1、 人感染人感染H7N9禽流感病毒的病原學禽流感病毒的病原學 人感染人感染H7N9禽流感監測病例定義禽流感監測病例定義 標本采集種類標本采集種類 標本采集主要器材和試劑標本采集主要器材和試劑 標本采集方法標本采集方法 標本的保存、運送標本的保存、運送 標本采集要求標本采集要求 禽流感病毒屬正粘病毒科甲型流感病毒屬。禽甲型流感病毒顆粒呈多形性，其中球形直徑80120nm，有囊膜。基因組為分節段單股負鏈RNA。 依據其外膜血凝素（H）和神經氨酸酶（N）蛋白抗原性不同，目前可分為16個H亞型（H1H16）和9個N亞型（N1N9）。 禽甲型流感病毒除感染禽外，還可感染人、豬、馬、水貂和海洋哺乳動物。可感

2、染人的禽流感病毒亞型為H5N1、H9N2、H7N7、H7N2、H7N3。 此次報道的為全球首次發現人感染H7N9禽流感病毒。該病毒為H7N9和H9N2重配的新型病毒，其內部基因來自于H9N2禽流感病毒，基因序列分析表明為禽源病毒。 同時具備以下4項條件1、發熱(腋下體溫38)；2、具有肺炎的影像學特征；3、發病早期白細胞總數降低或正常,或淋巴細胞分類計數減少；4、不能從臨床或實驗室角度診斷為常見病原所致肺炎。 除第除第4條不同于不明原因肺炎病例定義，以上三條均相符。條不同于不明原因肺炎病例定義，以上三條均相符。不不明原因肺炎第明原因肺炎第4 條為：經規范抗菌藥物治療條為：經規范抗菌藥物治療35

3、天，病情無天，病情無明顯改善或呈進行性加重。明顯改善或呈進行性加重。 醫療機構應當及時采集病例相關臨床樣本。1、上呼吸道標本上呼吸道標本（包括咽拭子、鼻拭子、鼻咽抽取物、咽漱液和鼻洗液）；2、下呼吸道標本下呼吸道標本（如氣管吸取物、肺洗液、肺組織標本）3、血清標本血清標本（發病7天內急性期血清以及間隔2-4周的恢復期血清）；4、尸檢標本尸檢標本（如病人死亡，應當盡可能說服家屬同意尸檢，及時進行尸體解剖，采集肺組織、氣管、支氣管等組織標本）；5、應當盡量采集病例發病早期發病早期的呼吸道標本（尤其是下呼吸道標本）。”發燒72小時標本” 1、拭子：WHO及美國CDC規定，鼻煙拭子采集只能用塑料桿的滌

4、綸或人造棉拭子（如常用的聚酯纖維拭子），不能用藻酸鈣拭子或木桿拭子，因可能使某些病毒失活或抑制PCR；脫脂棉含有熒光物質，影響實時應熒光定量PCR結果。 2、壓舌板 3、3ml Hanks液螺口采樣管 4、封口袋 5、冷藏運輸包 6、油性標記筆或標簽紙 7、樣品登記表 8、真空采血管 9、個人防護裝備 鼻咽拭子采樣是流感病原學監測中的一個重要環節,操作簡單,但在流感監測工作中卻極為重要。標本采集的時間、位置及質量對能否分離到病毒或提取到有活性的RNA至關重要，而標本保存與運輸不當，也會影響病毒的分離。為提高病毒的分離率，在用于病毒分離樣品的采集數量、類型和地點方面，實驗室技術人員應與流行病學人

5、員達成共識。一般來說，用于病毒分離的樣品應與血樣同時采集，以便進行血清學診斷。 1 鼻拭子 采集標本時，囑咐病人頭部盡量保持不動，將聚酯纖維頭拭子輕輕轉動緩緩插入病人鼻孔至顎部(注意：不可太用力，但要盡量深，通常5cm以上)，停留數秒吸取分泌物，輕輕旋轉取出拭子，置采樣管折斷手接觸部位的塑料柄，使拭子浸泡至采樣液中，旋緊管蓋。 2 咽拭子 囑咐病人放松，發“啊”聲， 立即用壓舌板壓住病人舌前23，聚酯纖維頭拭子適度用力多次抹擦懸雍垂（腭垂或小舌，見圖）后部咽后壁及雙側扁桃體，避免觸及舌部，取出后置采樣管，折斷手接觸部位的塑料柄，使拭子浸泡至采樣液中，旋緊管蓋。 3、切記：、切記：咽拭子與鼻拭子

6、采到一個咽拭子與鼻拭子采到一個Hanks管（管（23ml ）。如商品化采樣管液）。如商品化采樣管液體過多，采樣前倒掉一部分，以提高病毒體過多，采樣前倒掉一部分，以提高病毒濃度及陽性率。聚丙烯拭子采樣前不需用濃度及陽性率。聚丙烯拭子采樣前不需用生理鹽水濕潤，以吸收更多的分泌物。生理鹽水濕潤，以吸收更多的分泌物。 4、漱口液標本：在病人發熱72小時內盡早采集。先讓病人咳嗽幾聲，將5-10ml無菌生理鹽水（不含青霉素）倒入病人口中，讓病人頭向后傾并發出“噢”的聲音，反復幾次。將漱口液吐入50ml帶墊圈的螺口塑料離心管中，旋緊管蓋。 5、尸檢組織標本：病人死亡后應盡早進行解剖，采集肺、氣管、腎、脾、肝

7、、心臟、腦、血凝塊等組織和淋巴結等重要器官標本。每一采集部位分別使用不同消毒器械；每種組織應多部位取材，每部位應取2050g，淋巴結2個，分別置于50ml帶墊圈的無菌螺口塑料管中，立即置于-70以下保存或冷藏（48）送至有關實驗室。尸檢組織標本對于病原學研究非常重要，應盡量多采集。 標識標識：油性記號筆或標簽紙在采樣管上標記標本名稱、姓名、編號等； 包裝包裝：符合符合“生物安全相關規定生物安全相關規定” 所采集的標本首先用封口袋密封，周圍最好包裹吸水緩沖材料，用第二個封口袋再次密封，放入帶冰排的標本運輸箱； 填寫填寫“不明原因肺炎病例/聚集性病例標本送檢表”，送檢表用另一個封口袋密封，不要與標本放到一起； 于24 小時內送當地國家流感監測網絡實驗室檢測，最遲不超過48小時，如果有-70冰箱，可長期保存。 無菌操作：采樣人員須以無菌操作采集各類標本。采集標本所使用的容器、采樣液等均應無菌。 標識：每份標本必須標明標本編號、標本種類及采集日期。采集單位應指定專人負責標本信息的登記、收集和管理，詳細記錄信息，并認真填寫“不明原因肺炎病例/聚集性病例標本送檢表”。不明原因肺炎病例標本送檢表.doc 所有標本的收集、運輸和保藏都應裝在有螺旋蓋的塑料管中，以防止開、關標