1、長春新堿對可移植性小鼠淋巴細胞白血病的療效及其機制研究         09-09-11 11:57:00     編輯：studa20                 作者：朱大誠，尹小明，陳秀珍，羅小泉，閔建新【摘要】  目的探討長春新堿（Vincristine，VCR）對L615白血病的療效及其可能機制

2、。方法L615白血病造模成功后，分為對照組和VCR組，進行腹腔注射給藥（對照組給生理鹽水），隔日一次，連續6次。觀測小鼠生存時間，體重變化，外周血白細胞計數，肝脾指數，肝脾骨髓涂片及骨髓白細胞分類，流式細胞術測定凋亡率。結果對照組體重明顯減輕，VCR組體重無明顯改變；VCR組小鼠生存時間是對照組的229%；外周血象，同組小鼠隨病程的延長，白細胞逐漸上升，至瀕死期則顯著上升，與實驗前比較有顯著差異，且對照組更為顯著，而血小板是先升后降，至瀕死期，末梢血對照組出現大量L615白血病細胞，占白細胞總數的52.9%，VCR組L615白血病細胞占17.25%，兩者具有顯著差異（P<0.01）；白血

3、病死亡小鼠脾臟指數有差異(P<0.05)，且VCR組脾指數大于對照組；流式細胞術證實，VCR能誘導L615白血病體內細胞凋亡，凋亡率達43.81%。結論VCR對L615白血病具有較好的療效，其機制主要是誘導白血病細胞凋亡；VCR在抗腫瘤的同時，可能對正常組織尤其是免疫系統具有一定的損害作用。 【關鍵詞】  長春新堿 L615白血病 生命延長率 細胞凋亡 流式細胞術Abstract:ObjectiveTo discuss the curative effects and the potential mechanisms to the L615 leukemia of VCR. M

4、ethodsAfter making the model successfully, put the mice into 2 groups, antitheses one and VCR group. Then carry on the celiac injection (the antitheses one with NS), once every other day, and totally 6 times. Observe the survival time, weight changes, peripheral blood leukocyte count, hepatosplenic

5、index, hepatic, splenic and marrow swears and marrow leukocyte classification and apoptosis rate determined by FCM.ResultsThe antitheses group's weight declined significantly; but no obvious changes in VCR group were observed. The survival time of VCR group was 229% of the antitheses one. For th

6、e peripheral blood, with the course of diseases extending, the leukocytes increased and notably in the dying period (notably differences compared with the situation before the experiment, especially in antitheses group); the platelets first increased and then decreased and till the dying period. The

7、re were large amount of L615 cells in the peripheral blood of antitheses group (52.9% of the leucocyte number); 17.25% in VCR group was L615 cells, but there were still great differences between the two groups(P<0.01). The splenic indexes of the dead mice were different (P<0.05), and that of V

8、CR group was greater. FCM proved that VCR induced the apoptosis of L615 cells in vivo, and the rate reached to 43.81%. ConclusionVCR has good curative effects on L615 leukemia. To induce the apoptosis of leukemia cells is its main mechanism. It may damage the normal tissues, especially the immune sy

9、stem when it is repelling the tumor.Key words:VCR;   L615 leukemia;   Life extension rate;   Apoptosis;   FCM長春新堿（VCR)作為抗腫瘤化療藥早已應用于臨床。有實驗證明VCR能誘導髓系白血病HL-60，U937，K562等細胞凋亡13，。這次我們利用VCR作用于可移植性小鼠淋巴細胞白血病L615白血病，觀察其療效，并探討其可能機制。1  材料與方法1.1  藥品及試劑VCR為上海華聯制藥

10、有限公司產品（批號：050602A），用生理鹽水配成濃度為25 g/ml的VCR溶液備用。細胞凋亡檢測試劑盒為南京凱基生物科技發展有限公司產品。1.2  細胞培養L615白血病細胞株購于中國醫學科學院血液研究所（天津）。培養基為含體積分數10%的小牛血清（杭州四季青）的RPMI-1640（Gibco公司產品），并加入雙抗（青霉素100 /ml和鏈霉素100 g/ml）, 在37，5%CO2飽和濕度的培養箱（Therno Forma公司產品）中培養，取對數生長期細胞進行造模。1.3  模型建立 取對數生長期L615白血病細胞（L615細胞），離心1 500 r/min,8 m

11、in,去上清液，用生理鹽水洗滌2次，調整細胞終濃度為1.4×106/ml。取615近交系小鼠（購自中國醫學科學院血液研究所）8只，鼠齡10周，體重2427 g，雌雄各半。無菌操作，每只小鼠腹腔接種L615細胞7×105個，造成L615白血病模型（全身白血病）4。小鼠在層流架內飼養，一切與鼠接觸的物品均按無菌要求處理。1.4   分組及給藥方法將L615白血病模型小鼠隨機分為2組。每組雌雄各半，即對照組（L615模型組）(每次每只鼠給生理鹽水0.4 ml) ；VCR組（每次每只鼠給VCR 0.3 mg/kg）。模型建立后，第2天開始按以上方案腹腔注射給藥，

12、隔日1次，共給藥6次。1.5   觀測指標 體重變化；生存時間，用公式（T-C）/C×100%計數其生命延長率（T、C分別為VCR組，對照組平均生存天數）；外周血白細胞（WBC）計數及分類，血小板（PLT）計數；肝脾指數；肝、脾、骨髓涂片及骨髓白細胞分類。1.6   流式細胞術（FCM）分析 取瀕死期兩組小鼠外周血，每個樣本0.5ml入已加淋巴細胞分離液的試管內，離心1500r/min，20min，然后小心吸出位于中間的白色層（白細胞），進行細胞計數（每個樣本細胞數應大于1×106），用PBS洗滌，然后按凱基Annexin V-FITC細胞凋亡檢測試劑盒要求進行操作。上機檢測（流式儀為BECTON DICKNSON,B、D公司產品），采用CenQuest軟件獲取10 000個細胞，ModFitlt軟件分析并獲得結果。1.7  統計學處理 采用雙側t檢驗，P<0.05認為差異有顯著性。2  結果2.1   體重變化V