1、微波輻射溶劑法提取農吉利中總黃酮的工藝研究                               作者：黃曉文，樊輕亞，張煜帆，范華均【摘要】  目的 優化農吉利中總黃酮微波輻射溶劑提取的工藝條件。方法 在單因素試驗的基礎上，以牡荊素作為總黃酮含量的指標，采用正交試驗法優化微波輻射功

2、率、微波輻射時間、提取溫度、提取時間等因素。結果 微波輻射溶劑提取法的最佳提取工藝為：微波輻射功率560 W，微波輻射時間2 min，液固比201，提取溫度70 ，提取時間2.0 h。結論 與常規溶劑回流提取法相比，采用微波輻射處理藥材后再用溶劑進行提取，總黃酮的提取率明顯提高;優選得到的工藝穩定可行。 【關鍵詞】  微波輻射;農吉利;總黃酮;牡荊素;正交設計Abstract:Objective To optimize the experimental conditions of microwaveirradiated reflux extraction of total flavo

3、noids from Crotalaria sessiliflora L. Method Orthogonal test was designed including microwave power,irradiation time,extraction temperature,extraction time based on single factor experiments with vitexin as index constituent of the total flavonoids. Results Optimum conditions were resulted with 20 t

4、imes of methanol extracting for 2 h at 70 after irradiation of the medical materials for 2 min under microwave power 560 W. Conclusions Compared with the conventional solvent reflux extraction,the yield of total flavonoids from Crotalaria sessiliflora L. was improved greatly after the pretreatment o

5、f microwave irradiation of the medicinal materials,which was feasible,easy and reliable.Key words:microwaveirradiation; Crotalaria sessiliflora L; total flavonoids; vitexin; orthogonal design農吉利系豆科植物野百合Crotalaria sessiliflora L.的全草，味甘、淡、平，功能滋陰益腎、清熱解毒、抗癌，主要用于痢疾、瘡癤、耳鳴耳聾、頭暈目眩及多種癌癥的。研究表明，農吉利中含有生物堿、黃酮及氨基

6、酸等主要有效成分，其中黃酮類化合物具有保護心腦血管、利膽保肝、抗癌等多種生理活性1-3。微波輻射法是一種用以提高藥材提取率的藥材輔助處理方法，具有快速高效、節能、節省溶劑等優點4-5。本文在參照6的基礎上，通過微波輻射農吉利藥材，使其細胞破壁，再用溶劑回流法提取其中的黃酮類化合物，并采用正交試驗設計對微波輻射及回流提取的條件進行了優化，旨在確定農吉利中黃酮化合物提取的最佳工藝條件，為進一步研究開發農吉利中總黃酮含量的分布提供基礎。1 儀器與材料UV1101紫外可見分光光度計(上海天美儀器有限公司)，PJ21CAN微波爐(美的公司)，HH6恒溫水浴鍋(江蘇金壇宏華儀器廠)，pHS25數顯pH計(

7、上海精密科學儀器有限公司);RE52CS1旋轉蒸發器(上海亞榮生化儀器廠)。牡荊素對照品(藥品生物制品檢定所，批號111687200501);甲醇(色譜純，Merk公司);其他試劑為分析純，水為蒸餾水。農吉利藥材購自廣州清平中藥材市場、廣西玉林中藥材市場，經廣東藥學院藥用植物與中藥鑒定學教研室鑒定為豆科植物野百合Crotalaria sessiliflora L.的全草。2 方法與結果2. 1 農吉利總黃酮提取液的制備稱取農吉利細粉5.0 g置培養皿中，加入適量水浸潤，攪拌均勻、鋪平，放入微波爐，按實驗要求以不同的輻射功率和輻射時間輻射，再將樣品轉移到圓底燒瓶中，加入甲醇100 mL，在不同溫

8、度下以不同時間進行提取。提取液濾過，旋干，甲醇溶解后轉入10 mL量瓶中，搖勻，定容，即得。2. 2 總黃酮的測定分別精密吸取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL的牡荊素對照品溶液(0.05 mg·mL-1)置10 mL具塞離心管中，加甲醇至刻度，密塞，搖勻。以甲醇作參比溶液，用1 cm比色皿，于328 nm波長處分別測定吸光度，并繪制標準曲線。結果表明：牡荊素的質量濃度在0.520.0 mg·L-1范圍內線性關系良好，回歸方程為A=0.05240C-0.01120，r=0.999 2。取“2. 1”項下提取液作為供試品溶液，依法測定，并總黃酮含量。2. 3 單因素

9、試驗以甲醇為溶劑，考察微波輻射功率、輻射時間，溶劑提取液固比、提取時間、提取溫度對總黃酮得率的影響，結果見圖1。由圖1可知：輻射功率為560 W時，總黃酮得率達到最大值，當功率繼續提高，總黃酮得率反而下降;微波輻射時間在2 min時總黃酮得率達到最大值;總黃酮得率隨著液固比的增大而升高，但變化不明顯，超過201后趨于穩定，從節約成本角度考慮，最佳液固比為201;在70 時農吉利總黃酮得率達到最高，再進一步提高溫度，其得率有所下降;提取時間以1.52.0 h 為佳。1         2. 4 正交試驗設計優選最佳工

10、藝在單因素試驗基礎上，選取對總黃酮得率影響較大的4個因素：提取溫度、提取時間、微波輻射功率、輻射時間作為考察因素，選用L9(34)進行正交試驗，確定農吉利總黃酮提取得最佳工藝。結果見表1、表2。根據極差分析和方差分析結果可知：4個因素對總黃酮提取率的影響程度由大到小依次為：提取溫度>微波輻射功率>提取時間>微波輻射時間，優化工藝條件是A2B2C1D2，即：微波輻射功率為560 W，輻射時間為2 min，提取溫度70 ，提取時間2.0 h。表1 因素水平表表2 L9(34) 正交試驗方差分析表2. 5 驗證實驗按照上述優化工藝進行了3次平行驗證，總黃酮提取得率在6.476.73

11、 mg·g-1之間，RSD為2.0%，結果穩定，表明該工藝合理可行。3 討 論3.1 采用常規的直接溶劑回流法在相同的條件下進行對比，結果表明：經過微波輻射處理后的藥材總黃酮得率明顯提高(山東、廣西2個產地藥材的提取率分別高出了48%和23%)。3.2 采用微波輻射農吉利藥材，可使細胞破壁，再以甲醇為溶劑回流提取農吉利中的總黃酮，工藝方法合理，且設備簡單、處理方式簡便，可為農吉利中總黃酮提取工藝的改進提供依據。【】  1 HUN Sung Yoo，JI Suk Lee，CHUI Young Kim，et al.Flavonoids of Crotalaria sessiliflora J.Arch Pharm Res，2004，27(5)：544-546.2 ABDUL MunIM，OSAMU Negishi，TETSUO Ozawa.Antioxidative compounds from Crotalaria sessifloraJ. Biosci Biotechnol Biochem,2003，67(2)：410-414.3 靖永謙，李宏善，陳瑞華.農吉利中氨基酸成分的研究J.中藥通報，1987，12(7)：41-4