1、腫瘤的過繼性細胞免疫治療學習內容與要求掌握腫瘤的過繼性細胞免疫治療的定義及原理。熟悉LAK、TIL、CD3AK、CIK、CTL細胞的制備方法及研究進展C概述腫瘤的過繼性細胞免疫治療(Adoptivecellularimmunotherapy,ACI或AIT)是指向腫瘤患者轉輸具有抗腫瘤活性的免疫細胞(特異性的和相對特異性的)直接殺傷腫瘤或激發機體免疫反應殺傷腫瘤細胞，達到治療腫瘤的目的。簡要歷史回顧 20世紀60年代：發現細胞免疫引起組織器官移植排斥啟發人們應用過繼性細胞免疫治療腫瘤。 20世紀80年代：85年，Rosenberg報道LAK/IL-2治療晚期惡性腫瘤具有療效。86年，報道TIL

2、。 1991年，斯坦福大學的SchmidtWolf道了CIK細胞-)淋巴因子激活的殺傷細胞(Lymphokineactivatedkillercells,LAK)DL-2回輸病人外周淋巴細型激活病人（體外）LAK治療方法優點 只對腫瘤細胞產生細胞毒性; 基本無毒副作用； 不依賴荷瘤者免疫功能； 可與其他療法聯合使用； 無免疫抑制作用。LAK細胞殺傷腫瘤細胞的作用機制 LAK細胞的異質性 LAK細胞表面存在多種與腫瘤識別相關的特異性分子。 LAK殺傷腫瘤細胞不受MHC限制LAK細胞殺傷腫瘤細胞的作用機制 效靶細胞結合后，通過分泌細胞毒顆粒，在Ca2+存在時，釋放其中的穿孔素、絲氨酸酯酶、TNF樣

3、分子等殺傷介質，直接殺傷靶細胞。 通過LAK細胞表面的殺傷分子（如m-LT）直接殺傷靶細胞。 通過分泌其他細胞因子間接殺傷靶細胞。同種異體LAK細胞(A11o-LAK) Allo-LAK細胞的有效性 Allo-LAK細胞的安全性LAK細胞體內回輸后組織器官分布LAK細胞分布特點和臨床療效一致，即對肺、肝、腎等器官腫瘤療效較好，而對其他器官的腫瘤療效不明顯。LAK細胞的制備LAK細胞的來源：患者自體外周血、67個月齡的胎兒胸腺和脾臟細胞、同種異體外周血、臍帶血。細胞因子對LAK的誘導IL-2/IL-15/IL-7（-）腫瘤浸潤性淋巴細胞（tumorinfiltratinglymphocyte,T

4、IL）1）腫瘤浸潤淋巴細胞（TIL）分離淋巴W2回輸TtimorTIL細胞的特征 TIL細胞的異質性CD3、CD4、CD8T細胞 TIL的作用機理誘導腫瘤細胞凋亡機制：TIL分泌細胞因子誘導調亡；釋放穿孔素引起凋亡。缺乏HLA-1抗原的腫瘤細胞 細胞因子低濃度IL-2(10-20 U/ml)IL-2+IL-4GM-CSF+IL-2IL-6IL-7GM-CSF+IL-2抑制因子IL-10+TGF-p前列腺素誘導TIL中CD4+細胞產生誘導對自身腫摘細胞的特異性殺傷 促進TIL細胞的增殖促進CTL細胞的增殖促進腎癌來源的TIL增殖和特異性與非 特異性的CTL的產生 促進TIL的增殖擴增TIL和提高

5、TIL的聚傷活性抑制TIL生長和殺傷活性抑制TIL的轉化影響因素作用抗原福射滅活的自身腫瘤抗原刺激TIL生長高水平表達HLA1抗原的腫瘤細胞誘導TIL中CD4+CTL細胞產生細胞毒藥物對TIL的影響化療藥物對TIL毒性大于對腫瘤細胞的殺傷性，因而在應用TIL過繼免疫治療時不宜同時使用化療藥物.TIL細胞的制備方法 TIL來源：手術切除或活檢的瘤體組織；癌性胸水、腹水中淋巴細胞；轉移淋巴結。 TIL體外激活：（1）白介素系統；（2）TNF-oc與IL-2的協同作用；（3）TIL與自身瘤細胞、自身淋巴細胞共同培養；（4）淋巴因子基因轉導TIL;（5）雙功能抗體導向TIL。TIL的臨床應用及展望 T

6、IL細胞的臨床應用受到許多因素制約發展方向：增強TIL細胞增殖力以及特異性殺傷腫瘤細胞活性；與其它細胞因子聯合治療，提高療效；改變TIL細胞的輸注途徑，縮短距離，使TIL細胞能更有效地達到并聚集瘤體處；提高T細胞分泌Thl型細胞因子的能力，抑制分泌Th2型細胞因子。抗CD3McAb激活的殺傷細胞(CD3AK) CD3AK細胞是指用特定的抗CD3McAb激發免疫活性細胞的增殖并誘導相關細胞因子的表達和分泌，從而產生的可有效攻擊腫瘤的殺傷細胞,故稱之為抗CD3MeAb激活的殺傷細胞(anti-CD3McAbactivatedkillercells,CD3AK)oCD3AK細胞的免疫學特征 CD3A

7、K細胞中含有高比例的CD3+細胞和CD56+或CD57+細胞。 通過自體輔佐細胞（單核或巨噬細胞）提呈處理過的抗原作用于TCR可激活T細胞。作用于TCR-CD3復合物的抗CD3McAb可模擬這種效應。CD3AK細胞制備 人外周血單個核細胞（淋巴細胞）加入CD3 McAb再加入低劑量的IL-2CD3AK細胞治療腫瘤的優點 CD3AK細胞選擇性地殺傷腫瘤細胞 CD3AK細胞具有更為廣譜的殺傷腫瘤作用 CD3AK細胞增殖能力大大優于LAK細胞 CD3AK細胞的增殖和維持可以不依賴或少依賴外源的IL-2多種細胞因子誘導的殺傷細胞(cytokinesinducedkillers,CIK)將人外周血或骨髓

8、單個核細胞在體外用多種細胞因子與CD3McAb共同培養一段時間后獲得的殺傷細胞，即細胞因子誘導的殺傷名田月包(cytokines-inducedkillercells,CIK細胞)高效擴增(IL-2, Anti-CD3McAb, IFN-y,PHA) 收集CIK/TIL,全身/局部回輸CIK細胞的制備外周血分離獲取外周血單個核細胞誘導活化(IL2,Anti-CD3McAbJFN-y,PHA)，細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxicTlymphocyteCTL)T淋巴細胞通過TCR-CD3復合物、MHC分子、抗原肽及協同刺激分子共同刺激，增強丁淋巴細胞增殖及效應。CTL細胞的制備分離腫瘤細胞；調

9、變腫瘤細胞：用直接導入方法或逆轉錄病毒介導的轉移方法向腫瘤細胞導入B7基因，并檢測腫瘤細胞表達B7分子的情況；誘導CTL：用調變修飾后的腫瘤細胞與效應細胞共同培養，誘導高活性的CTL;分離CTL用于臨床治療。過繼性免疫療法存在的問題 由于腫瘤細胞的不均一性及效應細胞的異質性造成療效的不確定性； 體外大量擴增過繼免疫細胞技術有待開發； 輸注的細胞向腫瘤組織的聚集性弱； 體內過繼免疫機制的進一步明確； 與其它腫瘤治療方法的有機整合需要進一步完善； 缺乏統一的能指示臨床轉歸的的免疫檢測指標；單克隆抗體與腫瘤分子靶向治療 腫瘤分子靶向治療：利用腫瘤組織或細胞所具有的特異性（或相對特異的）結構分子作為靶

10、點，使用某些能與這些靶分子特異結合的抗體、配體等達到直接治療或導向治療目的的一大類治療方法。分子靶向治療的靶點細胞受體信號轉導細胞周期血管生成Biologic targets for NSCLC therapy1. Growth factors and growth-factor receptore 的UMl VEGFR CdhSCFRTumor cell5. Cell-eunrival pathways Oyctn-dipendect mTDR.6. Extracellular matrix/ angiogenic pathways3 TumoxgMEed artlgenc/marker5

11、cangnoyoes. cat WG 020,00222 Signal lran$duction pathways RM.raf,MAPK.MD(,E9X, peace X3R C, PMC4 Proteascme單克隆抗體在腫瘤分子靶向治療中的地位 腫瘤抗體靶向治療的發展歷史 腫瘤單克隆抗體靶向治療的作用機制腫瘤抗體靶向治療的發展歷史 鼠源性多克隆抗血清是最早被用于治療腫瘤的抗體分子 1975年利用雜交瘤技術成功地制備McAb,大大推動了腫瘤生物靶向治療的進展近十年來已研究制備出人鼠嵌合抗體、人源化抗體和完全人源抗體抗體的結構和功能免疫球蛋白的功能區抗體作為腫瘤的靶向治療得益于抗體兩個關鍵性

12、技術的突破：人鼠嵌合抗體、人源化抗體和完全人源抗體技術及制備技術的成熟，基本上可以克服鼠源性抗體用于人體產生抗抗體的問題抗體庫的建立和篩選以及多價重組抗體制備技術的發展，使人們能夠直接獲得特異性強和親和力高的單克隆抗體。人一鼠嵌合抗體(ChimericAntibodies)人一鼠嵌合抗體是將鼠源單抗的可變區與人抗體的恒定區融合而得到的抗體Q構建嵌合抗體的大致過程是，將鼠源單抗的可變區基因克隆出來，連到包含有人抗體恒定區基因及表達所需的其它元件（如啟動子、增強子、選擇標記等）的表達載體上，在哺乳動物細胞（如骨髓瘤細胞、CHO細胞）中表達。盡管嵌合抗體的免疫原性已降低很多，但有時它仍可能引發較強的

13、免疫反應。為了進一步降低抗體的鼠源成分，發展出CDR移植技術。CDR移植即把鼠抗體的CDR序列移植到人抗體的可變區內，所得到的抗體稱CDR移植抗體或改型抗體，也就是人源化抗體。完全人源化抗體單克隆抗體靶向治療由于抗體技術的發展，至今全球已報道的抗體有10多萬種，其中基因工程抗體有1000多種，人源化抗體200多種。目前國際上已有500多種抗體用于診斷和治療，FDA至今已批準18種抗體上市，其中8種是用于治療腫瘤的靶向抗體。年份V鐘醫皿、署asA至2000年底，在美國藥品市場上生物技術藥物有76種,其中抗體藥物有15種 2003年治療用單抗的銷售總額已超過52億美元； 2006年預計5060個治療性單抗上市； 2010年預計單抗銷售額200億美元； 美國已占全球單抗市場90%支獨秀； 完全人源化單抗現有多個處于臨床前階段。腫瘤單克隆抗體靶向治療的作用機制直接作用 ADCC作用