1、1實驗一實驗一 糖的呈色反應和定性鑒定糖的呈色反應和定性鑒定 李立家生命科學學院 3102,3139 Tel:68754505Email:2目的要求目的要求 學習鑒定糖類及區分酮糖和醛糖的方法了解鑒定還原糖的方法及其原理 3糖相關知識 單糖中的果糖是酮糖，而葡萄糖是醛糖。 所有的單糖都是還原糖； 還原性的二糖有乳糖和麥芽糖，蔗糖是非還原性二糖。4糖的呈色反應和定性鑒定糖的呈色反應和定性鑒定. Molish反應反應-萘酚反應萘酚反應. 蒽酮反應蒽酮反應 . 酮糖的酮糖的Seliwanoff反應反應. Fehling試驗試驗. Benedict試驗試驗 . Barfoed試驗試驗5I、Molish

2、反應反應-萘酚反應萘酚反應l 實驗原理實驗原理:糖在濃硫酸或濃鹽酸的作用下脫水形成糖在濃硫酸或濃鹽酸的作用下脫水形成糠醛及其衍生物與糠醛及其衍生物與-萘酚作用形成紫紅色復合物，萘酚作用形成紫紅色復合物，在糖液和濃硫酸的液面間形成紫環，因此又稱紫在糖液和濃硫酸的液面間形成紫環，因此又稱紫環反應。環反應。OH2H2SO4濃羥甲基糠醛HOH2COCHOHOH2CCSO3HHO3SOHOOOHH2SO4濃糖糠醛紫紅色復合物6Molish反應反應l- 萘酚也可用麝香草酚或其他的苯酚化合物代替，麝香萘酚也可用麝香草酚或其他的苯酚化合物代替，麝香草酚溶液比較穩定，其靈敏度與草酚溶液比較穩定，其靈敏度與- 萘

3、酚一樣。萘酚一樣。 l單糖、雙糖、多糖一般都發生此反應，但氨基糖不發生單糖、雙糖、多糖一般都發生此反應，但氨基糖不發生此反應。丙酮、甲酸、乳酸、草酸、葡萄糖醛酸、各種醛此反應。丙酮、甲酸、乳酸、草酸、葡萄糖醛酸、各種醛糖衍生物、甘油醛等均產生近似的顏色反應。糖衍生物、甘油醛等均產生近似的顏色反應。因此，陰性因此，陰性反應證明沒有糖類物質的存在；而陽性反應，則說明有糖反應證明沒有糖類物質的存在；而陽性反應，則說明有糖存在的可能性，需要進一步通過其他糖的定性試驗才能確存在的可能性，需要進一步通過其他糖的定性試驗才能確定有糖的存在。定有糖的存在。 lMolish反應非常靈敏，反應非常靈敏，0.001

4、葡萄糖和葡萄糖和0.0001蔗糖蔗糖即能呈現陽性反應。因此，不可在樣品中混入紙屑等雜物。即能呈現陽性反應。因此，不可在樣品中混入紙屑等雜物。當果糖濃度過高時，由于濃硫酸對它的焦化作用，將呈現當果糖濃度過高時，由于濃硫酸對它的焦化作用，將呈現紅色及褐色而不呈紫色，需稀釋后再做。紅色及褐色而不呈紫色，需稀釋后再做。 7Molish反應反應 操作方法操作方法 取試管，編號，分別加入各待測糖溶液1 mL，然后加兩滴Molish試劑，搖勻。傾斜試管，沿管壁小心加入小心加入約1mL濃硫酸，切切勿搖動勿搖動，小心豎直后仔細觀察兩層液面交界處的顏色變化。用水代替糖溶液，重復一遍，觀察結果。8II、蒽、蒽 酮酮

5、 反反 應應 l 實驗原理實驗原理:糖經濃酸作用后生成的糠醛及其衍生物與蒽酮糖經濃酸作用后生成的糠醛及其衍生物與蒽酮（10-酮酮-9，10-二氫蒽）作用生成藍綠色復合物。該復合二氫蒽）作用生成藍綠色復合物。該復合物在物在630nm有最大的吸收峰，并且在一定范圍內，顏色與有最大的吸收峰，并且在一定范圍內，顏色與糖量的多少成正比，該方法可以用于測定幾乎所有碳水化糖量的多少成正比，該方法可以用于測定幾乎所有碳水化合物的含量，包括戊糖、己糖，多糖等。合物的含量，包括戊糖、己糖，多糖等。l 在測定水溶性碳水化合物含量時切勿將未溶解的沉淀部分在測定水溶性碳水化合物含量時切勿將未溶解的沉淀部分混入試劑中，否

6、則會將細胞壁中的纖維和半纖維素混入樣混入試劑中，否則會將細胞壁中的纖維和半纖維素混入樣品，造成所測定值的升高。品，造成所測定值的升高。l 不同的糖類與蒽酮試劑反應后的顏色深度不同，果糖顯色不同的糖類與蒽酮試劑反應后的顏色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖和甘露糖較淺，五碳糖更淺，最深，葡萄糖次之，半乳糖和甘露糖較淺，五碳糖更淺，故在測定混合糖的含量時會應為混合物中不同糖的比例不故在測定混合糖的含量時會應為混合物中不同糖的比例不同造成誤差。在測定單一糖類的時候可避免此類的誤差。同造成誤差。在測定單一糖類的時候可避免此類的誤差。9蒽蒽 酮酮 反反 應應 操作方法操作方法 取試管，編號，均加

7、入1ml蒽酮溶液，再向各管滴加2 3滴待測糖溶液，充分混勻，觀察各管顏色變化并記錄。10III、酮糖的、酮糖的Seliwanoff反應反應（西列瓦諾夫反應）（西列瓦諾夫反應） l 實驗原理實驗原理:酮糖在酸的作用下較醛糖更易生成羥甲酮糖在酸的作用下較醛糖更易生成羥甲基糠醛。后者與間苯二酚作用生成鮮紅色復合物，基糠醛。后者與間苯二酚作用生成鮮紅色復合物，反應僅需反應僅需20-30秒。醛糖在濃度較高時或長時間煮秒。醛糖在濃度較高時或長時間煮沸，才產生微弱的陽性反應。沸，才產生微弱的陽性反應。 l 該反應是鑒定酮糖的特殊反應。該反應是鑒定酮糖的特殊反應。 l 果糖與果糖與Seliwanoff試劑反應

8、非常迅速，呈鮮紅色，試劑反應非常迅速，呈鮮紅色，而葡萄糖所需時間較長，且只能產生黃色至淡黃而葡萄糖所需時間較長，且只能產生黃色至淡黃色。戊糖亦與色。戊糖亦與Seliwanoff試劑反應，戊糖經酸脫試劑反應，戊糖經酸脫水生成糠醛，與間苯二酚縮合，生成綠色至藍色水生成糠醛，與間苯二酚縮合，生成綠色至藍色產物。產物。l 酮基本身沒有還原性，只有在變成烯醇式后，才酮基本身沒有還原性，只有在變成烯醇式后，才顯示還原作用。顯示還原作用。 11酮糖的酮糖的Seliwanoff反應反應 操作方法操作方法 取試管，編號，各加入Sediwanoff試劑1mL，再依次分別加入待測糖溶液各4滴，混勻，同時放入沸水浴中

9、，比較各管顏色的變化過程。12IV、Fehling試驗試驗 l 實驗原理實驗原理:費林試劑是含有硫酸銅和酒石酸鉀鈉的氫氧化鈉溶費林試劑是含有硫酸銅和酒石酸鉀鈉的氫氧化鈉溶液。硫酸銅與堿溶液混合加熱，則生成黑色的氧化銅沉淀。液。硫酸銅與堿溶液混合加熱，則生成黑色的氧化銅沉淀。若同時有還原糖存在，則產生黃色或磚紅色的氧化亞銅沉淀。若同時有還原糖存在，則產生黃色或磚紅色的氧化亞銅沉淀。由于沉淀的速度不同，而形成的顆粒大小也不同，顆粒大的由于沉淀的速度不同，而形成的顆粒大小也不同，顆粒大的為紅色，顆粒小的為黃色。為紅色，顆粒小的為黃色。 l 為防止銅離子和堿反應生成氫氧化銅或堿性碳酸銅沉淀，為防止銅離

10、子和堿反應生成氫氧化銅或堿性碳酸銅沉淀，Fehlin試劑中加入酒石酸鉀鈉，它與試劑中加入酒石酸鉀鈉，它與Cu2形成的酒石酸鉀鈉形成的酒石酸鉀鈉絡合銅離子是可溶性的絡離子，該反應是可逆的。平衡后溶絡合銅離子是可溶性的絡離子，該反應是可逆的。平衡后溶液內保持一定濃度的氫氧化銅。液內保持一定濃度的氫氧化銅。 l 費林試劑是一種弱的氧化劑，它不與酮和芳香醛發生反應。費林試劑是一種弱的氧化劑，它不與酮和芳香醛發生反應。 13將一定量的甲液和乙液等體積混合時，硫酸銅與氫氧化鈉反應，生成氫氧化將一定量的甲液和乙液等體積混合時，硫酸銅與氫氧化鈉反應，生成氫氧化銅沉淀：銅沉淀：2NaOH + CuSO4 = C

11、u(OH)2+ Na2SO4 Fehling試驗反應過程試驗反應過程在堿性溶液中，所生成的氫氧化銅沉淀與酒石酸鈉反應，生成可溶性的絡合在堿性溶液中，所生成的氫氧化銅沉淀與酒石酸鈉反應，生成可溶性的絡合物酒石酸鉀鈉銅：物酒石酸鉀鈉銅：在加熱條件下，用樣液滴定，樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應，酒在加熱條件下，用樣液滴定，樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應，酒石酸鉀鈉銅被還原糖還原，產生紅色氧化亞銅沉淀，其反應如下：石酸鉀鈉銅被還原糖還原，產生紅色氧化亞銅沉淀，其反應如下：糖酸14Fehling試驗試驗 操作方法操作方法 取試管，編號，各加入Fehlin試劑甲和乙1mL。搖勻后，分別加入4滴待測糖溶

12、液，置沸水浴中加熱2 3min，取出冷卻，觀察沉淀和顏色變化。15V、Benedict試驗試驗（本尼迪特試驗）（本尼迪特試驗） 實驗原理：實驗原理：Benedict試劑是試劑是Fehling試劑試劑的改良。的改良。Benedict試劑利用檸檬酸作為試劑利用檸檬酸作為Cu2+的絡合劑，其堿性較的絡合劑，其堿性較Fehling試劑弱，試劑弱，靈敏度高，干擾因素少。靈敏度高，干擾因素少。16Benedict試驗試驗 操作方法操作方法 取試管，編號，分別加入2mL Benedict試劑和4滴待測糖溶液，沸水浴中加熱5分鐘，取出后冷卻，觀察各管中的顏色變化。17VI、Barfoed試驗試驗 （巴弗德氏試

13、劑（巴弗德氏試劑 ）l 實驗原理：在酸性溶液中，單糖和還原二糖的還實驗原理：在酸性溶液中，單糖和還原二糖的還原速度有明顯差異。原速度有明顯差異。Barfoed試劑為弱酸性。單試劑為弱酸性。單糖在糖在Barfoed試劑的作用下能將試劑的作用下能將Cu2+還原成磚紅還原成磚紅色的氧化亞銅，時間約為色的氧化亞銅，時間約為3分鐘，而還原二糖則分鐘，而還原二糖則需需20分鐘左右。所以，該反應可用于區別單糖和分鐘左右。所以，該反應可用于區別單糖和還原二糖。當加熱時間過長，非還原性二糖經水還原二糖。當加熱時間過長，非還原性二糖經水解后也能呈現陽性反應。解后也能呈現陽性反應。l 還原二糖：麥芽糖、乳糖、纖維二糖還原二糖：麥芽糖、乳糖、纖維二糖18Barfoed試驗試驗 操作方法操作方法 取試管，編號，分別加入2mL Barfoed試劑和2 3滴待測糖溶液，煮沸2