試本試劑的有效性。）第十四頁，共十八頁。交叉配血-酶法和聚凝胺法注意事項注意事項1.聚凝胺介質交叉配血試驗對聚凝胺介質交叉配血試驗對Kell血型系統的抗體不能有效檢血型系統的抗體不能有效檢出出（陰性結果（陰性結果加做抗球蛋白試驗加做抗球蛋白試驗），但漢族，但漢族kk型幾乎型幾乎100%。2.臨床輸血進行交叉配血試驗時，應當臨床輸血進行交叉配血試驗時，應當首先首先進行進行鹽水介質鹽水介質的的交叉配血試驗，交叉配血試驗，排除完全性（排除完全性（IgM類）紅細胞抗體類）紅細胞抗體的存在后的存在后，再進行聚凝胺介質交叉配血試驗，再進行聚凝胺介質交叉

16、配血試驗3.溶血標本不得用于交叉配血試驗溶血標本不得用于交叉配血試驗4.當重懸浮液加入后，應當重懸浮液加入后，應盡快觀察結果盡快觀察結果（不可超過（不可超過3min），），以免反應減弱或消失以免反應減弱或消失5.聚凝胺溶液聚凝胺溶液(rngy)放置在玻璃瓶中過久可以導致紅細胞凝集過放置在玻璃瓶中過久可以導致紅細胞凝集過弱，因此必須弱，因此必須保存在深色塑料瓶中保存在深色塑料瓶中6.聚凝胺是一種聚凝胺是一種抗肝素試劑抗肝素試劑，所以如果使用含肝素的血標本，所以如果使用含肝素的血標本，要加較多的聚凝胺來中和肝素要加較多的聚凝胺來中和肝素第十五頁，共十八頁。交叉配血-酶法和聚凝胺法方法學評價方法學評價(pngji)優點：優點：安全、敏感、快速安全、敏感、快速、操作簡單操作簡單，結果，結果易判定易判定，能為臨床安全快速的輸血提供有力，能為臨床安全快速的輸血提供有力保證。保證。聚凝胺介質聚凝胺介質(jizh)配血法反應較鹽水法靈敏度配血法反應較鹽水法靈敏度高，能檢出幾乎所有規則抗體及不規則血高，能檢出幾乎所有規則抗體及不規則血型抗體，型抗體，適用于各類輸血患者的配血適用于各類輸血患者的配血缺點：缺點：漏檢漏檢Kell系統系統（見注意事項）（見注意事項）第十六頁，共