1、病理生理學(xué)實驗指導(dǎo) 汪思應(yīng) 鄭紅 鄧松華 安徽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病理生理教研室 目錄一， 概論1二， 病理生理實驗基本操作方法2三， 實驗性肺水腫3四， 兔小腸灌溉的水腫模型復(fù)制3五， 缺氧4六， 再吸入式缺氧5七， 鉀代謝障礙5八， 失血性休克5九， 喜樹堿誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡6十， 急性左心衰竭7十一， 急性右心衰8十二， 病例討論肝性腦病8十三， 病例討論急性腎功能不全9十四， 病例討論MODS10十五， 病理生理學(xué)實驗教學(xué)大綱11十六， 病理生理學(xué)教學(xué)大綱12概 論病理生理學(xué)（Pathophysiology）是一門聯(lián)系基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床醫(yī)學(xué)的重要橋梁學(xué)科之一。它在理論課程中主要介紹了在致病因素作用

2、下機體的機能代謝：發(fā)生何種改變（即臨床癥狀及體征）；為何發(fā)生改變（即臨床癥狀及體征出現(xiàn)的機制）；這些改變的規(guī)律性及與疾病的關(guān)系；預(yù)防和處理這些改變的機理（即疾病防治措施的原理）。因此，病理生理學(xué)是一門理論性科學(xué)。同時它又是一門實驗性科學(xué)。病理生理學(xué)的實驗方法有兩種，即臨床研究和動物實驗研究。臨床研究的結(jié)果雖能直接應(yīng)用于患者，但有很大的局限性。所以，病理生理學(xué)主要采取動物實驗研究方法。在動物身上復(fù)制各種疾病或病理過程，作為人類相應(yīng)疾病的模型。實驗者可控制或改變實驗條件，以研究疾病的病因、發(fā)病環(huán)節(jié)、發(fā)病機制等。還可用于疾病的實驗性預(yù)防、治療及新型藥物和治療手段的開發(fā)研究等。人類疾病動物模型的復(fù)制有

3、很多方法。大致歸納為以下幾種：從自然界中選擇發(fā)病動物（如選擇生長有腫瘤的鼠、狗等）作為疾病動物模型。但該動物模型個體間差異很大，且發(fā)病條件及病程等不易控制，已很少被直接采用。現(xiàn)主要用經(jīng)人工選擇培育的不同品系的發(fā)病動物如由Okamoto和Aoki選育成功的SHR大鼠，其成年后100%發(fā)生高血壓，常用作自發(fā)性高血壓的動物模型。我國天津醫(yī)學(xué)院培育成功的津白-小鼠，成年后易發(fā)生乳腺癌等;根據(jù)疾病發(fā)生原因來復(fù)制疾病的動物模型。如用二乙基亞硝胺、二甲基偶氮苯來復(fù)制大鼠肝癌動物模型；我室張載福教授用盲腸結(jié)扎穿孔法造成小鼠腹腔感染來復(fù)制全身性炎癥反應(yīng)綜合癥（SIRS）的動物模型；根據(jù)疾病發(fā)生機制復(fù)制動物模型。

4、如本指導(dǎo)中用大劑量快速輸液提高家兔肺毛細(xì)血管流體靜壓以復(fù)制的實驗性肺水腫模型，動脈控制性放血造成的失血性休克模型。根據(jù)疾病的發(fā)生環(huán)節(jié)復(fù)制疾病的動物模型。本室將Lewis肺癌(Lewis lung carcinoma, LLC)接種小鼠足掌復(fù)制的腫瘤自發(fā)肺轉(zhuǎn)移模型，將LLC及B16黑色素瘤（B16 Melanoma,B16M）細(xì)胞直接注入小鼠眼球后靜脈所復(fù)制的腫瘤血道轉(zhuǎn)移模型。轉(zhuǎn)基因動物(Transgenic Animal)或基因敲除( Gene Knock-out)復(fù)制疾病動物模型。主要用于遺傳性疾病、重要基因功能的研究。一，病理生理的實驗?zāi)康牟±砩韺W(xué)實驗課的主要目的是：通過教學(xué)實驗指導(dǎo)學(xué)生

5、初步掌握人類疾病動物模型復(fù)制的基本方法；通過典型臨床病例的課堂討論，培養(yǎng)學(xué)生分析病例的能力，為臨床思維和臨床決策打下基礎(chǔ)；幫助學(xué)習(xí)者鍛煉操作技能、驗證和復(fù)習(xí)理論知識；通過實驗與課堂討論的具體環(huán)節(jié)，使學(xué)生初步具有進行醫(yī)學(xué)研究與臨床思維所必備的“嚴(yán)肅的科學(xué)態(tài)度、嚴(yán)密的科學(xué)方法和嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)作風(fēng)”等。二，病理生理學(xué)實驗課的要求 實驗前 認(rèn)真復(fù)習(xí)實驗有關(guān)理論及預(yù)習(xí)實驗指導(dǎo)，了解實驗的大致情況;專心聽取指導(dǎo)教師對實驗內(nèi)容的講解，熟悉實驗的具體方法及操作規(guī)程;領(lǐng)取并檢查實驗器材和藥品是否齊全;小組成員應(yīng)有分工，但同時應(yīng)注意合作，使每人都能得到應(yīng)有的技能訓(xùn)練。 實驗時 每人應(yīng)確立嚴(yán)謹(jǐn)、實事求是的科學(xué)態(tài)度，正規(guī)

6、和準(zhǔn)確的技能操作耐心、細(xì)致地觀察實驗中出現(xiàn)的每個現(xiàn)象；而且要準(zhǔn)確、及時、客觀地記錄。整個實驗過程都不得敷衍、馬虎和主觀臆測; 必須伴隨整個實驗過程進行科學(xué)思維，力求了解每個步驟和每個現(xiàn)象的意義;要注意盡量減少對實驗動物的不必要損傷; 愛護實驗器材，使用藥品應(yīng)注意節(jié)約。 實驗后 認(rèn)真整理和分析實驗結(jié)果;儀器和藥品用完后要清點，并放回原處。應(yīng)清洗者必須及時清洗干凈。每個實驗組，應(yīng)保持自己桌面的清潔，每次下課后，打掃、整理好實驗室;按時完成實驗報告，交老師評閱。 三，病理生理實驗報告應(yīng)書寫的項目和內(nèi)容 1，姓名、班次、組別、日期。 2，實驗名稱。 3，實驗?zāi)康募霸怼?4,實驗動物及材料：包括種類、

7、數(shù)量、性別、體重。 5,實驗的具體步驟：簡要寫出主要實驗方法。 6,實驗結(jié)果。根據(jù)實驗?zāi)康膶⒃加涗浵到y(tǒng)化、條理化。其表達(dá)方式有：敘述式：用文字將觀察到的、與實驗?zāi)康挠嘘P(guān)的現(xiàn)象客觀地加以描述，描述時需要有時間概念與順序。表格式：能夠較為清楚地反映觀察內(nèi)容，有利于相互對比。每一圖表應(yīng)說明一定的中心問題。圖表應(yīng)由學(xué)生自己設(shè)計。表內(nèi)的項目及計量單位應(yīng)填明。曲線式：實驗中描記的血壓、呼吸等曲線應(yīng)寫于實驗報告中。書寫時，須根據(jù)原始的描記圖，取其明顯變化的有關(guān)各段連接而成。 7,實驗結(jié)果分析或討論。由于實驗指導(dǎo)中的每一個實驗，都經(jīng)過編寫單位反復(fù)試做，結(jié)果可靠。同學(xué)所做實驗，次數(shù)雖少，若與這結(jié)果基本一致，即

8、可作為分析的依據(jù)。討論要包括：運用所學(xué)理論，討論和解釋實驗結(jié)果，論證實驗?zāi)康摹嶒灲Y(jié)果提示了哪些新問題。如果出現(xiàn)“異常現(xiàn)象”，應(yīng)加以分析。 8,結(jié)論：根據(jù)實驗結(jié)果簡要地寫明。 (汪思應(yīng))實驗一 基本實驗操作訓(xùn)練實驗?zāi)康?. 了解病理生理學(xué)動物實驗的基本用途、技術(shù)；2. 掌握氣管、頸動脈、靜脈及股動脈插管，輸液及血壓測量技術(shù)。藥品和器材 生理鹽水（0.9%NaCl），10.0%NaCl、0.1%肝素、普魯卡因。小動物手術(shù)器械一套（每套大號止血鉗各兩把，中號采止血鉗兩把，彎直小號止血鉗各兩把，有齒鑷各一把，眼科剪和鑷各一把，組織剪和粗剪各一把，手術(shù)刀片的刀柄一副）、粗細(xì)縫線各一卷，2ml和5 ml

9、和30 ml注射器（第6號針頭），標(biāo)本架（彈簧夾）一個，搪瓷搪瓷碗（25 ml）和方盤各一個。實驗動物家兔，體重2.5 kg。主要內(nèi)容病理生理學(xué)教學(xué)常用實驗動物簡介 病理生理學(xué)實驗研究采用何種動物，是決定研究成功與否的一個重要問題。一般應(yīng)針對實驗?zāi)康模鶕?jù)各種實驗動物疾病模型的經(jīng)驗，逐一考慮下述一系列問題：所要求的基本模型能否復(fù)制成功，成功率大小，采用的方法和所觀察指標(biāo)是否簡單易行，實驗結(jié)果穩(wěn)定一致的程度如何，動物是否便于管理，所獲得的實驗結(jié)果和人的臨床情況相比相似性的大小，需耗費的人力、物力、財力等。只有對這些因素進行綜合考慮，比較以后，才能確定采用何種動物較為合適。在教學(xué)上，不但要考慮以上

10、這些問題，還應(yīng)考慮教學(xué)效果，才能滿足實驗的目的和要求。 病理生理學(xué)實驗常用的動物有：兔、大白鼠、小白鼠、狗等。它們和人一樣，都屬于哺乳類動物。它們的生理特性與人接近。現(xiàn)將病理生理學(xué)實驗常用的動物用途簡介如下：（一） 家兔 家兔能用于復(fù)制許多病理過程和疾病，如：水腫、炎癥、電解質(zhì)紊亂、酸堿平衡紊亂、出血性休克、DIC、肺癌、動脈粥樣硬化、高脂血癥、心律失常、慢性肺心病、慢性肺動脈高壓、肺水腫、肝炎、膽管炎、阻塞性黃疸、腎性高血壓、腎小球腎炎、急性腎功能衰竭等。 特點：價格較低，性溫順，易飼養(yǎng)，繁殖率高，容易選到調(diào)節(jié)類似的對照組兔。因此，當(dāng)實驗中必須用較大動物時，常用家兔；在血液循環(huán)方面，家兔血管

11、雖較狗略細(xì)，但很容易做到直接描記頸動脈壓、股動脈壓、肺小動脈契壓、中心靜脈壓等。兔的心血管系統(tǒng)機能較貓、狗為差，用來觀察血壓反應(yīng)不如狗。手術(shù)時，兔易發(fā)生反射性衰竭，血壓反應(yīng)不穩(wěn)定，故給兔做手術(shù)時，動作要輕。兔的減壓神經(jīng)是獨立走向的，便于觀察減壓神經(jīng)對心、血管系統(tǒng)的作用。家兔心臟在離體情況下，搏動很久，是觀察有害因子對哺乳類動物心臟直接作用較合適的一個模型。離體兔耳，又可作為觀察有害因子對血管直接作用的一個模型；家兔適用于研究發(fā)熱、解熱藥和檢查致熱源；消化系統(tǒng)方面：家兔系草食動物，消化系統(tǒng)與人類相差較遠(yuǎn)，缺乏嘔吐反射，所以不能用家兔作消化系統(tǒng)方面的研究；其他：家兔對組織胺不敏感，對注射組織胺并不

12、產(chǎn)生血壓下降，甚至出現(xiàn)升壓反應(yīng)；因此，對家兔注射大量組織胺，并不能造成過敏性休克模型。 實驗用家兔體重必須2.5公斤以上。（二） 小鼠小鼠能用于復(fù)制許多病理過程和疾病，如：水腫、炎癥、缺氧、多種癌、肉瘤、白血病、多種傳染病、慢性氣管炎等。特點：小鼠是實驗室最常用的一種動物，價格低廉，便于大量繁殖，對動物實驗同種、純種、性別和年齡的要求，比較容易滿足，生活條件也容易控制。因而只要符合實驗要求，應(yīng)盡量采用。它適合于需要大量動物的實驗，容易滿足統(tǒng)計學(xué)的要求。例如：胰島素、促腎上腺皮質(zhì)激素的生物效價測定，毒物半致死量的測定；小鼠對許多疾病有易感性，因而適用于研究這類疾病，例如：血吸蟲病、瘧疾、流感、腦

13、炎等病。小鼠的純種品系甚多，每系有其獨特的生物特性，對某些疾病易感，例如：C3HA系對癌瘤敏感，C58系則抗癌；因此，純系小鼠廣泛應(yīng)用于各種腫瘤的研究；當(dāng)研究指標(biāo)主要為組織學(xué)特別是電鏡觀察時，應(yīng)用小鼠因器官較小，可節(jié)約人力、物力。例如：用于研究慢性氣管炎時肺的變化；小鼠具有發(fā)達(dá)的神經(jīng)系統(tǒng)，能應(yīng)用于復(fù)制神經(jīng)官能癥模型；小鼠對外界環(huán)境適應(yīng)性差，不耐冷熱，經(jīng)不起饑飽，比較嬌嫩；因此，做實驗時要耐心細(xì)致，動作要輕，不然會干擾實驗結(jié)果。實驗用小鼠常用品系有昆明種小鼠、BALB/C、C57BL/6等,必須6-8周齡，18-20克。可根據(jù)實驗要求選擇性別。（三） 大白鼠大白鼠能用于復(fù)制許多病理過程和疾病，如

14、：水腫、炎癥、缺氧、休克、DIC、心肌梗塞、肝炎、腎性高血壓、各種腫瘤等。特點：大白鼠和小白鼠相似，便于大量繁殖、對動物實驗同種、純種、性別和年齡的要求，比較容易滿足，生活條件也容易控制，適合于需要大量動物而小白鼠不能滿足實驗要求時，如：間斷亞硝胺口服或胃腸道外給藥能誘發(fā)大白鼠食道癌，而在小白鼠則很少引起食道癌；因而，在這種情況下，采用大白鼠較為合適；大白鼠較小白鼠體大，對需要作大體型的實驗，用大白鼠較為合適，例如：可用于直接記錄血壓，其血壓反映較家兔為好，大白鼠可用于研究休克，DIC時血液循環(huán)變化，大白鼠后肢可用作肢體血管灌流實驗，其心臟可用作離體心臟實驗，從大白鼠胸導(dǎo)管采取淋巴能研究疾病時

15、淋巴的變化；大白鼠無膽囊，因此，常用大白鼠膽管收集膽汁，進行疾病時膽汁功能研究；大白鼠的垂體-腎上腺系統(tǒng)功能很發(fā)達(dá)，常用作應(yīng)急反應(yīng)和腎上腺、垂體等內(nèi)分泌功能實驗，大白鼠的高級神經(jīng)活動發(fā)達(dá)，因此，也廣泛用于神經(jīng)官能癥的研究。大白鼠常用品系有SD、Wister，常用6-8周齡，體重250克的大鼠。 動物的捉拿和固定及其他操作方法 動物的捉拿和固定是進行動物實驗的基本操作之一，實驗者應(yīng)當(dāng)掌握嫻熟，首先，應(yīng)對動物的一般習(xí)性有所了解，然后依其習(xí)性的不同，采用相應(yīng)溫順的方法，迅速將其固定在便于實驗操作和觀察記錄的體位。下面介紹幾種常用動物的捉拿和固定方法。（一） 家兔的捉拿和固定,頸部手術(shù)、股動脈分離及插

16、管 1，家兔的捉拿和固定： 家兔習(xí)性溫順，除腳爪銳利應(yīng)避免被其抓傷，較易捕捉，捉拿時切忌以手提兔耳。拖拉四肢或提拿腰背部。正確的方法是用右手抓住其項背部皮毛，輕提動物，再以左手托住其臀部，使兔的體重主要落在左手掌心。家兔的固定，依不同的實驗需要，常用兔盒固定或兔臺固定。我室采用兔臺固定：在需要觀察血壓、呼吸和進行頸、胸、腹部手術(shù)時，應(yīng)將家兔以仰臥位固定于兔手術(shù)臺上，固定方法是，先以四條1.0cm寬的布帶做成活的圈套，分別套在家兔的四肢腕或踝關(guān)節(jié)上方，抽緊布帶的長頭，將兔仰臥位放在兔臺上，再將兔頭固定器固定。然后將兩前肢放平直，把兩前肢的系帶從背部交叉穿過，使對側(cè)的布帶壓住本側(cè)的前肢，將四肢分別

17、系在兔臺的木樁上。練習(xí)耳緣靜脈注射。2，家兔頸部手術(shù)、股動脈分離及插管：家兔稱重固定于兔臺后，剪去其頸部兔毛，在取5.0-7.0ml1%普魯卡因皮下浸潤麻醉，沿頸正中切開頸部皮膚約10.0cm，分離皮下筋膜組織，可見三塊肌肉：即頸正中的胸骨舌骨肌，兩側(cè)的胸鎖乳突肌。在胸鎖乳突肌外緣與皮瓣交界處是頸外靜脈，鈍性分離光滑一側(cè)頸外靜脈，在下面穿兩條線，結(jié)扎頸外靜脈遠(yuǎn)心端，在近心端靠近結(jié)扎處剪一小口插入靜脈導(dǎo)管（靜脈導(dǎo)管連接靜脈輸液裝置，注意排除管道的氣體），結(jié)扎固定，打開靜脈輸液裝置的螺旋夾，如果輸液暢通時，即調(diào)整螺旋夾使液體維持5-10滴/分鐘以保持插管通暢。分離開胸骨舌骨肌，其下方是氣管，分離并

18、“倒T型”切開氣管，插入氣管插管及結(jié)扎。準(zhǔn)備描計呼吸。在氣管的左右后方，各有一條與交感神經(jīng)、迷走神經(jīng)伴行的頸動脈，分離頸動脈并穿線兩條，結(jié)扎頸動脈遠(yuǎn)心端，用動脈夾夾住近心端，在近心端靠近結(jié)扎處剪一小口插入動脈導(dǎo)管（動脈導(dǎo)管內(nèi)充含肝素的生理鹽水，并與血壓計相連，血壓計壓力140mmHg左右），結(jié)扎并固定導(dǎo)管，松開動脈夾可測量血壓。剪去一側(cè)腹股溝兔毛，觸摸股動脈搏動以確定其位置，在1.0%普魯卡因皮下浸潤麻醉下，沿股動脈走行方向切開皮膚，分離皮下組織，在股動脈隱窩處找出并小心分離出股動脈，穿線兩條，結(jié)扎股動脈遠(yuǎn)心端，用動脈夾夾住近心端，在近心端靠近結(jié)扎處剪一小口插入動脈導(dǎo)管（動脈導(dǎo)管與50mL注射

19、器相連，并用肝素抗凝），結(jié)扎并固定導(dǎo)管，松開動脈夾可放血。（二） 大白鼠的捉拿和固定 大白鼠牙齒鋒利，要提防被其咬傷，從鼠籠內(nèi)捉拿時右手最好帶手套，捉住其尾巴，提出置于實驗臺上，以左手拇指和食指、中指抓住兩耳后項背部皮膚，將鼠固定在左手掌中，右手進行操作，也可伸開左手之虎口，敏捷地從背部插向腋下，使食指位于左前肢前，拇指、中指位于左前肢之后，一把抓住，右手進行操作，如操作時間較長，可參照家兔固定方法將其固定在大白鼠固定板上。（三） 小鼠的捕捉和固定 小鼠較大白鼠溫和，雖也要提防被其咬傷手指，但勿需帶手套捕捉。可先用右手抓住鼠尾提起，置于鼠籠或?qū)嶒炁_上，用左手的拇指和食指抓住小鼠兩耳后項背部皮膚

20、，將鼠體置于左手心中，拉直后肢，以無名指及小指按住鼠尾。同時右手可手持注射器作小鼠腹腔等注射。 （汪思應(yīng)）實驗二 實驗性肺水腫目的要求1. 復(fù)制實驗性肺水腫2. 結(jié)合理論掌握肺水腫的表現(xiàn)及其發(fā)生機理實驗原理 大劑量快速輸液導(dǎo)致兔肺毛細(xì)血管流體靜壓升高，肺組織液生成大于回流，引起肺水腫的發(fā)生。實驗動物家兔，體重2.5 kg。藥品及器材1.0%普魯卡因，腎上腺素,生理鹽水（0.9%NaCl）,常規(guī)小動物實驗用器材。步驟及觀察一 實驗組1. 取兔一只，稱體重后仰臥固定于兔臺上、剪去頸部被毛，在1%普魯卡因局麻下切開頸部皮膚，按常規(guī)操作，分離氣管和一側(cè)頸外靜脈，在下面穿一線。切開氣管，插入氣管插管。準(zhǔn)

21、備描計呼吸。把靜脈導(dǎo)管連接靜脈輸液裝置，注意排除管道的氣體。結(jié)扎頸外靜脈遠(yuǎn)心端，在近心端靠近結(jié)扎處剪一小口插入靜脈導(dǎo)管，結(jié)扎固定，打開靜脈輸液裝置的螺旋夾，如果輸液暢通時，即擰緊螺旋夾。2. 描計一般正常呼吸，并用聽診器聽肺的呼吸音，然后輸入37生理鹽水（輸入總量按100-120ml/kg,輸記速度為180-200滴/分）待滴注將近完畢立即從輸液瓶中加入稀釋腎上腺素生理鹽水（按腎上腺素0.45mg/kg體重）。3. 密切觀察呼吸改變和氣管插管是否有粉紅色泡沫液體流出，并用聽診器聽診肺部有無濕性羅音出現(xiàn)，當(dāng)證明肺水腫出現(xiàn)時，則夾住氣管，處死動物，打開胸腔，用線在氣管分叉處結(jié)扎（防止肺水腫液流出）

22、在結(jié)扎處上方切斷氣管，小心把心臟及其血管分開，（勿損傷肺）把肺取出，用濾紙吸去肺表面的水分后稱取肺重，計算肺系數(shù)，用排水法測肺體積。然后肉眼觀察肺大體的改變，并切開肺，觀察肺水腫和正常肺組織切片。 肺系數(shù)=肺重（克）/兔體重（千克） 正常肺系數(shù)4.0-5.0二 對照組 與實驗組基本相同，除不加腎上腺素外。 注意事項1. 實驗兔和對照兔的輸記速度應(yīng)基本一致，輸液不要太快，以控制在180-200滴/分為宜。2. 解剖取出肺時，注意勿損傷肺表面和擠壓肺組織，以防止水腫液流出，影響肺的數(shù)值。 （鄭紅、汪思應(yīng)）參考實驗一 兔小腸灌溉的水腫模型復(fù)制實驗?zāi)康? 學(xué)會小腸灌溉標(biāo)本的制作。2 了解毛細(xì)血管壓，膠

23、體滲透壓，晶體滲透壓在水腫發(fā)生中的作用。實驗?zāi)康?利用血管機械阻斷與否，使局部組織液生成增加或減少。藥品和器材 生理鹽水（0.9%NaCl），10.0%NaCl、0.1%肝素、普魯卡因。小動物手術(shù)器械一套（每套大號止血鉗各兩把，中號采止血鉗兩把，彎直小號止血鉗各兩把，有齒鑷各一把，眼科剪和鑷各一把，組織剪和粗剪各一把，手術(shù)刀片的刀柄一副）、粗細(xì)縫線各一卷，2ml和5 ml和30 ml注射器（第6號針頭），標(biāo)本架（彈簧夾）一個，搪瓷碗（25 ml）和搪瓷方盤各一個。實驗動物 家兔，體重2.5 kg。實驗步驟（一） 兔小腸灌流標(biāo)本的制作1. 取家兔一只，稱重后背位固定于兔板，1%普魯卡因局部麻醉后

24、，自劍突下2.0cm做腹部正中切口約8.0cm，打開腹腔，用溫鹽水紗布覆蓋切口及周圍皮毛。2. 在左腹側(cè)腔將小腸輕輕牽出，并一側(cè)（使動脈位于靜脈之上）。找到腸系膜前動、靜脈（相當(dāng)于人的腸系膜上A、V），管徑較細(xì)，色紅且有搏動的一根為動脈，另一根為靜脈。3. 在靠近腸系膜前動脈的根部用小彎止血鉗分離動脈約1.5 cm，分離時注意不要損傷動脈的分支。然后穿兩根細(xì)線備用。4. 自耳緣靜脈注射0.1%肝素1.0 ml/kg，1-2分鐘后結(jié)扎腸系膜前動脈的近心端，向遠(yuǎn)心方向插入細(xì)塑料管約1.0cm。扎牢后，將此線在細(xì)塑料管上再做一次結(jié)扎以防脫落。5. 于動脈插管結(jié)扎線下第一根動脈分支的上方，動脈和靜脈之

25、間穿一根粗線將腸管和靜脈一并結(jié)扎，然后在第一根分支的上方再穿一線將腸管單獨結(jié)扎，并從兩扎線間將腸管和靜脈切斷。注意標(biāo)本側(cè)的靜脈是游離的，其內(nèi)的液體可以自由流出。6. 自扎線處開始向下排空小腸約25.0 cm，在小腸20.0 cm和離動脈插管5 .0cm的血管處穿兩根粗線，將腸管和血管一并結(jié)扎兩次，然后在兩結(jié)扎線間剪斷，最后沿圖中虛線所示游離標(biāo)本。7. 將標(biāo)本懸掛在標(biāo)本架上，在腸游離緣上支腸長垂直剪3-4個小口，以腸腔內(nèi)容物能流出為度。8. 以5 ml注射器吸取生理鹽水，經(jīng)動脈插管沖去血管中的血液，該標(biāo)本即可用于灌溉。（二） 灌流裝置的準(zhǔn)備。（三） 灌流: 0.9%NaCl; 中分子右旋糖苷灌流

26、, 25 cm水柱壓力加壓灌流; 0.9%NaCl灌流;10.0% NaCl灌流;100 cm水柱壓力加壓灌流。結(jié)果與討論 （鄭紅、汪思應(yīng)）實驗三 缺 氧實驗?zāi)康模?， 在動物身上復(fù)制缺氧性、血液性等缺氧模型；2， 并觀察缺氧動物呼吸，活動狀態(tài)、皮膚及內(nèi)臟顏色的變化，分析不同類 型缺氧的發(fā)病機理；3， 觀察麻醉、年齡等因素對缺氧耐受性的影響。實驗原理： 人為制造小白鼠處于密閉環(huán)境，由于不斷用氧，使其吸入氣體氧分壓下降，復(fù)制小鼠低張性缺氧動物模型，腹腔注射亞硝酸鹽、吸如CO復(fù)制小鼠等張性缺氧動物模型。實驗動物：小白鼠（18-22g,雌性或雄性）。藥品器材：碳酸氫鈉、甲酸、濃硫酸、5%亞硝酸鈉、1

27、%美蘭、10%烏拉坦，0.1%氰化鉀、生理鹽水、凡士林、25 ml廣口瓶、一氧化碳發(fā)生裝置、手術(shù)剪刀、鑷子、30 ml、5 ml及1 ml注射器、氧氣袋。1. 低張性低氧血癥：取體重相似，性別相同的小白鼠三只分別裝入三個廣口瓶內(nèi)，觀察小白鼠正常活動情況，呼吸頻率（次/10秒），深度、皮膚和口唇的顏色，然后塞緊瓶塞，記錄時間，以后每三分鐘重復(fù)觀察上述指標(biāo)一次（如有其他變化則隨時記錄）直到動物死亡為止。動物尸體在實驗做完后，依次打開腹腔，比較血液或肝臟顏色。2，麻醉對機體耐受缺氧的影響：體重相近的小白鼠兩只，其中一只腹腔內(nèi)注入10.0%烏拉坦0.1ml/10g。分別放在廣口瓶中，塞緊瓶塞后，開始記

28、時。以下步驟同實驗1。3，年齡對機體耐受缺氧的影響：取1只成年鼠和一只新生紅皮鼠，同放在一個廣口瓶（紅皮小鼠放入一小青霉素瓶中）蓋緊瓶塞，觀察小鼠活動等情況，記錄生存時間。4，亞硝酸的中毒缺氧：取體重相近小鼠3只，甲鼠腹腔內(nèi)注射5.0%亞硝酸鈉0.2 ml，乙鼠在注射亞硝酸鈉后（同劑量），再注射1%美蘭0.2 ml，丙鼠腹腔內(nèi)注射生理鹽水0.2 ml對照。觀察各鼠呼吸、皮膚顏色和全身活動，存活時間。5，一氧化碳中毒缺氧：取小鼠兩只，觀察正常活動，口唇、鼻、尾部皮膚顏色，呼吸頻率。取1只小鼠放入250 ml廣口瓶內(nèi)，用注射器抽10 ml一氧化碳注入瓶內(nèi)，立即蓋上瓶蓋，注意動物行為狀態(tài)和皮膚顏色變

29、化，呼吸頻率。待小鼠痙攣跌倒時，迅速打開瓶蓋，取出小鼠并進行通氧等急救措施，觀察恢復(fù)情況；另一只小鼠重復(fù)CO中毒實驗，但不進行搶救，死后進行解剖，觀察皮膚、內(nèi)臟和血液的顏色。 6，請自己設(shè)計一實驗，觀察環(huán)境溫度對小鼠缺氧耐受性的影響（附于實驗報告中）。（汪思應(yīng)、鄭紅）參考實驗二 再吸入式缺氧實驗?zāi)康模? 在動物身上復(fù)制乏氧性缺氧模型；2 并觀察缺氧動物血氧指標(biāo)變化，分析不同類型缺氧的發(fā)病機理；實驗原理： 人為制造家兔處于密閉環(huán)境，使其吸入氣體氧分壓下降，復(fù)制家兔低張性缺氧動物模型，并觀測血氧指標(biāo)的變化。實驗動物：家兔，體重2.5 kg。藥品器材：生理鹽水（0.9%NaCl），20.0%NaOH

30、、0.1%肝素、普魯卡因。小動物手術(shù)器械一套（每套大號止血鉗各兩把，中號采止血鉗兩把，彎直小號止血鉗各兩把，有齒鑷各一把，眼科剪和鑷各一把，組織剪和粗剪各一把，手術(shù)刀片的刀柄一副）、粗細(xì)縫線各一卷，2ml和5 ml和30 ml注射器（第6號針頭），標(biāo)本架（彈簧夾）一個，搪瓷碗（25 ml）和搪瓷方盤各一個，氧氣袋，血壓計，血紅素測定裝置等。實驗步驟：1， 稱重后背位固定于兔臺上，手術(shù)部位去毛。2， 1%普魯卡因局麻下，切開頸部正中皮膚約5-8 cm，分離氣管并作氣管插管，于氣管兩側(cè)分離頸總A穿線備用。3， 局麻下，切開腹股溝部皮膚，分離一側(cè)股動脈，穿線備用。4， 耳緣V注入肝素2.0ml/kg

31、(500u/ml),使全身肝素化。5， 側(cè)頸總A做動脈插管結(jié)扎固定并與血壓描計相連。氣管插管與呼吸描計相連，股A內(nèi)插入通針頭的細(xì)塑料管，結(jié)扎備用。6， 描計正常呼吸曲線（包括血壓曲線）。以另一側(cè)頸總A行夾閉反射。7， 自股A放血數(shù)滴于表面器皿上測動物HB含量。8，用吸管吸取20.0%NaOH10-20 ml于再吸入式缺氧瓶內(nèi)，塞緊瓶塞。將瓶之A端與氣管插管之側(cè)管相連，使兔的呼吸只能與缺氧瓶水柱壓記相通，立即記錄開始缺氧時間，缺氧過程中，不斷搖動缺氧瓶，使兔呼出氣之CO2充分為NaOH所吸收。9， 意動物血壓及呼吸變化，當(dāng)血壓降至原水平1/2時，立即自股動脈采血（開始幾滴血液棄去），測定HB含量

32、，并行頸A夾閉反射。10， 血壓降至20mmHg時，停止缺氧，觀察其恢復(fù)情況改良沙利氏血色素測定法 于血色素稀釋管內(nèi)加1%鹽酸至10.0%刻度處。 用血紅蛋白吸管于表面皿內(nèi)吸血至20立方毫米刻度處，用脫脂棉擦去管口周圍的血液。 將吸管迅速浸入稀釋管中的鹽酸內(nèi)，輕輕將管內(nèi)血液吹出，反復(fù)吸入上部之鹽酸將吸管的血洗凈，將稀釋管插入血色素比色架內(nèi)，靜止10分鐘。 10分鐘后于比色管內(nèi)緩慢加入蒸餾水稀釋，邊加邊混勻，當(dāng)管內(nèi)顏色接近于標(biāo)準(zhǔn)比色柱時，加水的速度要慢。 當(dāng)管內(nèi)顏色與標(biāo)準(zhǔn)比色柱一致時，從管壁刻度記下讀數(shù)，即為100ml血壓所含血紅蛋白的克數(shù)。（鄭紅、汪思應(yīng)）參考實驗三 鉀代謝障礙目的要求1. 觀

33、察高血鉀對心臟的毒性作用2. 了解和掌握高血鉀心電圖改變的特征。實驗原理腹腔或靜脈注射鉀，造成動物血清鉀增高。實驗動物鼠(SD或Wister, 250.0g) 或家兔(體重2.5 kg)。藥品與器材20.0%烏拉坦溶液、2.0%、5.0%、10.0%氯化鉀溶液。5ml注射器、小兒頭皮針、手術(shù)剪、心電圖機或二導(dǎo)生理記錄儀。實驗步驟與觀察1. 鼠高血鉀（1）動物稱重、仰臥固定，用20.0%烏拉坦0.5ml/100g體重腹腔注射麻醉。（2）在心電圖機原有的電極檢緊包鋁皮，套上6號注射針頭（勿松動）。然后將電極分別入四肢踝部皮下，導(dǎo)線按右前肢（紅），左前肢（黃）、右后肢（黑）、左后肢（綠）順序。（如用

34、生理二導(dǎo)記錄儀，則按二導(dǎo)儀導(dǎo)線聯(lián)后方式連接）。（3）記錄一段正常心電圖，紙長以每實驗小組內(nèi)每人分到4-5個園形為度。（4）由腹腔推入5.0%氯化鉀1.0 ml，注射后5分鐘記錄一次心電圖變化。（或注射2.0%氯化鉀2.0 ml）（5）從首次推注氯化鉀起，每5分鐘再注射5.0%氯化鉀0.5 ml。每次注后5分鐘記錄一次心電圖改變（有可能要隨時記錄）發(fā)生室顫時，立即開胸觀察心跳狀態(tài)。2. 兔高血鉀（1）稱重后仰臥固定，可不麻醉，若躁動可用20.0%烏拉坦5.0 ml/kg耳緣靜脈麻醉。（2）局麻下由胸壁正中線切開皮膚，切口約4-5厘米，分離左側(cè)胸壁肌肉，用粗剪刀在靠近胸骨緣處剪斷第二及第三肋骨，用

35、擴胸器撐開胸腔切口，暴露心臟。（3）連接心電圖導(dǎo)線，按右前肢（紅）、左前肢（黃）、右后肢（黑）、左后肢（綠）順序。（4）記錄一段正常心電圖。（或二導(dǎo)儀）（5）用小兒頭皮針插入耳緣靜脈，并用膠布固定，經(jīng)耳緣靜脈推注2.0%氯化鉀1.0 ml/ kg 1分鐘注完，注射后5分鐘記錄一次心電圖或二導(dǎo)儀的變化。（6）以后每5分鐘由耳緣靜脈注入2.0%氯化鉀2 ml，間斷記錄心電變化，若在30分鐘仍未出現(xiàn)室顫，可由耳緣靜脈緩慢注入10%氯化鉀，并觀察心電變化情況，直至家兔心臟停博。注意事項1.腹腔注射氯化鉀，應(yīng)選擇下腹部前1/4處，以避免將溶液注入膀胱內(nèi)。2.盡可能避免導(dǎo)線縱橫交錯，動物固定臺上保持干燥，

36、每次使用針形電極時要用酒精或鹽水擦凈，以保持良好的導(dǎo)電狀態(tài)。（鄭紅、汪思應(yīng)）實驗四 失血性休克實驗?zāi)康?， 復(fù)制失血性休克的動物模型；檢測休克時部分體液因子的變化；2， 通過比較擴血管藥和縮血管藥對失血性休克的療效，分析休克發(fā)生機制。實驗原理 用控制性動脈放血造成家兔急性失血，復(fù)制失血性休克的動物模型。實驗動物家兔，體重2.5 kg。藥品和器材動物手術(shù)器械一套，呼吸血壓描記裝置，靜脈輸液裝置一套，三通開關(guān)，50 ml、20 ml、10 ml注射器各一個，肝素（500/ ml），1%普魯卡因，生理鹽水，低分子右旋糖苷，山莨菪堿，去甲腎上腺素。實驗方法和步驟1.家兔一只稱重，麻醉，剪去頸部、股部兔

37、毛。2.1%普魯卡因局麻下頸部正中切開皮膚，分離氣管，分離左側(cè)頸動脈及右側(cè)頸靜脈，穿線備用，分離一側(cè)股動脈穿線備用。3.耳緣靜脈注入肝素（2.0 ml/kg）4.作氣管插管；頸靜脈插管連接中心靜脈壓裝置；頸動脈插管（內(nèi)有含肝素的生理鹽水）并連接血壓描記裝置；股動脈插入帶有三通開關(guān)的乳膠管備用。5.劍突下2.0cm處于腹正中線切開皮膚4.0-5.0 cm，將腹白線輕輕拖起，切開腹白線，注意止血，用手輕輕將一段二十指腸和系膜拉出腹前用溫生理鹽水紗布包裹，然后將家兔向左側(cè)位固定，把腸系膜放在置于微循環(huán)裝置的觀察孔上，用大頭針固定，用顯微鏡直接觀察血前后的腸系膜毛細(xì)血管的血流狀況。6.打開連接股動脈的

38、三通開關(guān)，一次快速放血于50 ml注射器內(nèi)，待血壓降到40mmHg水平，取血4.0ml備用。維持血壓40mmHg30分鐘，每隔10分鐘取血4.0ml，分別檢測休克不同時間TNF，MDF，兒茶酚胺等的水平。1. 休克搶救實驗分組（1） 對照組：動脈血壓降至40mmHg后維持1小時，然后將放出的血自頸靜脈全部快速點滴輸回，必要時加低分子右旋糖苷30.0 ml，觀察輸液過程中各項指標(biāo)變化。（呼吸、血壓）（2） 去甲腎上腺素組：放血后血壓降至40 mmHg后，維持30分鐘，然后自頸靜脈緩慢滴入去甲腎上腺素生理鹽水25.0 ml（含去甲腎上腺素1.0mg），在20-30分鐘內(nèi)滴完，將放出的血快速自頸靜脈

39、輸回，觀察20分鐘，觀察各項指標(biāo)。（3） 654-2組：在動脈血壓降至于40 mmHg30分鐘后，自頸靜脈緩慢滴入654-2生理鹽水25.0 ml（含654-2 2.0mg）于30分鐘內(nèi)滴完，再將放出的血自頸靜脈快速回，必要時加低分子右旋糖苷，觀察20分鐘各項指標(biāo)。分析各組實驗結(jié)果討論：失血性休克過程中，微循環(huán)變化特點。（鄭紅、汪思應(yīng)）實驗五 喜樹堿誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡實驗?zāi)康模?， 初步掌握檢測細(xì)胞凋亡（Apoptosis）這一特殊的細(xì)胞生命活動現(xiàn)象；2， 結(jié)合理論討論細(xì)胞凋亡與疾病的關(guān)系。實驗原理：喜樹堿（camptothecin）是一種抗腫瘤藥物，研究發(fā)現(xiàn)其可以誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡。

40、本實驗用含一定量喜樹堿的培養(yǎng)液培養(yǎng)K562細(xì)胞，誘導(dǎo)培養(yǎng)3小時后，提取K562細(xì)胞的DNA，用凝膠電泳法分析其是否發(fā)生凋亡，并用正常及壞死的K562細(xì)胞DNA作對照。實驗器材：100mA電泳儀，電泳槽，紫外觀察儀，高速離心機， OLYPMUS顯微鏡，水浴箱，K562細(xì)胞，喜樹堿，瓊脂糖，溴化乙錠， 1.0mg/ml蛋白酶K， 10.0mMEDTA，NP40，0.1MPBS(PH7.5)，RNase ， 1×TBE緩沖液，上樣緩沖液， TE緩沖液,DL2000 Marker.實驗步驟：1. 取指數(shù)生長期的K562細(xì)胞2.0×106個，用含喜樹堿的培養(yǎng)液培養(yǎng)3小時(對照組不加喜

41、樹堿)，取少許細(xì)胞滴片，染色后高倍鏡觀察；用含2.0mMEDTA 、PH7.5的PBS離心洗兩遍（1200rpm），棄上清，。2. 加400.0l TBE（臨用時加0.25%NP40），10.0l RNase至1.0mg/ml，37，30分鐘。3. 加蛋白酶K（1.0mg/ml）10.0l，37，30分鐘。14000rpm，4離心15分鐘，收集上清（-70）。4. 取上清50.0l，加上樣緩沖液5.0l，1.5%瓊脂糖凝膠電泳30分鐘，紫外線透視儀下觀察，凋亡細(xì)胞出現(xiàn)DNA Ladder，DNA多為100-300bp。5. 下圖為示教結(jié)果：0.1Kb0.2Kb0.75Kb0.4Kb2.0Kb1

42、.0Kb（汪思應(yīng)）實驗六 急性右心衰竭實驗?zāi)康?. 復(fù)制急性右心衰竭動物模型；2. 觀察急性右心衰竭時血液動力學(xué)的主要改變。實驗?zāi)康?利用液體石臘阻塞兔大部分肺毛細(xì)血管，造成右心后負(fù)荷增加；大劑量快速輸液增加右心前負(fù)荷，誘發(fā)家兔急性右心衰。實驗動物家兔，體重2.5 kg。藥品和器材3.0%戊巴比妥鈉溶液；1.0%普魯卡因溶液；3.0%肝素溶液、液體石蠟、山梗菜堿。手術(shù)器械一套：1 ml、5 ml、10 ml注射器；中心靜脈壓測量裝置、輸液裝置、二導(dǎo)儀、秒表實驗步驟1. 家兔稱重，仰臥固定。2. 頸部正中皮下注射1.0%普魯卡因局部麻醉，作頸部正中切口，游離出兩側(cè)頸外靜脈和一側(cè)頸總動脈。3. 由

43、耳緣靜脈注入3.0%肝素液（2.0 ml/kg），經(jīng)右側(cè)頸外靜脈插入中心靜脈壓導(dǎo)管；測量中心靜脈壓，經(jīng)左側(cè)頸外靜脈插管連接輸液裝置，經(jīng)頸總動脈插管連接二導(dǎo)儀描記血壓，劍突下皮下穿大頭針一只，連接二導(dǎo)儀記錄呼吸。4. 測量實驗前各種指標(biāo)動脈血壓：呼吸；中心靜脈壓；循環(huán)時間側(cè)記。（自耳緣靜脈快速注入0.3% 山梗菜堿1.0ml，計由注入至出現(xiàn)呼吸變深變快的時間）。5. 實驗過程（1） 實驗前各項指標(biāo)觀察完畢，即用1 ml注射器，由耳緣靜脈注入液體石蠟（0.5 ml/kg），注射速度要慢（注射到血壓下降到70mmHg為度），10分鐘后再觀察上述指標(biāo)有何變化。（2） 待動物血壓、呼吸穩(wěn)定后，加快輸液速

44、度（180-200滴/分）快速輸入生理鹽水后，再重復(fù)上述指標(biāo)測定。（3） 待動物死之后，剖開胸、腹腔，觀察有無腹水及其量，腸壁有無水腫，肝臟體積、心臟體積有無胸水，肺臟外觀及切面變化，最后剪破靜脈，放出血液，注意肝臟和心臟體積變化。（鄭紅、汪思應(yīng)）機能綜合實驗三、急性中毒性腎功能不全【實驗?zāi)康摹浚?）觀測正常家兔尿量及ADH對尿量的影響；（2）急性中毒性腎功能不全的動物模型；（3）觀察比較急性腎功能不全與正常動物血氣、酸堿、血清鉀及尿的變化，分析其發(fā)生機制；（4）運用相關(guān)藥物對急性腎功能進行初步治療。【實驗原理】采用腎毒物重金屬HgCl2溶液造成家兔急性腎小管壞死，復(fù)制急性腎功能不全的動物模型

45、，通過觀察動物的血氣、酸堿、血尿素氮（BUN）、血清鉀及尿的變化，學(xué)習(xí)急性腎衰時內(nèi)環(huán)境的變化。【實驗動物】家兔3只，體重2.5 kg。【實驗藥品與器材】1.0% HgCl2溶液，3.0%戊巴比妥鈉溶液或20.0%氨基甲酸乙醇溶液，1.0%普魯卡因溶液，生理鹽水，1.0%肝素生理鹽水溶液；兔臺，手術(shù)器械，1 ml和5 ml注射器，試管，滴管，漏斗，吸管，試管夾，酒精燈，試管架，頸動脈插管，血氣分析儀，生化分析儀，離心機，光電比色儀，水浴鍋。【觀察指標(biāo)】全血 血氣分析儀測定pH值、PaCO2、HCO3-、K+、Na+和Cl- 。血清 生化分析儀測定BUN。尿 尿量、尿蛋白定性和鏡檢。腎 大體、剖面

46、。【實驗方法與步驟】（1）取家兔三只，一只為正常對照（A），一只為中毒實驗兔（B），另一只為ADH處理兔（C）。于實驗前一天稱重后，實驗兔皮下或肌內(nèi)注射1.0% HgCl2（按1.51.7 ml/kg，一次注射），造成急性中毒性腎功能不全模型，C兔注射ADH對照兔則在相同部位注射同量的生理鹽水，作為對照。將三只兔籠分別置于大漏斗上，收集尿液，測量24 h尿量。（2）實驗開始，家兔稱重后，20.0%氨基甲酸乙酯溶液（0.51.0 g/kg體重）或3.0%戊巴比妥鈉（30.0 mg/kg體重）耳緣靜脈注入麻醉后，仰臥固定于兔臺。下腹部剪毛，在恥骨聯(lián)合上2.0± cm處做長約5.0 cm的

47、正中切口，分離皮下組織，沿腹白線切開腹膜，暴露膀胱，插管取出全部尿液，供尿蛋白定性和尿液鏡檢。（3）頸部正中切口，分離一側(cè)頸總動脈，頸動脈插管內(nèi)注入肝素生理鹽水溶液，進行頸動脈插管。（4）抽取0.5 ml動脈血做血氣分析，取3.0 ml動脈血（滴入肝素數(shù)滴后）離心（1500 r/min, 510 min）,取血清供BUN測定用。（5）尿常規(guī)檢查。1）將尿液1500 r/min離心510 min。2）顯微鏡檢查 取尿沉渣，涂在玻片上，觀察有無異常成分（細(xì)胞和管型）。3）尿蛋白定性檢查 取大試管盛尿液，傾斜試管于酒精燈上，將試管中的尿加熱至沸騰，觀察有無混濁，加數(shù)滴醋酸，再加熱至沸騰，混濁不退為蛋

48、白陽性，按其混濁程度以-、+、+、+、+表示之。“-”表示尿液清晰無混濁“+”表示尿液出現(xiàn)輕度白色混濁（含蛋白0.10.5 g/L）“+”表示尿液稀薄乳樣混濁（含蛋白質(zhì)0.52.0 g/L）“+”表示尿液乳濁或有少量絮片存在（含蛋白2.05.0 g/L）“+”表示尿液出現(xiàn)絮狀混濁（含蛋白質(zhì)>5.0 g/L）如加醋酸后混濁消失，是因加醋酸可除去磷酸鹽或碳酸鹽所形成的白色混濁。（6）血清BUN的測定。取三只試管分別標(biāo)號后按下表操作：試劑（ml） 1(空白管) 2（標(biāo)準(zhǔn)管） 3（樣品管）BUN試劑 5.0 5.0 5.0二乙酰單肟試劑 5.0 5.0 5.0蒸餾水 0.1尿素標(biāo)準(zhǔn)液 0.115

49、稀釋的血清 0.1將上述各管充分搖勻，置沸水浴中加熱15 min，用自來水冷卻3 min，在540 nm波長下比色，記錄標(biāo)準(zhǔn)管的光密度讀數(shù)（D標(biāo)）及樣品管的光密度讀數(shù)（D樣）。計算每100 ml血清中BUN的含量（mg）=（D樣/D標(biāo)）×0.002×(5×100/0.1)/0.1=（D樣/D標(biāo)）×10=血清BUN（mg%） (12-1)原理：血清尿素在強酸條件下與二乙酰單肟和氨硫脲煮沸，生成紅色復(fù)合物（二嗪衍生物）（7）藥物處理（8）形態(tài)學(xué)觀察1）將對照及中毒家兔一并處死，取出腎臟，稱重，計算腎重與體重之比。 2）觀察并比較3只家兔腎臟的大體形態(tài)、顏色、

50、光澤、條紋等。3）組織切片示教：于顯微鏡下觀察皮質(zhì)腎小管上皮有無明顯的變化、壞死、脫落；管腔有無蛋白、紅細(xì)胞、管型等。【實驗結(jié)果與分析】將實驗結(jié)果填入下表。 實驗結(jié)果全 血 血 清 尿 腎 PH值PaCO2HCO-3N+Na+K+ BUN尿量蛋白鏡檢解剖大體ABC【思考題】（1）根據(jù)什么判斷急性腎功能不全模型復(fù)制成功？（2）各指標(biāo)變化的機制是什么？附錄 血清BUN測定試劑的配制（1）2.0%二乙酰單肟試劑 稱取二乙酰單肟2 .0g，蒸餾水溶解并加至100.0 ml。（2）BUN試劑 取濃H2SO4 44 .0ml, 85.0% H3PO4 66.0 ml, 溶于100.0 ml蒸餾水中，冷至室

51、溫依次加硫氨脲50.0 mg，溶解后再加硫酸鎘1620.0g（3CdSO4·8H2O）或2.0 g(3CdSO4·6H2O),溶解后加蒸餾水至1.0L，存冰箱，可保存6月。（3）BUN標(biāo)準(zhǔn)儲備液（20.0 mg %） 精確稱取尿素42.8 mg，溶于50 ml蒸餾水中加氯仿6滴，再用蒸餾水稀釋至100.0 ml，可儲存冰箱6個月。（4）BUN標(biāo)準(zhǔn)液（每毫升含20.0微克） 取上述BUN標(biāo)準(zhǔn)儲備液100.0 ml，加蒸餾水至1000.0 ml。參考實驗四 急性左心衰竭實驗?zāi)康?. 復(fù)制急性左心衰的動物模型。2. 觀察心肌梗塞前、后的心率高低以及血液動力學(xué)的改變。實驗原理運用冠

52、狀動脈結(jié)扎術(shù)，結(jié)扎家兔冠狀動脈左室支，造成急性心肌梗塞，誘發(fā)急性左心衰。實驗動物家兔藥品和器材3.0%戊巴比妥鈉溶液、1.0%普魯卡因溶液、3.0%肝素溶液、碳素墨水。手術(shù)器械一套、小拉鉤一付、2ml、5ml、10ml注射器，固定支架、大木夾、大頭針、二導(dǎo)儀。實驗步驟1. 稱重、麻醉，按30.0mg/kg由家兔耳緣靜脈注入3.0%戊巴比妥鈉，仰臥固定。2. 在1%普魯卡因局部麻醉下，作頸部正中切口，分離出兩側(cè)頸總動脈。3. 胸部局部麻醉后，沿胸骨中線自胸節(jié)平線到劍突上切開皮膚，暴露胸骨和肋軟骨，分離胸肌，沿胸骨左緣在肋軟骨部位切斷第2-4肋骨，用小拉鉤輕輕撐開胸腔切口，即可見心包及搏動的心臟，

53、提起并剪開心包，充分暴露心臟和外主動脈。4. 用濕紗布包裹手指，將心臟略向右旋，暴露左心耳和左室大部，在左心耳下緣仔細(xì)找出冠狀動脈左室支的行走位置，用細(xì)園針（0號線）在左心耳下緣0.5cm處繞左室縫穿一線，暫不結(jié)扎。5. 從耳緣靜脈注入3.0%肝素液（2.0mg/kg），經(jīng)左側(cè)頸動脈插管，描記動脈血壓，于劍突部位皮下穿一大頭針，連接二導(dǎo)儀描記呼吸。6. 經(jīng)右側(cè)頸動脈插入充滿3.0%肝素液的左心室導(dǎo)管，經(jīng)傳感器和二道儀記錄左室內(nèi)壓，插管時邊插邊觀察壓力曲線，等出現(xiàn)左室內(nèi)壓力曲線時表示已插入左室、插入導(dǎo)管約8.0cm左右，固定導(dǎo)管。7. 觀察指標(biāo)：心率、動脈血壓、呼吸和強度、左心室內(nèi)壓。8. 實驗過程：手術(shù)完成后，記錄麻醉安靜下指標(biāo)數(shù)值。結(jié)扎冠狀動脈左室支前，觀察各項指標(biāo)變化，每隔2分鐘記錄一次，結(jié)扎左室30分鐘后，若仍無心律紊亂發(fā)生，可在頸部位結(jié)扎或再于室間溝處結(jié)扎前降枝。動物死之后，觀察心臟各部位體積高低，剪下心、肺，在離主動脈走始部位1.5cm處，剪斷主動脈，插入塑料管，將動脈壁和塑料管壁結(jié)扎，并從左房根部結(jié)扎左房，由塑料管向外主動脈注入碳素墨水2.0ml，邊觀察心室壁墨染范圍，估測未墨染面積約占左室游離壁面積百分比。（鄭紅、汪思應(yīng)）病 例 討 論 一患者男性，52歲。十年前因上腹部不適，伴