1、淺論枸杞對酒精性肝損傷大鼠保護作用的實驗研究         【摘要】  目的 觀察寧夏枸杞對酒精性肝損傷大鼠的保護作用。方法 選擇成年雄性SD大鼠60只，體重300340g，隨機分為四組：空白對照組每天給予蒸餾水灌胃，喂飼基礎飼料；其余三組按10mL/(kg·bw)劑量給予56度白酒灌胃，酒精模型組喂飼基礎飼料；低劑量枸杞組：喂飼基礎飼料枸杞(50g/kg)；高劑量枸杞組：喂飼基礎飼料枸杞(100g/kg)，喂飼3周，實驗期末，空腹12h，20%烏拉坦麻醉后，心臟取血制備血清及10% 肝組織勻

2、漿，測定谷丙轉氨酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)、丙二醛(MDA)、總抗氧化能力(T-AOC)，并取肝組織病理切片檢查。結果 與酒精模型組比較，枸杞組肝臟SOD、CAT 活性均高于酒精模型組，差別有統計學意義(P0.01)；枸杞組血清ALT活性低于酒精模型組，差別有統計學意義(P0.01)；枸杞組血清、肝臟中MDA含量均低于酒精模型組，差別有統計學意義(P0.05);肝組織病理結果提示寧夏枸杞對酒精性肝損傷大鼠具有保護作用。結論 寧夏枸杞對酒精性肝損傷大鼠具有抗脂質過氧化及保護肝細胞的作用。 【關鍵詞】  枸杞 酒精性肝損傷大鼠 抗脂質過氧化 寧夏Abst

3、ract： Objective  To explore the protection effects of Lycium  barbarrum(LB) on alcoholic liver injury in rats. Methods  Sixty male rats  weighed 300340g were randomly divided into four groups.The blank group were given distilled water and basic animal feeds. The other three group

4、s were given 56 degrees spirit by 10ml/kg·bw. The alcohol model rats were fed with basic animal feeds. The low dose group rats were fed with basic animal feeds and LB 50g/kg. The high dose group rats were fed with basic animal feeds and LB 100g/kg. After three weeks, we took serum from heart an

5、d liver organization to detect the ALT, SOD, CAT, MDA, TAOC and  check the pathological slice of liver organization. Results  Compared with the alcohol model group,LB groups activity of SOD, CAT were significantly higher. The activity of serum ALT in LB group were significantly lower than

6、that in the alcohol model group (P0.01). The concentration of MDA in the alcohol model group were  significantly lower than that in  the alcohol model group (P0.05). The pathological results showed that LB had certain protection effect on  alcohol liver injury in rats. Conclusion 

7、; LB has lipid peroxidation and protection effects for rats with alcohol liver injury.Key words:Lycium barbarrum;rats with alcoholic liver injury; lipid peroxidation  近年來,我國人均酒精消耗量顯著增長,酒精性肝病(Alcoholic liver disease，ALD)的發病率也呈逐年增加趨勢,對酒精性肝病的研究仍停留在臨床治療方面。從營養學角度來講，尋找酒精性肝損傷的天然保護物質，采取有效的干預措施，具有重要的意義。

8、寧夏枸杞富含多種營養素和生物活性物質，且具有抗氧化、降血脂及免疫調節等作用1。然而，目前國內尚未見寧夏枸杞(Lycium barbarrum，LB)對酒精性肝損傷保護作用的研究報道，本研究建立了酒精性肝損傷動物模型，觀察寧夏枸杞對酒精性肝損傷的保護作用，為進一步開發利用寧夏枸杞提供科學依據。1  材料與方法1.1  受試物   寧夏中寧枸杞、白酒(56度紅星二鍋頭，北京釀酒總廠生產)。1.2  實驗動物   成年雄性SD大鼠，由寧夏醫學院實驗動物中心提供。1.3  實驗方法   取成年雄性SD大

9、鼠60只，體重300340g,適應性飼養3d后，隨機分為4組(空白對照組、酒精模型組、低劑量枸杞組、高劑量枸杞組)，每組15只；空白對照組每天給予蒸餾水灌胃，喂飼基礎飼料;其余三組大鼠按10mL/(kg·bw)劑量給予56度白酒灌胃，其中酒精模型組大鼠喂飼基礎飼料，低劑量枸杞組：喂飼基礎飼料枸杞(50g/kg飼料);高劑量枸杞組：喂飼基礎飼料枸杞(100g/kg飼料)，喂飼3周；實驗期末，大鼠空腹12h，用20%烏拉坦麻醉后，取心臟血及肝臟，制備血清及10%肝勻漿,檢測血清和肝組織谷丙轉氨酶(ALT)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、過氧化氫酶(CAT)、總抗氧化能力 (

10、T-AOC)等指標，并取肝組織作病理切片檢查。1.4  測定指標及方法   用賴氏法檢測谷丙轉氨酶(ALT);羥胺法檢測超氧化物歧化酶(SOD)；硫代巴比妥酸比色法檢測丙二醛(MDA)；鉬酸胺法檢測過氧化氫酶(CAT)；比色法檢測總抗氧化能力 (T-AOC);考馬斯亮藍法檢測肝臟組織蛋白。   (上述檢測指標均采用試劑盒，由南京建成生物工程研究所提供)1.5  肝臟病理學檢查   每組隨機取5只大鼠，取肝左葉,10%甲醛固定，常規制作石蠟切片,進行HE染色。1.6  統計學方法   采

11、用SPSS 11.5統計軟件進行分析，結果以±s表示，用方差分析方法進行統計學檢驗。2  結果2.1  肝組織病理切片結果   空白對照組：肝細胞有正常的多邊形細胞形狀和結構，小葉結構清晰，匯管區未見炎細胞浸潤(圖1，見封4)。酒精組:肝細胞顯示程度不同的嗜酸性顆粒變性，有大小不等的灶狀壞死(圖2，見封4)，大部分肝細胞胞漿內見有多量微脂滴，可見融合性大脂滴(脂肪變性)及酒精小體，匯管區有較多量炎細胞浸潤(圖3，見封4)。枸杞高劑量組:肝細胞胞漿疏松，可找到不典型的酒精小體，中等量微脂滴，匯管區血管擴張，少量淋巴細胞浸潤(圖4，見封4)。枸杞低

12、劑量組:肝細胞嗜酸性顆粒變性，核周可找到不規則的酒精小體，微脂滴多見。匯管區血管輕度充血，少量炎細胞浸潤(圖5，見封4)。2.2  寧夏枸杞對大鼠血清ALT、CAT、SOD、MDA、T-AOC的影響 (表1)表1  枸杞對大鼠血清中ALT、CAT、SOD、MDA、T-AOC的影響(略)   模型組大鼠血清谷丙轉氨酶(ALT)活性高于空白對照組，差別有統計學意義(P0.01)，枸杞組大鼠血清ALT活性均低于模型組，差別有統計學意義(P0.01);與酒精模型組相比，枸杞組血清CAT活性有升高趨勢，但是差別無統計學意義;酒精模型組血清SOD低于空白對照組，差別

13、無統計學意義；枸杞高劑量組和枸杞低劑量組血清SOD活性高于酒精模型組，差別無統計學意義；酒精模型組大鼠血清MDA含量高于空白對照組，差別有統計學意義(P0.01)；枸杞高劑量和低劑量組大鼠血清中MDA含量低于酒精模型組，差別有統計學意義(P0.05)；酒精模型組大鼠血清中總抗氧化能力低于空白對照組，差別有統計學意義(P0.01)；枸杞高劑量組、低劑量組大鼠肝臟中總抗氧化能力均高于模型組，差別無統計學意義。         2.3  寧夏枸杞對大鼠肝臟中CAT、SOD、MDA、T-AOC的影響 &

14、#160; 由表2可知，與空白對照組相比,酒精模型組肝臟CAT活性明顯低于空白對照組，差別有統計學意義(P0.01)；枸杞高劑量組肝臟CAT活性高于模型組，差別有統計學意義(P0.05);酒精模型組肝臟SOD活性低于空白對照組，差別有統計學意義(P0.01)，枸杞高劑量組和枸杞低劑量組肝臟SOD活性均高于酒精模型組，差別有統計學意義(P0.01); 酒精模型組肝臟MDA含量高于空白對照組，差別有統計學意義(P0.01)；枸杞高劑量組大鼠肝臟中MDA含量低于模型組，差別無統計學意義；枸杞低劑量組大鼠肝臟中MDA含量低于模型組，差別有統計學意義(P0.05);枸杞高劑量組、低劑量組大鼠肝臟中總抗氧

15、化能力均高于模型組，差別無統計學意義。表2  枸杞對大鼠肝臟中CAT、SOD、MDA、T-AOC的影響(略)3  討論   本實驗采用56度白酒10mL/(kg·bw)連續灌胃3周,結果顯示酒精模型組大鼠血清中ALT活性明顯增高;肝組織中MDA升高，SOD、CAT降低;肝組織病理結果顯示酒精模型組可見大小不等的灶狀壞死,大部分肝細胞胞漿內有多量微脂滴，可見融合性大脂滴(脂肪變性)及酒精小體，匯管區有較多量炎細胞浸潤。肝臟病理學改變與李舒丹等報道相一致2，提示酒精模型組既有酒精性肝炎的存在,也有酒精性脂肪肝的表現，表明酒精性肝損傷動物模型建立成功

16、。   乙醇在其代謝過程中可通過多種途徑產生自由基,自由基能與細胞大分子反應,導致脂質過氧化,損傷肝細胞,引起細胞結構和功能的破壞2。SOD可以催化超氧化物自由基,并有效地清除自由基，CAT與SOD協同作用，清除由歧化反應生成的過氧化氫4。長期飲酒,使SOD、CAT活力下降,不能有效地清除自由基,使活性氧水平發生改變，可促發脂質過氧化反應，導致肝細胞損傷5。   MDA是脂質過氧化物分解的終末產物,可損傷組織細胞的膜性結構，影響膜的功能，從而導致組織細胞功能的損傷6。MDA在組織中的含量可直接反應機體脂質過氧化的速率和強度。因此,SOD、CAT活力的降低

17、和MDA含量的升高可以間接地反應肝細胞脂質過氧化損害的程度。   肝組織病理結果提示:枸杞組肝損傷程度較模型組明顯減輕，表明寧夏枸杞對酒精性肝損傷大鼠具有保護作用；生化結果顯示：與酒精模型組比較，枸杞組血清CAT、SOD活性均高于模型組；ALT活性低于模型組； 血清、肝臟中MDA含量均低于模型組； 枸杞組總抗氧化能力高于模型組，表明寧夏枸杞能有效地阻止酒精所致肝損傷脂質過氧化物的終產物MDA的升高,具有抗脂質過氧化及保護肝細胞的作用。同時發現枸杞高劑量組對肝損傷的保護作用優于枸杞低劑量組。枸杞提高SOD、CAT活性可能是其減輕鼠肝脂質過氧化損傷的機制之一。由于枸杞富含黃酮類、胡蘿卜素、維生素E及硒等抗氧化活性成分7，故寧夏枸杞可有效地清除自由基，阻止酒精誘發的脂質過氧化損傷。   綜上所述,寧夏枸杞對酒精性肝損傷大鼠具有明顯的保護作用，其保護機制可能是寧夏枸杞富含抗氧化物質，能提高機體SOD、CAT活性，降低MDA的含量,從而減輕自由基引發的肝脂質過氧化損傷。寧夏枸杞資源豐富，具有良好的開發和應用前景。【參考文獻】  1羅瓊，閻俊.枸杞及其多糖對家兔血脂的影響J.營養學報,1997,19(4):415-418.2李舒丹，厲有名,虞朝輝.大鼠慢性酒精性肝損傷模型的建立J.浙江醫學,2002,24(9):524-530.3