1、 微生物學試驗報告 試驗名稱：土壤中微生物的分別與純化 課程名稱 環境微生物學試驗 學 院 環境科學與工程學院 專業班級 2011級環境科學（1）班 學 號 3111007364 姓 名 劉迪鴻 聯系方式2013年 12 月 10 日試驗報告土壤中微生物的分別與純化劉迪鴻（廣東工業高校11級環科（1）班）摘要：各種微生物生長所需條件存在差異，依據需要配制不同的培育基可以得到只含目標菌株的純培育。關鍵詞：選擇培育基，分別，純化一、 試驗目的與要求1. 明確培育基的配制原理，并通過對微生物培育基的配制，把握配制培育基的一般方法和步驟。2. 把握依據需要選取不同的環境以找到

2、目標菌株的基本方法，學習分別純化微生物的基本操作技術，進一步嫻熟和把握微生物無菌操作技術，把握微生物培育方法以及接種方法。二、試驗方案1. 試驗原理培育基是人工的將多種物質按各種微生物生長的需要配制而成的一種混合養分基質，用以培育或分別各種微生物，因此，培育基質應當有微生物所能利用的養分成分（包括碳源，氮源，能源，無機鹽，生長因素。）和水，依據微生物的種類和試驗目的地不同，培育基也有不同的種類和配置。在土壤，水，空氣及動、植物體中，不同種類的微生物絕大多數都是混雜生活在一起，當我們期望獲得某一種微生物時，就必需從混雜的微生物類群中分理它，以得到只含有這一種微生物的純培育，這種獲得純培育的方法稱

3、為微生物的分別與純化。為了獲得某種微生物的純培育，一般是依據該微生物對養分，酸堿度，氧等條件的要求不同，而供應它適宜的培育條件，或加入某種抑制劑造成只利于此菌生長而抑制其他菌生長的環境，從而淘汰其他一些不需要的微生物，再用稀釋涂布平板法或稀釋混合平板法或平板劃線分別法等分別純化微生物，直至得到純菌株。2. 試驗材料1) 培育基與試劑牛肉膏蛋白胨培育基配方：牛肉膏2.0g，蛋白胨4.0g，氫氧化鈉2.0g，瓊脂68g，水400mL。高氏一號培育基配方：可溶性淀粉4g，硝酸鉀0.4g，磷酸氫二鉀0.2g，硫酸鎂0.2g，氯化鈉0.2g，硫酸亞鐵0.004g，瓊脂68g，水400mL。馬鈴薯蔗糖培育

4、基配方：馬鈴薯80g，蔗糖8g，瓊脂68g，水400mL。馬鈴薯葡萄糖培育基配方：馬鈴薯80g，葡萄糖8g，瓊脂68g，水400mL。2) 儀器以及其他用品高壓滅菌彩。高壓滅菌鍋，超凈工作臺，培育皿，移液器，250毫升錐形瓶250毫升燒杯。均玻璃珠，接種環，就金丹，顯微鏡，稱量紙等。3. 試驗方法1) 試驗流程圖培育基的制備滅菌微生物的分別土壤取樣2) 試驗步驟A. 土壤取樣廣工正門對面山坡，即取即用。B. 培育基的配制C. 滅菌將配制好的培育基，用報紙包扎好的培育皿，用橡膠塞封好的盛有9mL無菌水的試管，槍頭盒裝有45mL蒸餾水與玻璃珠的錐形瓶，玻璃珠放到高壓滅菌鍋進行高溫蒸汽滅菌。D. 微

5、生物的分別a) 倒平板 將牛肉膏蛋白胨培育基，高氏一號瓊脂培育基，馬鈴薯蔗糖瓊脂培育基，馬鈴薯葡萄糖瓊脂培育基溶化。待冷卻至55至60時，在高氏一號培育基中加入1mL的0.5%重鉻酸鉀，在馬鈴薯蔗糖培育基中加入1mL的1%的鏈霉素，然后分別倒平板。b) 制備土壤稀釋液 稱取土樣5g，放入盛有45mL無菌水并帶有玻璃珠的燒瓶中。震蕩搖擺約二格外鐘，使土樣與水充分混合，將菌分散，配制成10-1土壤溶液，用一支1mL無菌吸管從中吸取1mL土壤懸液注入盛有無菌水的試管中，吹吸三次，使充分混勻，然后再用一支無菌吸管從今試管中吸取1mL土壤懸液注入另一盛有9mL無菌水的試管中，以此類推制成10-2，10-

6、3，10-4,10-5,10-6各種稀釋度的土壤溶液。c) 分別微生物操作步驟：u 分別細菌i. 涂布 將牛肉膏蛋白胨兩個平板底面分別用記號筆寫上10-5和10-6兩種稀釋度，然后用兩支1mL無菌吸管分別由10-5和10-6兩管土壤稀釋液中各吸取200uL對號放入已寫好稀釋度的平板中，加入八個滅菌的玻璃珠輕輕晃動，涂布均勻，然后將玻璃珠倒出。ii. 培育 倒置于37溫室中培育12天u 分別放線菌i. 涂布 將高氏一號兩個平板底面分別用記號筆寫上10-3和10-4兩種稀釋度，然后用兩支1mL無菌吸管分別由10-35和10-4兩管土壤稀釋液中各吸取200uL對號放入已寫好稀釋度的平板中，加入八個滅

7、菌的玻璃珠輕輕晃動，涂布均勻，然后將玻璃珠倒出。ii. 培育 倒置于37溫室中培育35天u 分別酵母菌與霉菌(如圖1)i. 涂布 各取兩個葡萄糖與蔗糖平板底面各自用記號筆寫上葡10-4、葡10-5和蔗10-4和蔗10-5兩種稀釋度，然后用1mL無菌吸管分別由10-4和10-5兩管土壤稀釋液中各吸取200uL對號放入已寫好稀釋度的平板中，加入八個滅菌的玻璃珠輕輕晃動，涂布均勻，然后將玻璃珠倒出。ii. 培育 倒置于37溫室中培育35天E. 挑菌劃線分別 使用接種環從待純化的菌落中蘸取少量菌種，細菌接種在牛肉膏蛋白胨培育基上面，霉菌和酵母菌接種在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培育基與馬鈴薯蔗糖瓊脂培育基上、放線

8、菌接種在高氏一號培育基上進行劃線分別.F. 保存菌種圖1.分別微生物流程示意圖三、試驗結果在你所試驗的四種培育基平板上，長出的菌落分屬于那個類群？簡述它們的菌落形態特征，并將菌落形態特征填入表1。答：高氏一號培育基上的菌落分屬于放線菌，其菌落形態特征菌落背面有同心圓形紋路，菌落較小。馬鈴薯葡萄糖培育基和馬鈴薯蔗糖培育基上的菌落是霉菌和酵母菌，其菌落形態特征：酵母菌：菌落為淡黃色，光滑，半透亮，比細菌菌落大。霉菌：菌落大型，肉眼可見很多毛狀物。牛肉膏蛋白胨培育基上的菌落為細菌，其菌落形態為較小的圓形菌落，顆粒狀。表1.菌落特征表 圖1.純化的細菌 圖2. 純化的放線菌 圖3. 純化的酵母菌 圖4

9、. 純化的霉菌四、問題與爭辯1. 如何確定平板上某單個菌落是否為純培育？請寫出試驗的主要步驟。答：觀看菌落形態 一個平板上的單個菌落形態全都，基本可以確定是純培育。革蘭氏染色法測定 使用接種環從該菌落中蘸取少量菌種，然后進行革蘭氏染色，顯微鏡下觀看是否為純菌。劃線分別 使用接種環從該菌落中蘸取少量菌種，針對不同的細菌接種在不同的培育基上進行劃線分別。如，細菌接種在牛肉膏蛋白胨培育基上面，霉菌和酵母菌接種在馬鈴薯葡萄糖瓊脂培育基與馬鈴薯蔗糖瓊脂培育基上、放線菌接種在高氏一號培育基上進行劃線分別。然后放在適宜的條件下進行培育，看是否消滅雜菌，若沒有，則確定為純培育。2. 假如要分別得到酵母菌，在什

10、么地方取樣品為宜？并說明理由。答：酵母是單細胞微生物，它屬于高等微生物的真菌類，簡潔生長，空氣中、土壤中、水中、動物體內都存在酵母。有氧氣或者無氧氣都能生存。要分別得到酵母菌，則應選擇酵母菌含量較多而其他菌種較少的樣品，雖然酵母菌在自然界分布廣泛，但主要還是生長在偏酸性的潮濕的含糖環境中。而腐爛的水果酵母菌的含量是比較多的，因此可以考慮從腐爛的水果中取樣，如腐爛的葡萄、蘋果。酵母在有氧和無氧環境下都能生存，屬于兼性厭氧菌，要獲得純度比較高的酵母，還可以從酒糟里獵取。五、心得體會把握依據需要選取不同的環境以找到目標菌株的基本方法，學習分別純化微生物的基本操作技術，進一步嫻熟和把握微生物無菌操作技術，把握微生物培育方法以及接種方法。之前的微生物試驗就有配制過培育基，而本次試驗，讓我對培育基的配制學問有了更大的提升，對培育基的配制原理有了更深的了解。通過對微生物培育基的配制，還讓我把握了配制培育基的一般方法和步驟。本次試驗的培育基，其作用是起到選擇培育的目的，依據需要選取不同的環境可以掛念我們找到目標菌株。試驗過程中，我還學會來分別純化微生物