1、精選優質文檔-傾情為你奉上生物化學實驗知識點整理實驗一 還原糖的測定、實驗二 糧食中總糖含量的測定1.還原糖測定的原理3,5-二硝基水楊酸與還原糖溶液共熱后被還原成棕色的氨基化合物,在550nm處測定光的吸收增加量，得出該溶液的濃度，從而計算得到還原糖的含量2.總糖測定原理多糖為非還原糖，可用酸將多糖和寡糖水解成具有還原性的單糖，在利用還原糖的性質進行測定，這樣就可以分別求出總糖和還原糖的含量3.電子天平使用4.冷凝回流的作用：使HCl冷凝回流至錐形瓶中，防止HCl揮發，從而降低HCl的濃度。5.多糖水解方法：加酸進行水解6.怎樣檢驗淀粉都已經水解：加入1-2滴碘液，如果立即變藍則說明沒有完全

2、水解，反之，則說明已經完全水解。7.各支試管中溶液的濃度計算8.NaOH用量： 9.不能中途換分光光度計,因為不同的分光光度計的光源發光強度不同10.分光光度計的原理：在通常情況下，原子處于基態，當通過基態原子的某輻射線所具有的能量（或頻率）恰好符合該原子從基態躍遷到激發態所需的能量（或頻率）時，該基態原子就會從入射輻射中吸收能量，產生原子吸收光譜。原子的能級是量子化的，所以原子對不同頻率輻射的吸收也是有選擇的。這種選擇吸收的定量關系服從式。實驗證明，在一定濃度范圍內，物質的吸光度A與吸光樣品的濃度c及厚度L的乘積成正比，這就是光的吸收定律，也稱為郎伯-比爾定律分光光度計就是以郎伯比爾定律為原

3、理，來測定濃度11.為什么要水解多糖才能用DNS因為DNS只能與還原糖溶液在加熱的條件下反應生成棕紅色的氨基化合物，不能與沒有還原性的多糖反應。12.為什么要乘以0.9因為淀粉的水解方程式為，只有用還原糖的含量乘以0.9才能得到多糖的含量。13.為什么要中和后再測？因為DNS要在中性或微堿性的環境下與葡萄糖反應實驗三 蛋白質的水解和紙色譜法分離氨基酸、實驗四 考馬斯亮藍法測定蛋白質濃度1.紙色譜分離氨基酸分離原理由于各氨基酸在固定相（水）和流動相（有機溶劑）中的分配系數不同，從而移動速度不同，經過一段時間后，不同的氨基酸將存在于不同的部位，達到分離的目的。2.天然氨基酸為L型3.酸式水解的優點

4、是：是保持氨基酸的旋光性不變，原來是L型，水解后還是L型，由于甘氨酸所有的R基團是氫原子，所以它不是L型5.酵母粉水解后絕對不含有色氨酸6.根據分離原理不同分離色譜可分為：有吸附色譜、離子交換色譜、分配色譜等7.不同物質的Rf值不同，同種物質不同條件的Rf值不同吹分時不能吹的過熱和過干，與濾紙結合太緊密。流動相帶走不是很容易。容易出現拖尾8.噴完茚三酮后不能直接放入烘箱，先自然晾干再放入烘箱內，茚三酮乙醇高溫易著火，烘箱的金屬條過熱也會顯色。會出現拖尾或斑點狀，樣品顯色后成條狀，；酵母分解后不知有5個斑點，會有很多種，兩種之間可能還有其它的氨基酸，9.茚三酮的反應方程式10.考馬斯亮藍測定蛋白

5、質濃度 :范德瓦爾鍵通過分子間靜電吸引力結合11.考馬斯亮藍分為G-250（反應速度快，不易洗脫，用定量測定）、R-250反應速度慢，易洗脫，通常用于定性測定12.考G-250與蛋白質結合后穩定時間為1h左右13.蛋白質的鹽析反應蛋白質中加入某些飽和鹽，蛋白質溶液中濃度下降，蛋白質析出14.蛋清：NaCl溶液=1：9 10%卵清蛋白實驗五 血清蛋白的醋酸纖維薄膜電泳、實驗六 維生素C的定量測定1.醋酸纖維薄膜電泳的原理、影響遷移的因素血清中各種蛋白質離子在電場的作用下，向著與其電性相反的電極移動。由于各種蛋白質的等電點不同，從而在同一pH環境中所帶電荷量有所不同，同時分子大小形狀各有差異，所以

6、在統一電場中泳動速度不同。一般來說，所帶的電荷多且顆粒小的，泳動速度快，反之則慢。2.影響電泳的因素：（1）粒子本身 （電荷量、粒子大小、形狀）（2）黏度 （3）電場（4）電滲（5）支持物的篩口3.醋酸纖維薄膜的優點具有均一的泡沫樣結構，厚度僅120微米，有強滲透性，對分子移動無阻力，作為區帶電泳的支持物進行蛋白質電泳有簡便、快速、樣品用量少，應用范圍廣，分離清晰，沒有吸附現象等優點。4.pH8.6中帶負電，往陽極移動5.五條帶的順序：血清蛋白、球蛋白、球蛋白、球蛋白、球蛋白6.層析時，粗糙面朝上，電泳時粗糙面朝下，記號做在光澤面7.實驗成敗的關鍵P43-P458測定VC的原理：還原型抗壞血酸

7、能還原2，6-二氯酚靛酚染料，本身則氧化為脫氫型。在酸性溶液中，2，6-二氯酚靛酚呈紅色，還原后變為無色。因此，當染料滴定含有維生素C的酸性溶液時，維生素C尚未全部被氧化前，則滴下的染料立即變成無色。一旦溶液中的維生素C全部被氧化，則滴下的染料立即使溶液變成粉紅色。9.1%草酸有何作用（1）提供一個顯色環境（2）保護維生素C（3）作空白對照實驗七 蛋白質總氮含量的測定、實驗八 正交法測定幾種因素對酶活性的影響1.凱氏定氮法的原理：含氮有機化合物在濃硫酸中消化生成硫酸銨，再在凱氏定氮儀中加入強堿堿化消化液使硫酸銨分解放出氨氣。用水蒸氣蒸餾法將氨蒸入過量標準無機酸溶液中，然后用標準酸溶液進行滴定，準確測定按量，從而計算出含氮量。2.用此方法通常會高于實際含量？3.H3BO3指示劑在pH<5.4時為紫紅，pH>5.4時為綠色4.CuSO4催化反應K2SO4與NaSO4提高反應沸點5.凱氏定氮法的優點：可以測定固液試樣6.怎樣檢測蒸餾器已洗凈（P53）7.為什么小漏斗內要作保留一點30%NaOHNaOH加進后會立即反應放出氨氣，主要作水封8.正交法實驗原理利用正交表來