1、Vol.38No.1March2021安徽工業大學學報(自然科學版)J.ofAnhuiUniversityofTechnology(NaturalScience)文章編號：1671-7872(2021)010049-11醒腦靜注射液對抗新冠病毒肺炎的調控機制張妍七王齊氣李奧強李龍杰七魏林2,嚴菊芬*(1.安徽工業大學a.冶金工程學院，b.化學與化工學院，安徽馬鞍山243032；2.華中師范大學化學學院，湖北武漢430079)摘要：采用網絡藥理學方法，構建醒腦靜有效成分與新冠病毒肺炎(COVID-19)潛在相關靶點相互作用的藥理學網絡。采用分子對接的方法，評價醒腦靜有效成分與網絡藥理學預測潛在靶

2、標MAPK3以及新冠病毒3CLpro的結合能力，探索醒腦靜對抗COVID-19的核心有效成分及其調控機制。結果表明：醒腦靜對抗COVID-19存在整體調控和多成分作用多靶點的特點；醒腦靜有效成分中與COVID-19相關靶點結合最多的前5個化合物是麝香酮、懈皮素、山奈酚、柚皮素、阡谷爸醇：醒腦靜通過與MAPK3,CSF2,IL4,IL13,IL17A,TNF等核心靶點相互作用，參與抗炎、抗毒、調節免疫功能等整14綜合調節過程：以MAPK3為例,分子對接的核心有效成分預測與網絡藥理學預測結果基本一致.關鍵詞：新冠I肉毒肺炎：醒腦靜注射液：網絡藥理學：分子對接；謝制制中圖分類號:R932文獻標志碼:

3、Adoi：10.3969/j.issn.1671-7872.2021.01.008RegulationMechanismofXingnaojingInjectionAgainstCOVID-19ZHANGYanla,WANGQi",LIAoqiang,b,LILongjie,b,WEILin2,YANJufen,b(1.a.SchoolofMetallurgicalEngineering,b.SchoolofChemistryandChemicalEngineering,AnhuiUniversityofTechnology,Maanshan243032,China;2.Colleg

4、eofChemistry,CentralChinaNormalUniversity,Wuhan430079,China)Abstract：ThenetworkpharmacologyoftheactivecomponentsofXingnaojingandCOVID-19wasestablishedbyusingthencthodofnetworkpharmacology.InordertofurtherexplorethecoreactivecomponentsandregulatorymechanismofXingnaojingagainstCOVID-19,themethodofmole

5、culardockingwasusedtoevaluatethebindingabilityoftheactivecomponentsinXingnaojingwithMAPK3obtainedbynetworkpharmacologyand3CLprothatwasthemainproteinofnovelcoronavirus.TheresultsshowthatXingnaojinghasthecharacteristicsofglobalregulationandmulti-componentactionagainstCOVID-19.IntheactivecomponentsofXi

6、ngnaojing,muskketone,quercetin,kaempferol,naringeninandp-spisterolarethetop5compoundsthathavethemostbindingtopotentialtargetsassociatedwithCOVID-19.TheactivecomponentsofXingnaojingmaybindtocoretargetssuchasMAPK3,CSF2,IL4,IL13,IL17AandTNFintheoverallcomprehensiveregulatoryprocessofanti-inflammatory,a

7、nti-viralandimmuneregulation.TakingMAPK3asanexample,thepredictionresultsofthecoreactivecomponentsofmoleculardockingisbasicallyconsistentwiththoseofnetworkpharmacology.Keywords：COVID-19;Xingnaojinginjection;networkpharmacology;moleculardocking;regulationmechanism新冠病毒導致的新冠病毒肺炎(COVID-19)截至2020年3月17日先后在

8、全球150多個國家和地區流行，收稿日期：2020-11-16基金項目：國家重點研發計劃項日(2017YFE0118200)；安徽省重點研究與開發計劃項目(201904b11020025)作者簡介：張妍(1986)，山東成武人，實習研究員，主要研究方向為有機合成與網絡藥理學。通信作者：嚴菊芬(1986),女，江蘇南通人，博士，訓師，主要研究方向為微生物代謝與天然產物。引文格式：張妍，王齊，李奧強，等.醒腦靜注射液對抗新型冠狀病毒肺炎的調控機制J.安徽工業大學學報(自然科學版),2021,38(1):49-59.(c)naringinandMAPK3(d)naringinand3CLpro(f)k

9、aempferoland3CLpro(c)kaempferolandMAPK3圖6阡谷維醇、棚皮素、山奈酚與MAPK3、3CLpro可能的結合方式Fig.6Possiblecombinationofpsitosterol,naringinandkaempferolwithMAPK3and3CLpro3結論采用網絡藥理學和分子對接的方法對醒腦靜注射液對抗COVID-19的調控機制進行研究，所得主要結論如下：1）醒腦靜對抗COVID-19存在整體調控和多成分作用多靶點的特點。從化合物角度看，醒腦靜有效成分中與COVID19相關靶點有潛在作用最多的前5個化合物分別是麝香酮、懈皮素、山奈酚、柚皮素、。

10、-谷笛醇。分子對接的醒腦靜核心有效化學成分與網絡藥理學預測結果基本一致。2）醒腦靜潛在靶點中相互作用最強的前20個蛋白包括與細胞因子風暴關系密切的MAPK3,CSF2,IL4,IL13JL17A,與細胞凋亡有關的CASP3,BCL2LI,TNFRSFIA,FASLG,CASP8,CTLA4。醒腦靜可作用包括InfluenzaA,TNFsignalingpathway等在內的多個病毒感染、肺炎和肺部損傷通路。醒腦靜通過與MAPK3,CSF2,IL4,IL13,IL17A,TNF等核心靶點相互作用，參與抗炎、抗病毒、調節免疫功能等整體綜合調節過程，具有干預細胞因子風暴的重要作用o3）分子對接結果顯

11、示，醒腦靜有效成分與COVID-19復制中重要蛋白3CLpro也有一定的結合能力，進一步說明醒腦靜作用方式的多樣性。本研究只是通過挖掘數據預測醒腦靜有效成分及其治療COVID-19的藥理作用機制，沒有通過具體實驗和臨床驗證，詳細結果有待進一步通過相關實驗證實。參考文獻：1許海玉，張彥瓊，秦月雯，等基于TCMIPV2.0探析新型冠狀病毒肺炎全病程中醫證候和推薦方劑的科學內涵J.中國中藥雜志，2020,4（7）:1488-1498.國家衛生健康委員會.新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案（試行第七版）EB/OL.2020-03-04（202011-10）.3 何黎黎，龔普陽，封陰，等中藥在抗新型冠狀病毒

12、肺炎(COVID-19)引起的細胞因子風暴中的應用分析J.中草藥，2020,51(6):13751385.4 熊微，冉京燕，謝雪佳，等治療新型冠狀病毒肺炎中成約的藥理作用與臨床應用J.醫藥導報，2020,39(4):465-476.15張舸，陳周聞，張烽斐，等醒腦靜治療肺性腦病的臨床研究J.實用藥物與臨床，2001,4:57-58.6謝景峰，蔡定芳，趙劍華，等醒腦靜注射液治療病毒性發熱的實驗研究J.中國中醫急癥，2000,9:78-79.71KIMJ.HYUNSY.CHAEJB,etal.Valsalvaretinopathyandbranchretinalarteryocclusionaft

13、ercardiopulmonarycerebralresuscitationJ.TheAmericanJournalofEmergencyMedicine,2014,32(12):1558.8 胡丹丹，陳偉，孫鑫.醒腦靜注射液調控NF-kB信號通路對膿毒癥心肌損傷的影響J.中國中醫急癥，2012,8(21):1260-1262.9 HOPJINS,ANDREWL.Networkpharmacology:thenextparadigmindrugdiscoveryJ.NatureChemicalBiology,2008,4(11):682-690.10 SHAOL,ZHANGB.Traditio

14、nalChinesemedicinenetworkpharmacology:(hcorjsmethodologyandapplication|J.ChineseJournalofNaturalMedicines,2013,11(2):110-120.11 吳昊，王佳琪，楊雨薇，等.基于網絡藥理學和分子對接技術初步探索“清肺排毒湯”抗新型冠狀病毒肺炎作用機制|J.藥學學報,2020,55(3):374-383.12 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部M.北京：中國醫藥科技出版社，2015:384-385.13 ROLFA,AMOSB,WUCH.etal.UniProt:theunivers

15、alproteinknowledgebaseJJ.NucleicAcidsResearch,2017.45(D1):158-169.14 REBHANM,CHALIFA-CASPIV,PRILUSKYJ,etal.GeneCards:integratinginformationaboutgenes,proteinsanddiseasesJ.TrendsinGenetics,1997,13(4):163.15 WANGLEJ.ZHAOS,LIUM.ctal.ACE2expressionbycolonicepithelialcellsisassociatedwithviralinfection,i

16、mmunityandenergymetabolismJ/OL,MedRxiv,2020(5):20020545./l0.1101/2020.02.05.20020545.16 SHANNONP.MARKIELA,OZIERO.ctal.Cytoscapc:asoftwareenvironmentforintegratedmodelsofbiomolccularinteractionnetworksJ.GenomeResearch,2003,13(11):2498-2504.17 SZKLARCZYKD,GABLEAL,LYOND,etal.STRINGvl1:pro

17、tein-proteinassociationnetworkswithincreasedcoverage,supportingfunctionaldiscoveryingenome-wideexperimentaldatasetsJ|.NucleicAcidsResearch,2019,47(Dl):607_613.18 STELZLU,WORMU,LALOWSKIM.elal.Ahumanprotein-proteininteractionnetwork:aresourceforannotatingtheproteomelJJ.Cell,2005,122(6):957-968.19 SHER

18、MANBT.LEMPICKIRA.SystematicandintegrativeanalysisoflargegenelistsusingDAVIDbioinformaticsresourcesJ.NatureProtocols,2009,4(1):44-57.20 JAINAN.Surflex-Dock2.1:robustperformancefromligandenergeticmodeling,ringflexibility,andknowledge-basedsearch|J|.JournalofComputer-aidedMolecularDesign,2007,21(5):281

19、-306.21 WANGR,LAIL.WANGS.Furtherdevelopmentandvalidationofempiricalscoringfunctionsforstructure-basedbindingaffinityprediclionJ.JournalofComputer-aidedMolecularDesign,2002,16(1):11_26.22 李紅艷，趙江盛張金華，等.一種醒腦靜注射液及其制備方法：201410464441P.2017-04-05.23 ZHOUP,YANGXL,WANGXG,etal.Apneumoniaoutbreakassociatedwith

20、anewcoronavirusofprobablebatoriginJJ.Nature,2020,579:270-273.24 馬納，李亞靜，范吉平.搠皮素藥理作用研究進展J.遼寧中醫藥大學學報，2018,20(8):221-224.25 張雅雯，邵東燕，師俊玲，等山奈酚生物功能研究進展J.生命科學，2017,29(4):400-405.26 曾文峰，張發云，杜剛等.柚皮素：新一代免疫調節劑|J.生物化學與生物物理進展，2018,45(9):915-925.27 馮巧巧，劉軍田.麝香酮藥理作用研究進展J.食品與藥品,2015,17(3):212-214.28 肖志彬，賈韓學，劉小雷谷番醇藥理活

21、性的研究現狀J.世界最新醫學信息文摘，2015,15(8):66-68.29 CHENY.LIUQ.GUOD.Emergingcoronaviruses:genomestructure,replication,andpathogenesis!JJ.JournalofMedicalVirology,2020,92(10):2249-2256.世界衛生組織將其危害程度定義為全球大流行。中醫藥在改善發熱、咳嗽、乏力等對癥治療方面具明顯優勢，我國在COVID-19治療過程中醫藥參與度極高，湖北地區達75%以上，其他地區超過90%，針對中醫分期分型診治推薦不同的中藥湯劑和中成藥。醒腦靜注射液(簡稱醒腦靜

22、)是被推薦用于治療重型、危重型COVID-19的中藥注射液之一氣中藥的早期介入有利于控制疾病向“細胞因子風暴”發展叫醒腦靜山冰片、郁金、板子和鹿香4味中藥提取物組成，是由中藥傳統名方“安宮牛黃丸”經科學提取精制而成的新型中藥制劑，具醒腦開竅、清熱解毒和涼血活血等功效氣在肺性腦病方面有良好的治療效果。家兔病毒性高熱模型研充表明，醒腦靜可減少內源性熱源及腦內前列腺素E2、環磷酸腺昔的合成與釋放，進而降低發熱指數及持續高熱時間全身炎癥反應綜合癥大鼠研究模型表明，醒腦靜可降低血清中的NF-KB,TNF-a及IL-6水平，并對TNF-a,IL-6,IL-8等炎癥因子具有抑制作用“氣然而現階段醒腦靜對抗C

23、OVID-19的有效活性成分及調控作用機制尚不明確。網絡藥理學是系統生物學、計算生物學、多向藥理學等多學科交叉融合學科，與中藥從整體水平調控機體并發揮藥效理念一致陽。七該學科的出現為從整體角度系統尋找中藥復方活性成分與潛在作用靶點提供了新策略，有利于發現中藥多成分-多靶點之間的關系，幫助從整體角度探索中藥與治療疾病間的關聯性叫。分子對接是研究受體與配體間相互作用，預測兩者親和力和結合模式的分子模擬方法。文中采用網絡藥理學和分子對接技術，通過構建醒腦靜、有效成分、COVID-19相關靶點相互作用網絡及蛋白質相互作用網絡，分析醒腦靜有效成分潛在靶點信號通路，計算醒腦靜有效成分與MAPK3,3CLp

24、ro的結合親和能，探索醒腦靜對抗COVID19的有效成分及其潛在調控機制。1材料與方法1.1醒腦靜主要化學成分的篩選利用中藥系統藥理學(traditionalChinesemedicinesystemspharmacology,TCMSP)數據庫與分析平臺(從TCMSP數據庫下載冰片、郁金、棚子主要化合物靶點基因，借助UniProt數據庫心統一靶點基因名稱，利用GeneCards數據庫|l4|(/),以'rnuskketonev為關鍵詞檢索麝香酮可作用靶點基因,綜合以上信息得到醒腦靜可作用靶點基因，利用GcncCards®娜摩，

25、以“pneumonia”為關鍵詞，檢索肺炎相關靶點基因，綜合ACE2共表達基因回，取兩者交集，得到與COVID19相關的靶點基I大I。取醒腦靜可作用靶點基因COVID-19相關靶點基因交集，得到醒腦靜可作用的C0VID-19潛在相關靶點基因。在此基礎上對步驟1.1醒腦靜主要化學成分進行逆向精篩，得到與C0VID-19相關靶點基因有關的醒腦靜有效成分。利用Cystoscape3.7.2軟件""(http:/)構建醒腦靜有效成分與C0VID-19相關靶點相互作用網絡。1.3醒腦靜潛在靶點PPI網絡的構建將上述與醒腦靜相互作用的COVID-19相

26、關靶點基因錄入STRING網站"(/),酣多種蛋白質，限定物種為人，選擇高置信度(0.700),隱藏網絡中斷開節點，得到COVID19相關靶蛋白質相互作用(protein-proteininteraction,PPI)網絡(提取PPI網絡文件，得到所有節點和連線數據，使用R語言得到核心基因，繪制PPI網結中與其他蛋白相互作用最強的前20蛋白圖表。1.4醒腦靜潛在靶點基因GO富集與KEGG通路分析為進一步了解醒腦靜潛在COVID-19相關靶點功能及其在信號通路中的作用，將醒腦靜作用的COVID-19相關潛在靶點基因導入DAVID數據庫,9,(ht

27、tps://home.jsp),輸入靶基因名稱，限定物種為人并校正名稱為officegenesymbol,對其進行生物學過程基因本體(geneontology,GO)富集分析，將所得結果導入Excel繪制成條形圖進行可視化。以通路中差異表達的基因數目為標準，判斷京都基因與基因組百科全書(kyotoencyclopediaofgenesandgenomes,KEGG)通路富集程度，以顯著性參數P值為限定條件，使用R語言將其繪制成氣泡圖進行可視化處理，同時作出部分相應KEGG通路圖用于分析。1.5醒腦靜有效成分與MAPK3,3CLpro分子的對接使用ChemOff

28、ice軟件構建醒腦靜有效成分3D結構，采用MMFF94力場對其進行能量最小化，保存為mol2格式文件。在PDB數據庫(/)K載MAPK3晶體結構(PDB：2Z0Q)和3CLpro晶體結構(PDB：6LU7)。使用Sybyl分子對接軟件中的Surflex-Dock模塊叫將醒腦靜有效成分分別對接到MAPK3和3CLpro的活性空腔。對于分子對接所得構象，使用X-Score程序刖計算醒腦靜有效成分與靶點蛋白的結合親和能。2結果與分析2.1醒腦靜主要化學成分通過TCMSP檢索到冰片、郁金、柜子化學成分共351個，其中31個來自冰片，222個來自郁金，98個來自梃子

29、。郁金、相子以OB230%且DL20.18進一步篩選，分別得到主要化學成分15個。按照TCMSP數據庫檢索規則冰片所含化學成分類藥性DL值較小，綜合考慮醒腦靜制作時取冰片全部藥材為原料的生產工藝回，將TCMSP數據庫檢索得到的31種化合物全部作為冰片主要化學成分。麝香為野生動物制品，其信息未被TCMSP數據庫收錄，查閱藥典將麝香酮(muskketone)作為麝香主要化學成分。2.2COVID19相關靶點基因及醒腦靜有效成分通過TCMSP數據平臺篩選出冰片、郁金和申卮子上述61個化學成分可能作用的相關靶點基因，分別得到冰片可作用靶點基因49個，郁金可作用靶點基因54個，椀子可作用靶點基因167個

30、。利用GeneCards®通過關鍵詞“muskketone”檢索到麝香主要有效成分麝香酮可作用靶點基因663個。綜合冰片、郁金、棚子、麝香主要化學成分可作用靶點基因，去除重復部分得到醒腦靜主要化學成分可作用靶點基因761個。利用GeneCards奶，通過關鍵詞“pneumonia”檢索得到肺炎相關靶點基因4562個。相關研究表明：ACE2是新冠病毒感染人體細胞的重要受體，是病毒感染細胞必不可少的蛋白牌，與ACE2共表達的基因中存在與C0VID-19相關的重要靶點基因綜合ACE2共表達基因(5556個)與肺炎相關靶點基因(4562個)，取兩者交集得到與COVID-19相關的靶點基因99

31、5個。取醒腦靜主要化學成分可作用靶點基因與C0VID-19相關靶點基因的交集，得到醒腦靜町作用于C0VID-19的潛在相關靶點基因，172個。由醒腦靜潛在作用的C0VID19相關靶點基因對上述醒腦靜62個主要化學成分逆向分析，得到醒腦靜與C0VID-19相關的有效化學成分22種，結果如表1。表1醒腦靜與COVID-I9相關的有效成分Tab.1ActivecomponentsinXingnaojingassociatedwithCOVID19藥材化合物MOLIDCAS號化學式相對分子量caryophylleneMOL00003687-44-5C15H24204.35CymolMOLOOOl179

32、9-87-6C10HI4134.22(S)-(+)-a-phellandreneMOL0002002243-33-6C10HI6136.23a-terpineolMOL00023298-55-5CI0H18O154.25BorneolMOL000244507-70-0C10H18O154.25冰片OleanolicacidMOL000263508-02-1C30H48O3456.71()-epoxycar),ophylleneMOL0004741139-306C15H24O220.35NerylacetateMOL000597141-12-8C12H20O2196.29p-pineneMOL0

33、00905127-91-3C10H16136.23p-elemeneMOL00090833880-83-0C15H24204.35Linalool(D)MOL000920126-90-9C10H18O154.25IsosafroleMOL006866120-58-1C10H10O2162.19續表1藥材化合物MOLIDCAS號化學式相對分子量BsitosterolMOL00035883465C29H50O414.71那金NaringcninMOL004328480-41-1C15HI2O5272.25QuercetinMOL000098117-39-5CI5H10O7302.24Kaempfe

34、rolMOL000422520-18-3C15H10O6286.24StigmasterolMOL00044983-48-7C29H48O412.69桅于MandenolMOLOOI494544-35-4C20H36O2308.55-hydroxy-7-methoxy-2-(35455-trimethoxyphenyl)chromoneMOL00309518103-41-8C19H18O7358.37SudanIIIMOL00456185-86-9C22H16N4O352.393-methylkempferolMOL0072451592-70-7C16HI2O6300.28贍香Muskketo

35、neNA541-91-3C16H30O238.412.3醒腦靜-有效成分-相關靶點相互作用網絡利用Cystoscape3.7.2軟件構建醒腦靜、有效成分、COVID-19相關靶點相互作用網絡，結果如圖1。Nanngcnin佛金B-sitosterol5-hydroxy-7-mcthoxy-2-(3,4,5-trimcthoxyphcnyl)chromoncKaempferol3-methylkempferol二施子SudanIIIStigmastcrolMuskketoneCOV1D-19Mandenol-terpineolQuercetinOlcanolic-terpineolB-caryo

36、phylleneIacetateLinalool(D)Lsosafrolc冰片CymolBorneolB-elemenePinene(S)-(+)-a-phellandrene(-)-cpoxycaryophyllcne圖1醒腦靜-有效成分-相關靶點相互作用網絡Fig.1InteractionnetworkofXingnaojing-activecompounds-potentialtarget藥材節點4個，化合物節點22個COVID-19相關靶點節點172個，邊236條。其中長方形代表冰片及其化合物，菱形代表郁金及其化合物，三角形代表相子及其化合物，平行四邊代表麝香及其化合物，圓形代表COV

37、ID-19相關靶點，連線表示疾病和藥材、藥材和成分、成分和靶點、靶點和疾病的關系。該網絡中，每個化合物平均與10.73個靶點有相互作用，每個靶點平均與1.37個化合物相互作用，說明醒腦靜具有整體調控、多成分作用多靶點的治療特點。從化合物角度看，通過分析化合物靶點的中心度值、親中心度值以及等級值可知，在醒腦靜有效成分中，與COVIDT9相關靶點結合最多的前5個化合物是麝香酮(muskketone)、懈皮素(quercetin)、山奈酚(kaempferol)、柚皮素(naringenin)、。-谷陪醇(。-sitosterol),分別能和145,36,10,9,8個潛在靶點發生相互作用。5個化合

38、物中，撇皮素、山奈酚、柚皮素屬于黃蹴化合物，生物活性多樣。棚皮素具抗病毒、抗炎作用叫III奈酚具明顯的抗炎作用回，柚皮素則是一種新型免疫調節劑肉，麝香酮具抗癡呆、抑捅缺血、抗炎等藥理作用，"谷帶醇具抗炎、保護胃黏膜等藥理活性網。從靶點角度看，與醒腦靜有效成分作用個數最多點的前5個靶點為PTGS1,CASP3,PPARG,BAX,ACHE,分別能與17,7,6,5,5個醒腦靜有效成分有相互作用。2.4醒腦靜潛在相關靶點的PPI網絡使用STRING網站分析醒腦靜潛在相關靶點基因，得到其PPI網絡，結果如圖2。MAXCSNDUOX2ECEI4LA-DMABCHh<WIGA2RY+PL

39、A2G5MRYR2MIFHDAC9TOPI今GM2_CMA1COL17AIEIF6儲，ECVIM,UCHLlLTAMGYS2CTSB、EIF2S1CASP10BBC3gs%dspSOD2-G仲GLDN4圖2醒腦靜相關靶點PPI網絡Fig.2PPInetworkofpotentialtargetsofXingnaojing/>rw/CD8A圖中節點表示靶點基因翻譯蛋白，蛋白之間連線的粗細表示兩者的潛在相關性，連線越粗，相關性越強。PPI圖中，共涉及節點172個，連線835條，平均節點9.71個，平均局部聚類系數為0.468,PPI富集顯著性參數P<1.0x10*%圖3為PPI網絡中與

40、其他蛋白相互作用個數前20的蛋白，這些蛋白有與細胞因子風暴關系密切的MAPK3,CSF2,IL4,IL13,IL17A,也有與細胞凋亡有關的CASP3,BCL2L1,TNFRSF1A,FASLG,CASP8,CTLA4o圖3PPI網絡中與其他蛋白相互作用個數前20的蛋白Fig.3Top20proteinsinteractingwithotherproteinsinthePPInetwork2.5醒腦靜相關靶點通路可視化分析使用DAVID網站對醒腦靜相關靶點進行GO富集分析，得到GO條目共計713個(P<0.05),其中包括生物過程(biolpgiMprocess)613個，細胞組分(ce

41、llularcomponent)50個，分子功能(molecularfuncii()n)50個，占比分別為86%,7%,7%,各類別前20條通路如圖4。通過KEGG通路分析得到共123條通路(PV0.05),關于病毒感染、肺炎和肺部損傷的通路包括influenzaA,viralproteininteractionwithcytokineandcytokinereceptor,non-smallcelllungcancer,smallcelllungcancer,HIF-1signalingpathway,toll-likereceptorsignalingpathway,Tcellrecept

42、orsignalingpathway,TNFsignalingpathway,PI3KAktsignalingpathway,MAPKsignalingpathway,apoptosis等。如圖5所示，排名前20的通路中，有21個和16個醒腦靜有效成分潛在作用靶點分別在influenzaA和TNFsignalingpathway通路中發揮重要作用。醒腦靜、有效成分、COVID-I9相關靶點相互作用網絡中具有重要調控作用的CASP3和BAX也富集在其中，PPI網絡中前20位核心蛋白也有多個在兩條通路發揮重要作用，包括MAPK3,CASP3,CASP8,CYCS,CSF2,TNFRSFIA,FAS

43、LG。antioxidantactivitypeptidebindingproteinkinasebindingkinasebindingcysteine-typepeptidaseactivitycysteine；typcendopeptidaseactivityproteinserine/threomnekinaseactivityproteinheterodimenizationactivitygrowthfactoractivitylipidbindingproteinkinaseactivitytranscriptionactivatoractivityproteinhomodime

44、rizationactivitycytokineactivitypeptidaseactivity,actingonL-aminoacidpeptidesendopeptidaseactivitypeptidaseactivityenzymebindingproteindimerizationactivityidenticalproteinbindingexternalsideofplasmamembraneinsolublefractioncytoplasmicvesiclemembrane-boundedvesiclesolublefractionendomembranesystemmit

45、ochondrionvesiclecellsurfaceorganellemembraneintrinsictoplasmamembraneintegraltoplasmamembraneorganellelumencellfractionextracellularspaceextracellularregionpartcytosolplasmamembranepartextracellularregionplasmamembranepositiveregulationofmolecularfunctionpositiveregulationofsignaltransductionpositi

46、veregulationofcellularbiosyntheticprocessapoptosispositiveregulationofcellcommunicationpositiveregulationofbiosyntheticprocessprogrammedceildeathdefenseresponseintracellularsignalingcascadedeathcelldeath徒因本體寫信分析332200111167762824151552382020212199955-33543325233333immuneresponsecellsurfacereceptorli

47、nkedsignaltransductionresponsetoorganicsubstancepositiveregulationofmacromoleculemetabolicprocessresponsetowoundingregulationofcellproliferationregulationofcelldeathregulationofprogrammedcelldeathregulationofapoptosis9994,3336n144434344441456664440102030405060708090基因總數/個圖4醒腦靜潛在作用靶點的GO富集分析Fig.4GOenr

48、ichmentanalysisofpotentialtargetsofXingnaojingApoptosisHumancytomegalovirusinfectionInfluenzaAEpstcin-barrvirusinfectionPathogenicEscherichiacoliinfectionHepatitisCTNFsignalingpathwayToxoplasmosisCelladhesionmolecules(CAMs)NecroptosisHepatitisBEGFRtvrosinekinaseinhibitorresistanceRheumatoidarthritis

49、Toll-likereceptorsignalingpathwayHIF-1signalingpathwayAutoimmunethyroiddiseaseViralmyocarditisPlatinumdrugresistanceAllograftrejectionTNFSIGNALINGPATHWAY505050.2.5.p.adjustIle-082e-083e-084e-080.040.16Generatio(a)KEGG通路分析LeukocyterecruitrneniApoptosisrccTTlIIMBcIAPl/2degradation|I

50、TCH|MAPK、+pTpl21NIKI、NF-kBITAK1MKK4/V?JNKI/2hMEK1旬Cg2|Cxc13|Cxcl5|CxcI10|Cx3cIl|LcukocyluactisalionApoptosisdAPTIJ%滿MSK1/2HCREBIObiquitinmediatedlJ-proteolysis>1iSurfacereceptors|FaslITTit同|JagI|InflammatorycytokinestDcubiquitinationbirRiP3|-rMLkLl-JIkBaubiquitination:anddegradationiIntracellularsignaling(ncgativc)|Rcl3|Nflbia|Soc；3|rraTnIntracellularsignaling(positive)I1(147|TranscriplionfactorsIFos|Jun|JunR|Remodelingofextracellularmatrix|Mmp3|Ktmp9Mmpl4|VasculareffectsNccrosomc(Limitedexpression)IT