1、不同劑量烏司他丁對體外循環患者中性粒細胞核因子-B活性的影響    【摘要】  【關鍵詞】  烏司他丁; 體外循環; 中性粒細胞; 核因子-BEffects of Different Doses of Ulinastatin on NF-B Activity ofPolymorphonuclear Neutrophils in Patientsundergoing&#

2、160;Cardiopulmonary BypassLI Jian-li,ZHAO Yan-li,HAN Guang-yan,Zhao Zhi-yong,YAN Zhi-jun,LI Xiong-long(The Hebei General Hospital, Hebei Shijiazhuang 050051，China)Abstract: OBJECTIVE To study the effects o

3、f different doses of ulinastatin on the NF-B activity of polymorphonuclear neutrophils in patients with cardiopulmonary bypass(CPB) .METHODS 60 congenital tetralogy of Fallot patients&#

4、160;were randomly divided into three groups of 20 each,ulinastatin (U1) group:10 000U/kg,ulinastatin (U2) group:20 000U/kg,control (C) group used equal normal saline.3 milliliter radial 

5、;artery blood was collected after induction of anesthesia(T1), 30 min after start of CPB(T2),30 min(T3),4 hours(T4) and 24 hours(T5) after end of CPB. PMN NF-B activity w

6、as tested in ELISA.RESULTS The value of PMN NF-B activity showed a progressive rise after the begin of CPB，the climax value of PMN NF-B activity was got T3，then 

7、;it declined. But PMN NF-B activity at T5 was still higher than that T1 . The PMN NF-B activity in treatment group was lower than that in control group T2,

8、T3,T4 and T5. The PMN NF-B activity in U2 group was lower than that in U1 group T2,T3 and T4.CONCLUSION Ulinastatin can reduce the activity of PMN NF-B,and the&

9、#160;inhibition action of U2 group is better than U1 group in patients undergoing CPB.Key words： Ulinastatin; Cardiopulmonary bypass;Polymorphonuclear neutrophils;NF-B體外循環(cardiopulmonary bypass,CPB)可觸發一系列

10、全身炎癥反應, CPB中許多因素如血液與CPB管道直接接觸,手術創傷,器官缺血再灌注,術中體溫的改變等,均可引起全身炎癥反應1。而核因子-B ( nuclear factor -B,NF-B)是多種細胞因子和炎性介質的基因轉錄和級聯放大過程的共同通路和作用位點,它的活化可加重CPB及心肌缺血再灌注損傷中的炎性反應2。烏司他丁(Ulinastatin) 為廣譜的蛋白水解酶抑制劑,具有抑制炎性介質產生的作用。我們已有研究表明烏司他丁對CPB患者的PMN NF-B活性有抑制作用，但不同劑量烏司他丁對CPB患者的PMN N

11、F-B活性的作用是否一樣尚無定論，本實驗旨在探討不同劑量烏司他丁對CPB下心內直視手術患者NF-B活性的影響。1 資料與方法1.1 病例選擇與分組 選擇心功能- 級、擇期CPB下行法洛四聯癥根治術患者60例，男性32例，女性28例，年齡48歲，體重10.024.5kg。隨機分成烏司他丁1組(U1組)、烏司他丁2組(U2組)和對照組(C組),每組20例。所有患者均無肝腎功能障礙、糖尿病、重度貧血及近期使用皮質激素治療等。1.2 麻醉及CPB方法 全部病例均于術前30 min肌注嗎啡0.1 mg/kg,東莨菪堿0.01

12、 mg/kg,麻醉誘導為芬太尼5 g/kg,咪唑安定0.15 mg/kg,萬可松1.5 mg/kg,氣管插管全身麻醉,麻醉維持應用芬太尼2530 g/kg,間斷應用萬可松、異丙酚或異氟烷吸入麻醉。CPB均采用Sarns-8000人工心肺機,希健-型膜式氧合器和科威動脈微栓過濾器。羥乙基淀粉130/0.4、紅細胞等預充,晶膠比0.40.61。轉機前常規肝素化(3 mg/kg),CPB中追加肝素抗凝,保持ACT>480 s。灌注流量80120 ml/(kg·min),術中維持血壓4060 mm

13、Hg(1 mmHg=0.133 kPa) 。血液中度稀釋,中度降溫。St. Thomas液間斷灌注心臟。停機后按11用量以魚精蛋白中和體內肝素。1.3 用藥方法、標本采集及指標測定 U1組給烏司他丁(廣東天普生物化學制藥有限公司,每支5萬U)1.0萬U/kg,U2組給烏司他丁2.0萬U/kg，用生理鹽水稀釋至20 ml,于麻醉誘導后切皮前經中心靜脈推注半量,另半量加入預充液中。C組以等量生理鹽水替代, 用法同上。分別于麻醉后手術前(T1)、CPB開始后30 min(T2)、CPB停止后30 mi

14、n(T3)、4 h(T4)和24 h(T5)抽取橈動脈血3 ml,肝素抗凝(肝素化血不抗凝)，測定紅細胞比積(Hct)，分離中性粒細胞(密度梯度離心法)，并于-70 以下貯存待測。用ELISA法(試劑盒購自ADL公司)測定中性粒細胞(PMN)核因子-B(NF-B)活性。由于CPB期間血液稀釋因素, 所得數值由Hct值按如下公式進行校正:校正值=測得值×( CPB前Hct值/Hct測得值)1.4 統計學處理 應用SPSS 11.0 統計軟件進行統計分析,所有數據用均數±標準差(

15、±s)表示。組內比較采用重復測量數據的方差分析,組間比較采用單因素方差分析, P<0.05認為差異有統計學意義。2 結 果2.1 三組患者一般資料比較無統計學差異，見表1。2.2 三組患者PMN NF-B 活性在CPB開始后均逐漸升高,于CPB停止后30 min達到峰值, 之后逐漸下降，但在CPB停止后24 h 三組PMN NF-B活性均依然高于術前水平; U1組和U2組在T2T5時點PMN NF-B活性均低于C組(P< 0

16、.05);U2組在T2T4時點PMN NF-B活性低于U1組(P<0.05),見表2。表1 病例分組及一般資料比較表2 三組患者不同時點PMN NF -B活性的比較注：與T1相比, # P<0.05, #P< 0.01; 與C組相比,  P<0.05,P< 0.01; 與U1組相比, *P<0.053 討 論CPB引起的全身炎癥反應是導致CPB術后組織、器官損傷的重要因素3。在心臟直視手術中

17、,CPB一旦建立,機體不可避免地面臨多方面打擊，促發腫瘤壞死因子-(TNF-)、白介素(IL)-6、IL-8、IL-10 等多種炎性介質的瀑布樣釋放,導致全身炎癥反應,并引起組織損傷和器官功能障礙4。NF-B是具有基因轉錄調節作用的蛋白質因子,幾乎存在于所有細胞中,調節著編碼細胞因子、生長因子、趨化因子、細胞粘附分子和一些有關健康及疾病的蛋白基因，廣泛參與多種細胞因子和炎性介質的基因轉錄和級聯放大過程2。有研究顯示NF-B在CPB引起的全身炎癥反應中起重要作用2,5。烏司他丁是一種典型的Kuniz型的蛋白酶抑制劑,具有兩個活性功能區，兩個活性功能區均有廣譜抑酶作用,能夠同時抑制胰蛋白

18、酶、磷脂酶A2、透明質酸酶、彈性蛋白酶等多種蛋白酶的活性6。研究證明中性粒細胞對機體的防御起重要作用,也是重要的炎性細胞,其內容物具有組織損傷的作用,在全身炎癥反應中起重要作用，被認為是炎癥消散的關鍵7,8。本實驗中，我們檢測了對照組和烏司他丁組患者中性粒細胞NF-B的表達活性,結果顯示隨著CPB的啟動三組患者PMN NF-B活性均逐漸增高,并于CPB停止后30min達到峰值，說明CPB過程中的各種因素確實可以引起PMN NF-B活化，這一結果與Chandrasekar等9的結果相符。本實驗結果顯示，U組各時間點PMN NF-B活性明  

19、60; 顯低于C組，說明在CPB過程中使用烏司他丁的確具有降低PMN NF-B活性，減少其活化的作用。這與我前面的研究結果烏司他丁對CPB患者中性粒細胞NF-B的活性有抑制作用相一致。本研究結果亦顯示，U2組在CPB開始后30 min、CPB停止后30 min、4 h PMN NF-B活性低于U1組，說明烏司他丁降低CPB患者PMN NF-B活性的作用與所用烏司他丁的劑量有關，且在小劑量范圍內，烏司他丁的劑量越大，其抑制作用越強。但在更大劑量時其作用是否如此尚有待進一步探討。【參考文獻】  1&

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