1、SOD,CAT 及 POD 活性的測定分別取 0.4g 材料于預冷的研缽中，加入 8ml 預冷的 50mmol-1磷酸緩沖液（pH7.8）（先加 2ml,在冰浴下研磨成勻漿后，將勻漿轉入 10ml 離心管，再用 6ml 沖洗），10000rpm 離心 15min,取上清液定容至 10ml 后于 4c 保存。上清液用于可溶性蛋白質含量、SOD 活性及 POD 活性的測定。SO砒性測定1 .顯色反應取 5mL 指形管（要求透明度好）4 支，2 支為測定管，另 2 支為對照管，按表 47-1加入各溶液。 混勻后， 給 1 支對照管照上比試管稍長的雙層黑色硬紙套遮光， 與其他各管同時置于 4000lx

2、日光燈下反應 20-30min（要求各管照光情況一致，反應溫度控制在 2535c 之間，使酶活性高低適當調整反應時間）。當樣品數量較大時，可在臨用前根據用量將表 47-1 中各試劑（酶液和核黃素除外）按比例混合后一次加入 2.65mL,然后依次加入核黃素和酶液，使終濃度不變。表 47-1 各溶液顯色反應用量試劑酶）用量（mL）終濃度（比色時）0.05mol/L 磷酸緩沖液1.5130mmol/LMet 溶液P0.313mmol/L750 仙 mol/LNBT 溶液0.375amol/L100mol/LEDTA-N 注液0.310mol/L20（imol/L 核黃素0.32.0mmol/L酶液0

3、.12 支對照管以緩沖液代替酶液蒸儲水0.5總體積3.33.SOD 活性測定至反應結束后，用黑布罩蓋上試管，終止反應。以遮光的對照管作為空白，分別在 560nm 下測定各管的OD值，tf算SO陰性。3.結果計算已知 SODM 生單位以抑制 NBT 光化還原的 50W 一個酶活性單位表示，按下式計算測定方法SOD活性。SO曲活性u/g（FW）二式中：SOD 總活性以酶單位每克鮮重表示。比活力單位以酶單位每毫克蛋白表示。ACK照光對照管的吸光度。AE樣品管的吸光度。VT樣品液總體積，mLV1測定時樣品用量，mLW樣品鮮重，g蛋白質含量單位為 mg/g。愈創木酚法測定過氧化物酶（POD）活性i.取兩

4、支試管，洗滌后甩干水分試劑 J管號（對照）測定管0.05mol/LPH5.5 的磷酸緩沖液2.9ml2.9ml2%雙氧水溶液0ml1.0ml0.05mol/L 愈創木酚溶液1.0ml1.0ml蒸儲水3.0ml2.0ml總體積7.0ml7.0ml將上述各管立即放入預先調好 37c 的水浴鍋中保溫 5min 以上(酶促反應)，向對照管中加入 0.1ml 酶液，混勻，在入 470nm 處調零，再向測定管中加入 0.1ml 酶液，并且立即計時，混勻后進行比色測定，3 分鐘時立即讀取吸光度。(也可以每分鐘讀取一次，3 分鐘內吸光度變化值 4A)2.結果計算以每分鐘吸光度變化值表示酶活性大小，即以AA47

5、0/min-g(鮮重)表示之。也可以用每min內A470變化0.01為1個過氧化物酶活性單位(u)表示。按下式計算酶的相對活性AX酶提取液總量(ml)酶活性(A470-gtwmin1)=樣品鮮重(g)x 測定時酶液用量(ml)過氧化氫酶的活性測定紫外吸收法【原理】H2O2在 240nm 波長下有強烈吸收，過氧化氫酶能分解過氧化氫，使反應溶液吸光度(A240)隨反應時間而降低。根據測量吸光率的變化速度即可測出過氧化氫酶的活性。【儀器與用具】紫外分光光度計；離心機；研缽；250ml 容量瓶 1 個；0.5ml 刻度吸管 2 支，2ml 刻度吸管 1 支；10ml 試管 3 支；恒溫水浴；【試劑】0

6、.2mol/LpH7.8 磷酸緩沖液(內含 1%聚乙烯口比咯烷酮)；0.1mol/LH2O2(用 0.1mol/L 高鎰酸鉀標定)。【方法】【方法】1 .酶液提取：稱取新鮮小麥葉片或其它植物組織 0.5g 置研缽中，加入 23m14c 下預冷的 pH7.0 磷酸緩沖液和少量石英砂研磨成勻漿后，轉入 25ml 容量瓶中，并用緩沖液沖洗研缽數次，合并沖洗液，并定容到刻度。混合均勻將量瓶置 5c 冰箱中靜置 10min,取上部澄清液在 4000rpm 下離心 15min,上清液即為過氧化氫酶粗提液。5c 下保存備用。2 .測定：取 10ml 試管 3 支，其中 2 支為樣品測定管，1 支為空白管，按

7、表 40-2 順序加入試劑。表 40-2 紫外吸收法測定 H2O2樣品液配置表管號S1S2S3粗酶液(ml)0.20.20.2pH7.8 磷酸(ml)1.51.51.5蒸儲水(ml)1.01.01.025c 預熱后逐管加入 0.3ml0.1mol/L 的 H2O2,每加完一管立即記時，并迅速倒入石英比色杯中，240nm 下測定吸光度，每隔 1min 讀數 1 次，共測 4min,待 3 支管全部測定完后,按下式計算酶活性。3 .結果計算：以 1min 內 A240減少 0.1 的酶量為 1 個酶活單位（u）。A240VT過氧化氫酶活性（u/gFW/min）=0.1VitFW（AS1AS2）式中 A240=AS02AS。一加入煮死酶液的對照管吸光值；ASI,AS2一樣品管吸光值；Vt 一粗酶提取液總體積