1、氯霉素眼藥水的高效液相色譜分析氯霉素眼藥水的高效液相色譜分析藥物分析實驗十藥物分析實驗十眼藥水中的氯霉素的測定眼藥水中的氯霉素的測定 氯霉素滴眼液其主要成份氯霉素滴眼液其主要成份氯霉素氯霉素，輔料為硼酸、硼砂、氯化鈉、防腐劑輔料為硼酸、硼砂、氯化鈉、防腐劑等，為無色或幾乎無色的澄明液體。等，為無色或幾乎無色的澄明液體。 測定氯霉素滴眼液中氯霉素的含測定氯霉素滴眼液中氯霉素的含量，由于滴眼液中存在的輔料的干擾，量，由于滴眼液中存在的輔料的干擾，首先要分離得到氯霉素的純樣品。因首先要分離得到氯霉素的純樣品。因此，采用此，采用高效液相色譜法高效液相色譜法來進行測試，來進行測試，用用外標標準曲線法外標

2、標準曲線法定量。定量。氯霉素氯霉素成份成份 A成份成份 A峰面積峰面積A樣品樣品峰面積峰面積A對照對照外標標準曲線法外標標準曲線法色譜定量：色譜定量：峰面積與樣品濃度峰面積與樣品濃度成正比。成正比。一系列已一系列已知濃度的知濃度的氯霉素溶氯霉素溶液液眼藥水稀眼藥水稀釋液釋液CAi濃度：濃度： C1，C2，C3，C4，C5峰面積：峰面積：A1，A2，A3，A4，A5液相液相色譜的基本流程圖色譜的基本流程圖流動相流動相 高壓高壓泵泵色譜柱色譜柱檢測器檢測器 泵泵輸輸液液分離分離 檢測檢測 計算機計算機AEGBCDF進樣閥進樣閥進樣進樣預備柱預備柱氯霉素含量的測定氯霉素含量的測定 精密吸取眼藥水精密

3、吸取眼藥水0.5mL于于50mL容量瓶中，用甲醇稀釋至容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度。刻度。1、對照品溶液配制、對照品溶液配制2、眼藥水樣品配制、眼藥水樣品配制 精密稱取精密稱取5.0mg氯霉素樣品于氯霉素樣品于10mL容量瓶中，用甲醇溶容量瓶中，用甲醇溶解定容，配成解定容，配成0.1mg/mL母液。分別移取母液。分別移取1mL，2mL，3mL，4mL，5mL母液于母液于10mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，配成容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，配成0.01，0.02，0.03，0.04，0.05mg/mL的標準溶液。的標準溶液。色譜操作步驟：色譜操作步驟：1、依次打開檢測器、泵的開關、依次打開檢測器、泵

4、的開關2、打開電腦主機，打開操作界面、打開電腦主機，打開操作界面3、排氣泡、排氣泡4、設置色譜條件，打開泵開關、設置色譜條件，打開泵開關5、讓流動相沖洗色譜系統，至色譜基線水平，約半小時、讓流動相沖洗色譜系統，至色譜基線水平，約半小時6、基線調零，填寫數據文件名及信息、基線調零，填寫數據文件名及信息7、進樣并記錄數據、進樣并記錄數據8、數據處理及打印報告、數據處理及打印報告9、沖洗色譜系統約半小時，關機。、沖洗色譜系統約半小時，關機。色譜條件：色譜條件：色譜儀色譜儀 島津島津LC-15C高效液相色譜高效液相色譜色譜柱色譜柱 C18柱（柱（5m，1504.6mm或或2504.6mm）柱溫柱溫 室

5、溫室溫流動相流動相 甲醇甲醇 水（水（60 40）（）（150短柱）短柱） 甲醇甲醇 水（水（80 20）（）（250長柱）長柱）流速流速 1.000ml/min波長波長 272nm泵泵柱柱進樣進樣排放排放泵泵排放排放柱柱進樣進樣定量環定量環六通閥六通閥Inject：插入針頭：插入針頭Load：打入樣品：打入樣品Inject：樣品進入色譜：樣品進入色譜3、色譜測試、色譜測試 用清洗溶劑清洗用清洗溶劑清洗微量進樣針三次，用微量進樣針三次，用待測溶液潤洗三次，待測溶液潤洗三次，吸取待測溶液吸取待測溶液25L，進樣，得色譜圖。進樣，得色譜圖。數據記錄數據記錄標準曲線標準曲線：隔兩分鐘進樣一：隔兩分鐘進樣一次，濃度從低到高，記錄在次，濃度從低到高，記