1、五鶴續斷多糖的提取及動態分布規律的研究 【摘要】 目的以恩施州道地藥材五鶴續斷為原料，初步研究其多糖提取分離及其動態分布規律。方法采用石油醚脫脂、熱水浸提、乙醇沉淀分離、sevage脫蛋白、冷凍干燥等方法提取分離續斷多糖，并采用蒽酮比色法測定續斷多糖的含量，了解其多糖的動態分布規律。結果在提【摘要】 目的以恩施州道地藥材五鶴續斷為原料，初步研究其多糖提取分離及其動態分布規律。方法采用石油醚脫脂、熱水浸提、乙醇沉淀分離、sevage脫蛋白、冷凍干燥等方法提取分離續斷多糖，并采用蒽酮比色法測定續斷多糖的含量，了解其多糖的動態分布規律。結果在提取2次、加料液比為120、提取時間2 h、提取溫度為95

2、 時，續斷多糖得率最高，三年生續斷根多糖分布最高。結論五鶴續斷多糖分布規律為：三年生根兩年生根一年生根葉，人工種植的續斷根野生根。 【關鍵詞】 五鶴續斷 多糖 提取分離 分布規律Abstract：ObjectiveTo extract and separate polysaccharide in Dipsacus asper and extract polysaccharide and study its regularities.MethodsDuring the extraction of polysaccharide, the effects of extraction times, t

3、emperature, proportion and time on yield of polysaccharide investigated by orthogonal experiment. The separation procedure of precipitation with alcohol and purification from the removing proteins and fats were analyzed. The contents of polysaccharides were determined by anthrone colorimetry. Result

4、sThe results showed that the optimum parameters were as follows: 2 times extraction ratio of material solvent 1:20, the time 2h, the temperature was 95. ConclusionThe regularities of polysaccharide distribution in Dipsacus asper is as follows: the polysaccharide in the roots grew for three years the

5、 one for two yearsfor one yearthe one in the leaves, the cultivation Wu-He Dipsacus roots the wild form.Key words：Wu-He Dipsacus asper； Polysaccharide；Extraction；Separation procedure； The regularities of distribution 五鶴續斷屬于川續斷科植物（Dipsacus asper），藥用部位為其干燥根，其產地以湖北鶴峰縣、五峰縣為主，并且是川續斷中的優質品1，具有補肝益腎、續接筋骨、抗骨質

6、疏松、止血安胎等功效，臨床上主要用于治療腰膝酸軟，跌打損傷，骨折，腰椎骨質增生，先兆性流產和習慣性流產等癥狀2。已有研究表明，續斷根的熱水提取物中存在著抗補體多糖和具免疫調節活性的高分子活性成分3。多糖尤其是中藥多糖因具有增強機體免疫功能及抗腫瘤等藥理作用，而且幾乎沒有毒性，愈來愈成為當前的研究熱點。本研究以五鶴續斷為原料，探究續斷多糖的提取和動態分布規律，以拓寬五鶴續斷的應用范圍和產品類型,為進一步開展其藥用及保健方面的應用開發奠定基礎。1 材料與儀器1.1 采樣及樣品預處理本研究所用材料均來自恩施州鶴峰縣走馬鎮萬寺坪道地藥材五鶴續斷GAP研究及種植基地，野生續斷采自GAP基地周圍的環境。采

7、用隨機取樣的方法，分別取人工種植一年生、二年生、三年生和野生的新鮮植株各10株（其根生長三年以后木質化，不能藥用），用無離子水將其根、莖、葉分別洗凈，切碎后放在105 的烘箱里殺青3060 min后，于80 下烘至恒重，將各樣品用粉碎機打成粉末，過60目篩，裝于試劑瓶中，貼上標簽，置于干燥器內貯存備用。1.2 儀器與試劑植物樣品粉碎機，756MC-紫外分光光度計，RE-52型旋轉蒸發器，HWS12電熱恒溫水浴鍋，DGX型電熱鼓風干燥箱，磁力攪拌器，pH計（PHS-3C），電子天平，冷凍干燥機，低速大容量多管離心機，雙重蒸餾水器。95%乙醇、無水乙醇、氯仿、正丁醇、葡萄糖、石油醚、蒽酮、濃硫酸、

8、HClO4、葡萄糖等，所有試劑均為分析純（由恩施州人合科貿有限責任公司提供），所用水為雙蒸水。2 方法2.1 續斷多糖的提取工藝流程石油醚脫脂熱水浸提水提液過濾冷凍濃縮乙醇沉淀多糖Sevage試劑去蛋白冷凍干燥測定含量。2.2 多糖含量測定多糖含量測定采用鄒琦主編的植物生理生化實驗指導中蒽酮比色法4，采用葡萄糖作標準溶液，得線性回歸方程曲線為：Y=266.03X-3.004 7，相關系數r2=0.997 6。樣品中多糖的測定：吸取樣品溶液和蒸餾水（作空白）各1 ml，分別置于試管中，沿壁緩慢加入5 ml冷的蒽酮溶液，混合均勻后，在試管口蓋上玻璃塞，在沸水浴上加熱10 min后，在流水中冷卻20

9、 min，在620 nm波長處以試劑空白作參比，測定吸光度，根據回歸曲線查出樣品中多糖的濃度。3 結果3.1 五鶴續斷中續斷多糖的提取影響續斷多糖提取率的因素很多，如料液比、溫度、時間以及提取次數等，為綜合分析各因素的影響程度，本實驗采用4因素3水平正交實驗5L9（34），以確定續斷多糖的最佳提取工藝。實驗方案設計見表1。表1 影響續斷多糖提取因素實驗水平表（略）根據因素水平表1，按正交實驗L9（34）浸提。將浸提液過濾、濃縮后，濃縮液加無水乙醇沉淀，4靜置過夜后離心(5 000 r/min，15 min)， Sevage試劑去蛋白，冷凍干燥，得續斷粗多糖, 重復實驗3次，正交實驗設計與實驗結果見表2。經直觀分析，初步篩選出續斷多糖提取工藝的最佳水平組合為A2B3C2D2。表2 續斷多糖提取正交實驗L9（3