1、【精品文檔】如有侵權，請聯系網站刪除，僅供學習與交流微生物化驗員應知應會學習資料.精品文檔.2012年應知應會學習資料微生物化驗員二一二年十月目 錄一、檢測控制2二、食品安全風險監測3三、精密儀器管理3四、在線實驗室管理5五、實驗室安全及防護知識5六、微生物基本知識6七、微生物檢驗基本手段和準備工作6八、微生物檢樣的采集7九、食品微生物學常規檢驗技術8十、無菌間、實驗室生物安全防護規則12一、 檢測控制1、 原輔物料和產品需按照國家相關標準和研究院下發的企業標準實施檢驗，分公司因儀器配置不足原因不具備檢測能力的項目需委托片區或質監部檢測；2、 原料包材進貨驗收應錄入原輔包材進廠驗收自動化信息系

2、統（IQC系統）；成品報告單應及時錄入成品報告單系統3、 不符合質量要求的原料，指不在標準明確的合格或受限使用范圍、在標準中未規定可以調整等級的不合格原料，一律按不合格判定，不符質量要求的原輔材料倉庫不入庫、車間不領用；不合格產品不得發貨。二、 食品安全風險監測宗總提出“構建企業自主食品安全風險監測和預警體系”1、 意義：保障食品安全是國際社會面臨的共同挑戰和責任。構建企業自主食品安全風險監測和預警體系，有利于早發現、早報告、早處置食品安全風險，積累食品安全管理經驗，為食品安全風險評估和預警提供科學數據和實踐經驗，確保食品安全。 2、 目前的工作方向：每季制定各類產品和原料的食品安全風險監測計

3、劃，通過市場抽樣、分公司抽樣、產品和原料留樣檢測，組織集團、片區、分公司檢測人員實施三聚氰胺、黃曲霉毒素、鉻等三十多項指標的風險檢測，發現問題，及時預警。 3、 國內發生的食品安全事件1) 三聚氰胺事件：目前液態奶及奶粉的三聚氰胺限量值是（2.5mg/kg）2) 皮革奶事件：目前主要通過檢測L-羥脯氨酸來判定。3) 黃曲霉毒素事件：乳及乳制品、嬰幼兒配方食品的黃曲霉毒素M1的限量均為0.5g/kg.4) 毒膠囊事件：毒膠囊事件是制造過程中加入了（工業明膠）使得重金屬（鉻）超標。5) 伊利“汞”超標事件 三、 精密儀器管理宗總指出：“化驗室管理需要加強，特別需做好高價值檢驗儀器的使用管理，提高操

4、作保養規范性，有效地提高公司質量監控水平。”(一) 儀器設備的使用維護1) 實驗室指定專人為儀器設備管理員，統一負責實驗室儀器的維護和管理，每臺儀器設備應有具體保管人。2) 主要儀器設備應制定操作作業指導書，內容應包括：正確的操作順序和方法，安全注意事項，維護保養方法。主要儀器包括乳成分分析儀、凱氏定氮儀、液相色譜儀、原子吸收光譜儀、原子熒光光度計、分光光度計、糖度儀、旋光儀、Hach濁度儀、旋轉蒸發儀、實驗室均質機、高速離心機等。）3) 儀器作業指導書和使用記錄本應放在指定位置，便于使用和檢查。4) 儀器設備使用者必須熟悉儀器設備的性能、操作規程以及維護保養辦法。未獲得上崗操作資格的人員不得

5、擅自使用。5) 儀器設備使用者應自覺愛護儀器設備，經常保持其整齊清潔。嚴格按作業指導書使用及維護儀器設備，填寫儀器使用記錄。6) 儀器使用前或使用過程中出現故障或顯示結果可疑或檢定證明其有缺陷時，應立即停止使用，加貼停用標識，故障儀器不得在實驗中使用。7) 儀器設備需備有3個月耗材，以確保檢測工作正常開展。(二) 精密儀器的使用維護需重點關注的精密儀器主要包括：1、 大型精密儀器，包括凱氏定氮儀、乳成分分析儀、液相色譜儀、原子吸收光譜儀、原子熒光光度計、氣相色譜等；2、 實驗室常用精密儀器，包括糖度計、分光光度計、pH計、旋光儀、Hach濁度儀、旋轉蒸發儀、實驗室均質機、高速離心機、耐破儀、邊

6、壓儀、涂膜厚度測定儀等。1.凱氏定氮儀：1）儀器（含消化爐）整體清潔，儀器外部及內腔無堿液殘留；試劑桶清潔；2）消化管無缺口或裂縫；3）消化管橫梁無破損或缺口，密封圈未老化；4）堿桶內無沉淀和絮狀物；5）消化系統必須接尾氣排放水抽泵；6）每周做一次蒸餾系統驗證，每兩周做一次全系統驗證，回收率在99.0%-101.0%。2.乳成分分析儀：1）儀器整體清潔，儀器外部、內部腔體、管路無殘留奶垢，均質器不漏液；2）每周對乳成分分析儀進行浸泡流管及硬件強力清洗，并在使用記錄中記錄強力清洗信息；3）每周三次對含乳產品進行蛋白含量單項比對校準并做好記錄；4）產品模塊定標樣品數量應大于8個，且定標濃度范圍需覆

7、蓋可能涉及到的樣品含量。3.液相色譜儀：1）儀器整體清潔，儀器外部、內部無積灰；2）標準品、備件、耗材需配備齊全，至少需備有三聚氰胺標準品，備有1根全新C18 長度150mm 色譜柱、1盒全新C18保護柱，安捷倫液相需備有色譜純（HPLC級）異丙醇試劑；3）水相排氣，安捷倫液相過濾白頭壓力不超過10bar，Waters液相在線濾芯壓力不超過300psi。4.原子吸收光譜儀：1）儀器整體清潔，無積灰；2）實驗用硝酸和高氯酸必須為優級純，且有驗收記錄，驗收標準為鉻試劑空白2g/L，鉛試劑空白3g/L；3）氬氣純度至少為99.99%；4）至少備有鉛、鉻標準品并有標準品證書；5）儀器至少每半月開機一次

8、。5.原子熒光光度計：1）儀器整體清潔，無積灰；2）氬氣純度至少為99.99%；3）至少備有砷、汞標準品并有標準品證書；4）儀器至少每半月開機一次。6.糖度計：1）要求防潮防塵，RFM340糖度計的吸水硅膠應保持蘭色；2）ATAGO糖度計后部的過濾網應定期清潔；3）棱鏡金屬面應無劃痕。7.分光光度計：1）樣品室內應無積存的溢出溶液；2）光路及元件無明顯腐蝕；3）不使用時樣品室內應無樣品；4）無樣品時樣品室蓋應保持關閉；8.pH計：1）pH計顯示數值應穩定，不能有大幅跳動情況；2）按鍵和旋鈕使用正常；3）電極保持潔凈，復合電極的外參比液為3mol/L氯化鉀溶液，應保持有2/3以上；9.耐破儀（包

9、材檢測）：1）硅油裝量應在1/2以上；2）膠膜必須凸起成球面狀，并略低于下夾盤表面；3）打開氣源，氣壓應控制在0.3-0.4兆帕之間10.邊壓儀（包材檢測）：1）應及時更換刀片（可觀察所取待測試樣是否有毛邊）；2）配備專用導塊11.涂膜厚度測定儀：1）開機后Error指示燈應在熄滅狀態；2）儀器校準后，測樣顯示數值應穩定，不能有大幅跳動情況；3）檢測夾具導電膠粒應無破損、無明顯劃痕；4）應備有校準板四、 在線實驗室管理1、 各檢測儀器和試劑瓶等要求分類擺放整齊；各儀器外表干凈整潔、玻璃器皿干凈、無破損；檢測室臺面、地面干凈，無明顯結垢情況。2、 在線使用的糖度計、分光光度計、pH計、離心機等使

10、用和維護正常，具體要求同實驗室。五、 實驗室安全及防護知識1、 實驗室危險性種類1) 易燃、易爆危險2) 有毒氣體危險3) 機械傷害危險4) 觸電危險5) 放射性、微波輻射、電磁、電場等其他危險2、 實驗室通用安全守則1) 實驗室人員必須熟悉儀器、設備的性能和使用方法，按規定要求進行操作。2) 凡進行有危險性實驗，實驗人員應先檢查防護措施，確證防護妥當后，才可進行操作。實驗過程中操作人員不得擅自離開，實驗完成后立即做好善后清理工作，并作出記錄。3) 凡有毒或有刺激性氣體發生的實驗、應在通風柜內進行，做好個人防護、不得把頭部伸進通風柜內。4) 凡接觸或使用腐蝕和刺激性藥品，如強酸、強堿、氨水、過

11、氧化氫、冰醋酸等，取用時盡可能佩帶橡皮手套和防護眼鏡，瓶口不要直接對著人，禁用裸手直接拿取上述物品。開啟有毒氣體容器時應帶防毒面具。5) 不使用無標簽（或標志）容器盛放的試劑、試樣。6) 實驗中產生的有毒、有害廢液、廢物應集中處理，不得任意排放或流入下水道。酸、堿或有毒物品濺落時，應及時清理及除毒。7) 嚴格遵守安全用電規程。不使用絕緣不良或接地不良的電氣設備，不準擅自拆修電器。8) 安裝能發生破裂的玻璃儀器時，要用布巾包裹。往玻璃管上套橡皮管時，管口應燒圓滑，并用水或甘油潤滑，防止玻璃管破裂割傷手。9) 實驗完畢，實驗人員應養成洗手離開的習慣。實驗室內禁止吸煙和存放食物、食具（食品感官鑒評實

12、驗室例外）。10) 實驗室應配備消防器材。實驗人員要熟悉其使用方法并掌握有關的滅火知識。11) 實驗結束，人員離室前要檢查水、電、燃起和門窗，確保安全，并作好登記。3、 常見的實驗室事故急救和處理1) 實驗室滅火實驗室滅火的原則是：移去或隔絕燃料的來源，隔絕空氣（氧氣）、降低溫度。2) 化學物質中毒及灼傷的急救i. 有毒氣體的中毒:常見有毒氣體有氯氣、硫化氫、氮氧化物、一氧化碳等。如果一旦發生中毒，要立即離開現場，將中毒者抬到空氣新鮮處，報警或送醫院急救。ii. 強酸、強堿灼傷：受到硫酸、鹽酸、硝酸傷害時，立即用大量水沖洗，然后用2的小蘇打水沖洗患部；受到NaOH、KOH 溶液傷害時，迅速用大

13、量水沖洗，再用2稀醋酸或2硼酸充分洗滌傷處。遇有衣服粘連在皮膚上，切忌撕開或揭開，以防破壞皮膚組織，大量沖水后再送醫院由醫生處理。3) 觸電的急救遇到人身觸電事故時，必須保持冷靜，立即拉下電閘斷電，或用木棍將電源線撥離觸電者。千萬不要徒手和腳底無絕緣體情況下去拉觸電者。如人在高處，要防止切斷電源后把人摔傷。脫離電源后，檢查傷員呼吸和心跳情況。若呼吸停止，立即進行人工呼吸，并報警呼救。六、 微生物基本知識微生物（microorganism, microbe）是一些肉眼看不見的微小生物的總稱。l 微生物種類繁多，至少有十萬種以上。按其結構、化學組成及生活習性等差異可分成三大類。 l 真核細胞型微生

14、物：真菌屬于此類型微生物。霉菌的繁殖方式為分生孢子；酵母為出芽繁殖。l 原核細胞型微生物：這類微生物種類眾多，有細菌、螺旋體、支原體、立克次體、衣原體和放線菌。細菌的繁殖方式為二分裂繁殖。l 非細胞型微生物：病毒屬于此類型微生物。 l 微生物的特點：l 分布廣，種類多（10萬多種）l 生長旺，繁殖快l 適應性強，易變異l 代謝強，轉化快七、 微生物檢驗基本手段和準備工作l 顯微技術l 普通光學顯微鏡的結構和基本原理：ú 結構：光學顯微鏡是由光學放大系統和機械裝置兩部分組成。l 普通顯微鏡的使用方法ú 低倍鏡觀察：先將低倍物鏡的位置固定好，然后放置標本片，轉動反光鏡，調好光線

15、，將物鏡提高，向下調至看到標本，再用細調對準焦距進行觀察。ú 高倍鏡觀察：低倍鏡對準焦點后，轉換到高倍鏡基本上也對準焦點，只要稍微轉動微調即可。ú 油浸鏡觀察：油浸鏡的工作距離很小，所以要防止載皮片和物鏡上的透鏡損壞。使用時，一般是經低倍、高倍到油浸鏡。當高倍物鏡對準標本后，再加油浸鏡觀察。載玻片上加油以后，將油浸鏡下移到油滴中，到停止下降為止，然后用微調向上調準焦點。l 普通顯微鏡的保養觀察完后，移去觀察的載玻片標本。用過油浸鏡的，應先用擦鏡紙將鏡頭上的油擦去，再用擦鏡紙蘸著二甲苯擦拭23次，最后再用擦鏡紙將二甲苯擦去。轉動物鏡轉換器，放在低倍鏡的位置。將鏡身向下降到最低

16、位置，調節好鏡臺上標本移動器的位置，罩上防塵套。l 染色技術除了觀察活體微生物細胞的運動性和直接計算菌數外，絕大多數情況下都必須經過染色后，才能在顯微鏡下進行觀察。ú 革蘭氏染色法： ú 細菌先經堿性染料結晶紫染色，而經碘液媒染后，用酒精脫色，在一定條件下有的細菌紫色不被脫去，有的可被脫去，因此可把細菌分為兩大類，前者叫做革蘭氏陽性菌（G+），后者為革蘭氏陰性菌（G）。為觀察方便，脫色后再用一種紅色染料如堿性番紅或石炭酸復紅等進行復染。陽性菌仍帶藍紫色，陰性菌則被染上紅色。ú 革蘭氏染色法一般包括初染、媒染、脫色、復染等四個步驟l 滅菌和消毒 消毒和滅菌兩個詞在實

17、際使用中常被混用，其實它們的含義是有所不同的。消毒是指應用消毒劑等方法殺滅物體表面和內部的病原菌營養體的方法；滅菌是指用物理和化學方法殺死物體表面和內部的所有微生物，使之呈無菌狀態。l 物理方法ú 干熱滅菌法：包括灼燒滅菌法和干熱空氣滅菌法,干熱空氣滅菌法是實驗室中常用的一種方法，即把待滅菌的物品均勻地放入烘箱中，升溫至160，恒溫2小時即可。此法適用于玻璃器皿、金屬用具等的滅菌。ú 濕熱滅菌法: 在同樣的溫度下，濕熱滅菌的效果比干熱滅菌好，這是因為高溫水蒸汽對蛋白質有高度的穿透力，從而加速蛋白質變性而迅速死亡。ú 加壓蒸汽滅菌法：這是發酵工業、醫療保健、食品檢測

18、和微生物學實驗室中最常用的一種滅菌方法。它適用于各種耐熱、體積大的培養基的滅菌，也適用于玻璃器皿、工作服等物品的滅菌。在加壓蒸汽滅菌中，要引起注意的一個問題是，在恒壓之前，一定要排盡滅菌鍋中的冷空氣，否則表上的蒸汽壓與蒸汽溫度之間不具對應關系，這樣會大大降低滅菌效果。l 化學方法一般化學藥劑無法殺死所有的微生物，而只能殺死其中的病原微生物培養基制備在實驗室中配制的適合微生物生長繁殖或累積代謝產物的任何營養基質，都叫做培養基(Media)。根據某種標準，將種類繁多的培養基劃分為若干類型。根據培養基的物理狀態來區分，可以分為固體培養基、液體培養基和半固體培養基。八、 微生物檢樣的采集1樣品原則根據

19、檢驗目的、食品特點、批量、檢驗方法、微生物的危害程度等確定采樣方案。應采用隨機原則進行采樣，確保所采集的樣品具有代表性。采樣過程遵循無菌操作程序，防止一切可能的外來污染。樣品在保存和運輸的過程中，應該采取必要的措施防止樣品中原有微生物的數量變化，保持樣品的原有狀態。2采樣方案分為二級和三級采樣方案。二級采樣方案設有、和值，三級采樣方案設有、和值。：同一批次產品應采集的樣品件數；：最大可允許超出值的樣品數；：微生物指標可接受水平的限量值；：微生物指標的最高安全限量值。注：按照二級采樣方案設定的指標，在個樣品中，允許有個樣品其相應微生物指標檢驗值大于m。注2：按照三級采樣方案設定的指標，在n個樣品

20、中，允許全部樣品中相應微生物指標檢驗值小于或等于m值；允許有c個樣品其相應微生物指標檢驗值在m值和M值之間；不允許有樣品相應微生物指標檢驗值大于M值。九、 食品微生物學常規檢驗技術關于GB 4789.1-2010食品微生物學檢驗 總則的新增的描述:與GB/T4789.1-2003相比新國標GB4789.1-2010總則增加了微生物實驗室的基本要求，包括環境、人員、設備要求：病源菌應在二級安全實驗室內進行；檢驗人員應具有相應的教育、微生物專業培訓經歷，具備相應的資質；實驗設備應有日常性監控記錄和使用記錄；實驗室應定期對實驗人員進行技術考核和人員比對。菌落總數測定檢驗方法參見GB4789.2-20

21、10食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定菌落總數的概念是什么？ 菌落總數就是指在一定條件下（如需氧情況、營養條件、pH、培養溫度和時間等）每克（每毫升）檢樣所生長出來的細菌菌落總數。按國家標準方法規定，即在需氧情況下，36培養48h，能在PCA瓊脂平板上生長的細菌菌落總數。菌落總數能不能代表所有細菌總數？ 由于菌落總數培養的條件（如需氧情況、營養條件、pH、培養溫度和時間等）決定，厭氧或微需氧菌、有特殊營養要求的以及非嗜中溫的細菌，難以繁殖生長。因此菌落總數并不表示實際中的所有細菌總數。為什么檢測微生物要注意無菌操作？它包括哪些方面？ 操作中必須有“無菌操作”的概念，所用玻璃器皿必

22、須是完全滅菌的，不得殘留有細菌或抑菌物質。所用剪刀、鑷子等器具也必須進行消毒處理。樣品如果有包裝，應用75%乙醇在包裝開口處擦拭后取樣。操作應當在超凈工作臺或經過消毒處理的無菌室進行。超凈工作臺的空氣潔凈度標準要求達到百級標準，即瓊脂平板在工作臺暴露30分鐘，每個平板不得超過1個菌落。檢測固體樣品時，為什么取樣時不應集中一點，宜多采幾個部位？ 固體樣品必須經過多點取樣，才能使取樣有代表性，使實驗結果更接近真實值。為什么傾注培養基不宜過多或過少？ 傾注培養基的量規定不一，一般以15mL較為適宜，平板過厚可影響觀察，太薄又易于干裂。針對不同的稀釋度，怎樣計算菌落總數？ 計數時應選取菌落數在3030

23、0之間的平板。若只有一個稀釋度平板上的菌落數在適宜計數范圍內，計算兩個平板菌落數的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數，作為每克（毫升）中菌落總數結果。若有兩個連續稀釋度在適宜計數范圍內時，只計數在30300個菌落數的平板，按如下公式計算：N=C/（n1+0.1 n2）dN 樣品中菌落數C 平板（含適宜范圍菌落數的平板）菌落數之和n1  適宜范圍菌落數的第一稀釋度（低）平板個數n2  適宜范圍菌落數的第二稀釋度（高）平板個數d  稀釋因子（第一稀釋度）若所有稀釋度的平板上菌落數均大于300，則對稀釋度最高的平板進行計數，其他平板可記錄為多不可計，結果按平均菌落數乘以

24、最高稀釋倍數計算。若所有稀釋度的平板菌落數均小于30，則應按稀釋度最低的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。若所有稀釋度（包括液體樣品原液）平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數計算。若所有稀釋度的平板菌落數均不在30300之間，其中一部分大于300或小于30時，則以最接近30或300的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。傾注用培養基為什么溫度不能太高？ 傾注用培養基應在46水浴內保溫，溫度太高的培養基會導致微生物死亡，影響實驗結果。當平板上有鏈狀菌落或片狀菌落生長時，應怎樣計數？ 當平板上有鏈狀菌落生長時，如呈鏈狀生長的菌落之間無任何明顯界限，則應作為一個菌落計，如存在有幾條不同來源的鏈，則每條鏈均應

25、按一個菌落計算，不要把鏈上生長的每一個菌落分開計數。如有片狀菌落生長，該平板一般不宜采用，如片狀菌落不到平板一半，而另一半又分布均勻，則可以半個平板的菌落數乘2代表全平板的菌落數。菌落數應怎樣報告？ 菌落數在100以內時，按“四舍五入”方式修約，采用兩位有效數字報告。大于或等于100時，前第3位數字采用“四舍五入”方式修約后，取前2位數字，后面用0代替位數來表示結果；也可用10的指數形式來表示，此時也按“四舍五入”方式修約，采用兩位有效數字。若所有平板上為蔓延菌落而無法計數，則報告菌落蔓延。若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結果無效。l 大腸菌群測定檢測標準參見：GB 4789.3-2010

26、食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 大腸菌群計數第一法 大腸菌群MPN計數1.樣品的稀釋固體和半固體樣品：稱取25g樣品，放入盛有225 ml磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質杯內，8000r/min10000 r/min均質1min2 min，或放入盛有225 ml磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌均質袋中，用拍擊式均質器拍打1min2 min，制成1：10的樣品勻液。液體樣品：以無菌吸管吸取25ml樣品，置盛有225 ml磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌錐形瓶（瓶內預置適當數量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1：10的樣品勻液。樣品勻液的pH值應在6.57.5之間，必要時分別用1mol/L氫氧化鈉或1

27、mol/L鹽酸調節。用1ml無菌吸管或微量移液器吸取1：10樣品勻液1ml，沿管壁緩緩注入9 ml磷酸鹽緩沖液或生理鹽水的無菌試管中（注意吸管或吸頭尖端不要觸及稀釋液面），振搖試管或換用1支1ml無菌吸管反復吹打，使其混合均勻，制成1：100的樣品勻液。根據對樣品污染狀況的估計，按上述操作，依次制成10倍遞增系列稀釋樣品勻液，每遞增稀釋一次，換用一支1ml無菌吸管或吸頭，從制備樣品勻液至樣品接種完畢，全過程不得超過15 min。2.初發酵試驗每個樣品，選擇3個適宜的連續稀釋度的樣品勻液（液體樣品可以選擇原液），每個稀釋度接種3管月桂基硫酸鹽胰蛋白胨肉湯，每管接種1ml（如接種量超過1ml，則用

28、雙料LST肉湯），36±1培養24h±2h，觀察倒管內是否有氣泡產生，如未產氣則繼續培養至48h±2h。記錄在24h和48h內產氣的LST肉湯管數。未產氣者為大腸菌群陰性，產氣者則進行復發酵試驗。3.復發酵試驗用接種環從所有48h±2h內發酵產氣的LST肉湯管中分別取培養物一環，移種于煌綠乳糖膽鹽肉湯管中，36±1培養48h±2h，觀察產氣情況。產氣者，計為大腸菌群陽性管。4.大腸菌群最可能數的報告根據大腸菌群陽性管數，檢索MPN表，報告每克（或毫升）樣品中大腸菌群的MPN值。第二法 大腸菌群平板計數1.樣品的稀釋2 平板計數選取2個

29、3個適宜的連續稀釋度，每個稀釋度接種兩個無菌平皿，每皿1ml，同時分別取1ml生理鹽水加入兩個無菌平皿做空白對照。及時將15ml20ml冷至46的結晶紫中性紅膽鹽瓊脂約傾注于每個平皿中，小心旋轉平皿，將培養基與樣液充分混勻，待瓊脂凝固后，再加3ml4mlVRBA覆蓋平板表層，翻轉平板，置于36±1培養18h24h。3平板菌落數的選擇選取菌落數在15150之間的平板，分別計數平板上出現的典型和可疑大腸菌群菌落。典型菌落為紫紅色，菌落周圍有紅色的膽鹽沉淀環，菌落直徑為0.5mm或更大。4 證實試驗從VRBA平板上挑取10個不同類型的典型和可疑菌落，分別移種于BGLB肉湯管內，36

30、7;1培養24h48h，觀察產氣情況。凡BGLB肉湯管產氣，即可報告為大腸菌群陽性。5 大腸菌群平板計數的報告經最后證實為大腸菌群陽性的試管比例乘以8.3中計數的平板菌落數，再乘以稀釋倍數，即為每克（或毫升）樣品中大腸菌群。例：10-4樣品稀釋液1ml，在VRBA平板上有100個典型和可疑菌落，挑取其中10個接種BGLB肉湯管，證實6個陽性管，則該樣品的大腸菌群數為：100×610×104g（ml）=6.0×105CFUg（ml）。l 霉菌和酵母菌及其檢驗l 檢測標準參見：GB4789.15-2010，食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 霉菌和酵母計數l 霉菌和酵

31、母菌落的形態區別？ú 酵母菌是真菌中的一大類，通常是單細胞，呈圓形,卵圓形、臘腸形或桿狀。ú 霉菌也是真菌，能夠形成疏松的絨毛狀的菌絲體的真菌稱為霉菌。l 在霉菌和酵母計數中，主要使用哪些培養基？ú 可以使用馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養基（PDA）、孟加拉紅（虎紅）培養基l 霉菌及酵母菌落計數及報告應注意哪幾點？選取菌落數10-150之間的平板進行計數。一個稀釋度使用兩個平板，取兩個平板菌落數的平均值，乘以稀釋倍數報告。l 為什么霉菌及酵母的培養溫度和檢測菌落總數的培養溫度不同？大多數霉菌和酵母在2530的情況下生長良好，因此培養溫度28，而大多數細菌在36的情況下生

32、長良好，因此培養溫度3537。l 耐熱芽孢菌的檢驗l 樣品準備ú 在無菌操作條件下，將10mL室溫狀態下的待檢樣品加入一個滅菌試管中，蓋好棉塞。ú 在同直徑的試管中加入10mL同樣室溫狀態下的水，并插入溫度計。ú 將兩試管同時放入100水浴中保溫。當水中的溫度達到100時開始計時。ú 計時達10分鐘后，迅速將樣品管取出，置于常溫水中迅速降溫至室溫。l 培養基準備ú 檢查預先經過滅菌處理的錳鹽營養瓊脂培養基是否處于正常。（每1000mL營養瓊脂加入無菌硫酸錳水溶液1mL。100mL蒸鎦水溶解3.08g硫酸錳。）ú 將滅菌培養基加熱融化后

33、，在46水浴中保溫用。l 接種培養ú 在無菌操作條件下，在一個滅菌平皿內傾入15mL錳鹽營養瓊脂培養基，并暴露至接種過程結束，標記后以作為環境對照樣品。ú 在無菌操作條件下，用1mL的滅菌吸管移取1mL選定的樣品稀釋液或樣品原樣至滅菌平皿內。ú 同上對同一樣品重復操作。即每個選定的樣品稀釋度做兩個平皿。ú 按以上步驟，以1mL毫升無菌生理鹽水作為空白操作對照。ú 在無菌操作條件下，將約15mL錳鹽營養瓊脂培養基傾入樣品平皿中，將平皿置于操作臺面上輕輕轉動，使樣品和培養基混勻。ú 待瓊脂凝固后，將平皿翻轉，即保持有標記和培養基的一面向上

34、。將所有平皿（包括空白和環境對照）置于55±1的恒溫培養箱內，保溫48小時。l 計數及報告ú 關于稀釋倍數的選擇可參考細菌菌落總數測定。l 芽孢總數測定的檢驗l 樣品準備ú 在無菌操作條件下，將10mL室溫狀態下的待檢樣品加入一個滅菌試管中，蓋好棉塞。ú 在同直徑的試管中加入10mL同樣室溫狀態下的水，并插入溫度計。ú 將兩支試管同時放入80水浴中保溫，當水中的溫度達到80時開始計時。 ú 計時10分鐘后，迅速將樣品管取出，置于常溫水中迅速降溫至室溫。l 培養基準備ú 檢查預先經過滅菌處理的錳鹽營養瓊脂（每1000mL營養瓊脂加入無菌硫酸錳水溶液1mL。100mL蒸鎦水溶解3.08g硫酸錳。）是否處于正常。l 接種培養ú 在無菌操作條件下，在一個滅菌平皿內傾入15mL錳鹽營養瓊脂培養基，并暴露至接種過程結束，標記后以作為環境對照