1、槐花中黃酮類化合物分離和鑒定適用對象 中藥國際交流、中藥知識產權、中藥制藥工程、中藥資源專業實驗學時 9一、實驗目的要求學習黃酮類化合物的提取、分離和檢識，通過實驗要求：（1）了解沸水提取黃酮類化合物的原理和操作。（2）了解由蕓香苷水解制取槲皮素的方法。（3）掌握黃酮類化合物的主要性質及黃酮苷、苷元和糖部分的檢識方法。二、實驗原理由槐花中提取蕓香苷的方法很多，本實驗是根據蕓香苷在冷水和熱水中的溶解度差異的特性進行提取和精制。紙色譜的分離原理是利用各種化合物在流動相和固定相中分配系數的不同而達到分離目的。三、儀器設備烘箱、水浴鍋、鐵架臺，燒杯，三角燒瓶，濾紙，試管，層析槽，毛細管等。四、相關知識

2、點槐花為豆科植物槐Sophora japonica L.的干燥花及花蕾，主要含蕓香苷（蘆丁），含量高達1220%，水解生成槲皮素、葡萄糖及鼠李糖。蕓香苷（rutoside），分子式C27 H30 O16，分子量610.51，淡黃色針狀結晶，mp.177178。難溶于冷水（18000），略溶于熱水（1200），溶于熱甲醇（17），冷甲醇（1100），熱乙醇（130），冷乙醇（1650），難溶于乙酸乙酯、丙酮，不溶于苯、氯仿、乙醚、石油醚等，易溶于吡啶及稀堿液中。槲皮素（quercetin），分子式C15 H10 O7，分子量302.23，黃色針狀結晶，mp.314（分解）。溶于熱乙醇（123），

3、冷乙醇（1300），可溶于甲醇、丙酮、乙酸乙酯、冰醋酸、吡啶等，不溶于石油醚、苯、氯仿、乙醚中，幾不溶于水。五、實驗步驟（一）蕓香苷、槲皮素和糖的紙色譜鑒定1、點樣：取新華一號色譜濾紙，規格20 cm20 cm，在濾紙下端約2 cm處用鉛筆畫一直線，間隔2 cm分別點上下列樣品或標準溶液： （1）糖樣品溶液 （2）標準葡萄糖溶液 （3）標準鼠李糖溶液 （4）蕓香苷樣品甲醇溶液 （5）蕓香苷標準品溶液 （6） 槲皮素樣品甲醇溶液 （7）槲皮素標準品溶液2、展開劑：正丁醇-醋酸-水（415）上層上行展開。3、顯色：展開完畢，將濾紙取出，記錄溶劑前沿位置。待溶劑揮盡后，在（3）與（4）點之間剪開，分

4、別顯色。 （1）糖的顯色：噴苯胺-鄰苯二甲酸試劑，在105烘10分鐘，顯棕色斑點。計算并比較樣品和標準品的Rf值。 （2）黃酮化合物的顯色： 可見光下觀察色斑，紫外燈下觀察熒光斑點。經氨氣薰后再觀察。待氨氣揮盡后，噴1% AlCl3 甲醇溶液，再觀察。計算并比較樣品與標準品的Rf值。（二）蕓香苷和槲皮素性質試驗1、酸性試驗：取小試管8支，每4支一組，第一組每管中加入蕓香苷1mg，第二組每管中加入槲皮素1mg，每組四管中分別加入稀氨水、5%碳酸氫鈉水溶液、5%碳酸鈉水溶液、1%氫氧化鈉水溶液各2 ml，振搖后觀察各管溶解情況。溶解的溶液應呈黃色。再加濃鹽酸數滴酸化，黃色褪去或變淺，并有沉淀析出或

5、產生混濁。2、Molish反應：取試樣1 mg置小試管中，加乙醇0.5 ml溶解，加-萘酚試劑12滴，搖勻。傾斜試管，沿管壁徐徐注入濃硫酸約0.5 ml靜置。觀察兩層溶液的界面變化，出現紫色環者為陽性，表示樣品分子中含有糖的結構（糖和苷類均呈陽性反應），比較蕓香苷和槲皮素的不同。3、Fehling試驗：取試樣數mg，溶于0.5 ml熱水中，加斐林氏試劑甲、乙等量混合液2 ml，沸水浴上加熱，如產生氧化亞銅的暗紅色或黃色沉淀表示有還原糖或其它還原性物質。充分加熱作用后濾去沉淀，濾液滴加濃鹽酸酸化，在水浴上加熱水解，水解液以10% NaOH 中和，再進行斐林氏試驗，此時顯陽性反應者表示樣品為糖苷化

6、合物。比較蕓香苷和槲皮素的不同。4、鹽酸-鎂粉反應：取蕓香苷1 mg，加乙醇2 ml，在水浴上加熱溶解，加鎂粉約50 mg，滴加數滴濃鹽酸，溶液由黃色漸變紅色者表示有黃酮類化合物。以同法試驗槲皮素。 如用鋅粉代替鎂粉，則蕓香苷（3-羥基與糖結合成苷）仍有作用，而槲皮素（黃酮醇類）不呈還原顯色反應。因此可區別兩者。5、鋯-檸檬酸反應：取樣品1 mg，加甲醇2 ml，在水浴上加熱溶解，再加2%二氯氧鋯甲醇溶液34滴，凡有3-羥基或5-羥基的黃酮即呈鮮黃色。然后加2%檸檬酸甲醇溶液34滴，有3-羥基的黃酮黃色不褪。比較蕓香苷和槲皮素的不同。6、三氯化鋁反應：取樣品1 mg溶于甲醇中，加1%三氯化鋁甲醇溶液23滴，黃酮類呈鮮黃色，并有熒光。六、實驗報告要求應包括原理描述、實驗流程、數據記錄、解決問題的能力、實驗結果、實驗效果及建議等。七、思考題1、檢識黃酮類化合物的常用化學方法有哪些？2、本實驗中各種色譜的原理是什么？解釋化合物結構與Rf值的關系。3、試討論苷類成分的檢識程序。八、實驗成績評定方法本門實驗課程考核成績占課程總成績的30，該實驗考核成績占實驗總成績