1、核桃粉及核桃油提取工藝研究與開發技術總結報告天水羲皇生物科技有限公司甘肅天工生物科技公司甘肅農業大學2012年10月核桃粉及核桃油提取工藝研究與開發技術總結報告一、立項的目的和意義（一）我國及甘肅省核桃資源豐富核桃，落葉喬木，原產于近東地區，又稱胡桃、羌桃，與扁桃、腰果、榛子并稱為世界著名的“四大干果”。既可以生食、炒食，也可以榨油、配制糕點、糖果等，不僅味美，而且營養價值很高，被譽為“萬歲子”、“長壽果”，是一種藥食兩用植物。核桃喜光，抗逆性強、耐寒、耐酸、耐旱、抗病能力強，適應多種土壤生長，喜水、肥，同時對水肥要求不嚴，落葉后至發芽前不宜剪枝，易產生傷流，核桃是被子植物。我國是世界核桃的主

2、要生產國，種植歷史悠久，分布甚廣，種植面積達到3175萬畝，產量近50萬噸，總面積和產量均居世界第一位。核桃作為重要的干果油料樹種，既是傳統的營養保健果品，又是重要的油料能源資源。聯合國糧農組織數據庫資料顯示，2005年全世界核桃栽培總面積在200萬公頃以上，年總產量為170萬噸。中國核桃栽培歷史長達2000多年，有20多個省區種植，種植面積和總產量均居世界第一位，但由于中國人口眾多，年人均核桃占有量僅有0.38公斤，人均消費量更少，核桃產業發展空間廣闊種植面積約133萬hm2，總產量居世界第二位（約120萬噸），僅次于俄羅斯。我國核桃主要分布于云南、陜西、山西、四川、甘肅、河北、河南地區及邊

3、遠山區。甘肅省位于我國青藏高原、黃土高原的內陸西北地區，海拔大多在1000米以上，大部分處于干旱、半干旱及半濕潤地區，空氣干燥，日照時間長、晝夜溫差大，適合核桃生長，所以核桃資源非常豐富。目前，甘肅省定西、天水、白銀、隴南等地區，核桃種植面積已達50多萬畝，年產量30多萬噸，本項目產品有鮮明的區域性資源優勢。（二）核桃及其提取物有很高的營養保健功能核桃具有很高的營養價值，其蛋白質含量高，每100克核桃中，含蛋白質為1520克，蛋白質亦為優質蛋白，脂肪5064克，核桃中的脂肪71%為亞油酸，12%為亞麻酸，核桃中脂肪和蛋白是大腦最好的營養物質。糖類為10克，以及含有鈣、磷、鐵、胡蘿卜素、核黃素（

4、維生素B2）、維生素B6、維生素E、胡桃葉醌、磷脂、鞣質等營養物質。八種人體必需氨基酸的種類齊全，配比合理；核桃脂肪中含有人體正常發育必需的脂肪酸和不飽和脂肪酸（亞油酸、亞麻酸、花生烯酸），其中油酸和亞油酸含量很高，不飽和脂肪酸占脂肪總含量的90%；維生素、礦物元系含量豐富。核桃油有著卓越的營養保健價值和非凡的食療功效。核桃油含有多種有益人體健康的無機元素鈣、磷、鐵、銅、鋅和微量元素鉀等，這也增強了核桃的營養保健功能。本草綱目記載：“食之令人肥健，潤肌，黑須發。多食利小便，去五痔通潤血脈，骨肉細膩補氣養血，潤燥化痰，益命門，利三焦，溫肺潤腸，治虛寒喘嗽。”唐朝食療本草中已經記載了胡桃的藥用。到

5、了明朝，李時珍更是將胡桃視為中藥中的佳品。認為它“氣味甘，平、溫，無毒”，具有“補氣養血，潤燥化痰，益命門，利三焦，溫肺潤腸，治虛寒喘嗽，腰腳重痛，心腹疝痛，血痢腸風，散腫毒，發痘瘡，制銅毒”等多種功效。（三）綜合利用核桃資源，提高社會經濟效益我國是核桃種植大國，核桃資源豐富，目前國內核桃利用率較高，以初級加工為主，核桃深加工產業剛起步，但因核桃還有豐富的蛋白質和不飽和脂肪酸，其中的不飽和脂肪酸高達90%，加之近年來核桃的保健功能日益受到人們的重視，所以核桃深加工產業顯示出極強的生命力。在核桃加工中，核桃仁是產量最大的一種產品，因而，核桃仁有望成為一種廉價的提取原料。利用現代生物工程技術和科學

6、生產工藝，使核桃仁中的各種營養成分尤其是蛋白質和不飽和脂肪酸盡可能的釋放出來，是這一產業的發展趨勢。因此，開發新型、天然、綠色的保健品核桃蛋白粉、核桃油，既可充分利用資源，提高產品的附加值，又可以帶動我省地區經濟的發展，具有廣闊的應用前景。因此，進一步開發先進成熟的相關技術，利用核桃仁產品提取蛋白和植物油，對于延長產業鏈、提高增值效益、滿足市場需求，都具有積極作用和現實意義。而且經采用先進技術提取加工后的粉渣，其蛋白質等營養成分不被破壞，可做為上好蛋白粉，從而實現資源充分利用，符合科學發展觀和循環經濟的要求。二、目前存在的問題及研究進展（一）蛋白提取的研究進展目前國內外在蛋白類化合物的提取上多

7、采用有機溶劑萃取法、微波提取法、超聲提取法、超臨界流體萃取法等。有機溶劑萃取法是根據蛋白類化合物與雜質極性不同來選擇適合的有機溶劑。主要采用堿液溶解蛋白質的方法，常用氫氧化鈉進行提取。微波萃取實際上主要是微波對萃取溶劑及樣品的加熱作用，它能夠穿透萃取溶劑和物料使整個系統更加均勻地加熱從微觀上講，微波所產生的電磁場加速樣品向萃取溶劑界面的擴散速率。超聲波提取（ultrasonic extraction，UE）是近年來應用到中草藥有效成分提取分離中的一種方法，其原理是利用超聲波空化作用加速植物有效成分浸出，另外超聲波次級效應，如機械震動乳化、擴散、擊碎、化學效應等，也能加速提取成分的擴散、釋放并與

8、溶劑充分混合而利于提取。該法具有設備簡單、操作方便、提取時間短、產率高、無需加熱，有利于保護熱不穩定成分、省時、節能、提取率高等優點，但超聲波作用的時間和強度需要一系列試驗來確定，超聲波發生器工作噪聲比較大，需注意防護，工業應用有一定困難，而且在大規模提取時效率不高，故常作為一種強化或輔助手段。超臨界流體萃取(supercritical fluid extraction,簡稱SFE或SCFE)的原理是利用超臨界流體的溶解能力與其密度的關系，即利用壓力和溫度對超臨界流體溶解能力的影響而進行的。核桃蛋白主要有四種蛋白質構成!它們是清蛋白球蛋白，醇溶蛋白和谷蛋白, 分別占核桃蛋白總量的6.81%、1

9、7.57%、5.33%、70.11%。由此，可以分別采用氯化鈉溶液提取清蛋白和球蛋白,采用乙醇溶液提取醇溶蛋白，以及采用氫氧化鈉溶液提取谷蛋白，提取液在25攝氏度下經磁力攪拌器攪拌，漿液在78-82攝氏度，打漿2-3次為宜，蛋白質溶出率90%。以堿溶酸沉為基礎,對核桃蛋白的提取工藝條件進行了優化。在確定等電點的基礎上,分析了輔助浸提方式、pH值、溫度、時間、固液比對核桃蛋白提取率的影響。研究表明,核桃蛋白質等電點為4.6;在超聲波處理條件下,固液比1:90,溫度55,堿溶pH值7.5,時間70min為提取條件,其核桃蛋白提取率達55.83%。以提油后的核桃粕為原料,采用單因素試驗和正交試驗的方

10、法,對核桃粕中蛋白質提取工藝進行研究,得到最佳提取條件:pH8.5,料液比130,在50下超聲波提取60min,然后在pH4.5條件進行酸沉淀。在此條件下,核桃蛋白質的提取率可達到85%左右。我們對這三種方法進行對比，選擇了最為適宜的方法即單因素實驗和正交試驗的方法進行提取蛋白。核桃蛋白的測定常采用凱式定蛋法和光譜分析法。我國核桃及其制品中總蛋白含量的測定（GB/ T 5009. 52003）就是采用光譜分析法。上述這些核桃中化合物提取、純化的方法都有其各自的缺點和不足，如有機溶劑萃取法易使提取物中含有雜質，此法提取率不高還容易造成有機溶劑的殘留；超聲波萃取大規模提取時效率不高，不適合工業化生

11、產，僅僅可以作為一種強化或輔助手段；超臨界流體萃取存在生產成本過高等問題。（二）核桃油的提取的研究進展目前國內外核桃油的萃取主要采用水蒸氣蒸餾法、壓榨法、溶劑萃取法等，這些方法都有自己的不足之處，蒸氣蒸餾法存在的弊端在于蒸餾過程中水及高溫會破壞植物油中較為脆弱的部分；壓榨法萃取的核桃油包含蠟等非揮發性物質，相對使得壓榨核桃油的保存期限較短；溶劑萃取法所得核桃油含有樹脂、油脂、等。（三）亞臨界流體萃取技術的特點(1) HFC -134a（四氟乙烷）亞臨界流體無色、無毒、無味，不燃燒爆炸；由于碳氫氟鍵的鍵能非常高，因而具有較好的熱穩定性和化學穩定性，當其處在高于沸點，但低于臨界溫度和臨界壓力狀態時

12、，具有較低的粘度和較高的擴散系數，因而傳質速度快，溶解能力強，同時，該物質的沸點較低，在減壓條件下可以充分氣化，非常有利于溶劑的回收，而且避免了萃取分離全過程高溫作業（不高于45），非常適合于“熱敏性”有效成分的提取、分離。(2)萃取流程均處在比較安全的中、低壓狀態下完成，設備的有效容積受工藝的制約小，系統的安全性能指標相對提高，同時，大幅度降低了裝置制造過程的工藝難度和工程造價。(3)在亞臨界流體萃取方法中特別設計夾帶劑系統，在萃取前或萃取過程當中利用乙醇作為夾帶劑改變溶劑的極性，使得溶媒與夾帶劑發揮協同作用，提高萃取效率。(4)與傳統溶劑萃取工藝相比，在同等提取率指標下，可縮短提取時間1倍

13、左右（因產品而異），溶媒存在于閉路系統而使其損耗和排放污染均顯著低于溶劑萃取，由于避免了傳統溶劑依靠較高溫度試現脫除和回收的高耗能工序，因而綜合能耗可降低40%左右，而且保證了制品的生物活性。絕大多數有機溶劑易燃易爆，而“HFC -134a”卻無此危險。此外，“HFC-134a”亞臨界萃余物不受溶劑污染，原有的水溶性成分以及蛋白等物質不變性，仍可用做飼料或繼續提取剩余的極性成分。(5)與國內現有的亞臨界丙丁烷萃取相比，突出優勢在于更高的安全性。(6)“HFC”的毒性AEL（8和12小時TWA）可允許的空氣暴露濃度為1000PPm(v/v)，并且該密實氣體作為氣霧攜帶劑已在醫藥行業得到大量應用，

14、說明用該溶劑萃取的中間體無醫用、食用安全性障礙。（四）核桃產品的開發現狀目前核桃產品以初加工產品為主，占核桃制品的95%，主要有核桃蛋白粉、核桃油、核桃乳等幾個品種，這些產品品種單一，適口性差，遠不能滿足人們對于營養、快捷、方便和藥用保健產品的消費需求，市場上很難找到，我省核桃產品因市場推廣、消費引導不力也未能建成外地銷售市場，甘肅本地產品市場份額已下降至20%左右，迫切需要新的開發思路。三、課題研究內容（一）研究方法及主要技術路線針對國內外市場狀況，特別是把握今后核桃制品精細加工技術和新主流品種的趨勢，結合原材料的物料學特性，應用食品工藝、亞臨界及超聲波提取技術、干燥、質量管理等先進的理論和

15、技術，進行項目的研究和轉化應用。項目的技術路線是：產品定位工藝流程設計解決關鍵技術確定工藝參數小試中試檢測生產應用。（二）主要研究內容本項目通過合理的設計研究解決核桃去皮及蛋白提取存在的問題，通過試驗選擇合理的工藝流程、工藝參數為提取核桃蛋白及核桃油提供依據，本研究的主要內容有：(1)比較不同產地、核桃去皮效果。(2)研究確定亞臨界提取核桃油的工藝及參數。(3)溶劑提取法對核桃中蛋白的提取效果，確定其工藝流程、主要影響因素和工藝參數。(4)研究超聲波增強-溶劑提取對核桃中蛋白的提取效果，確定其工藝流程、主要影響因素和工藝參數。(5)研究亞臨界對核桃中蛋白的提取效果，確定其工藝流程、主要影響因素

16、和工藝參數。(6)研究超聲波-亞臨界-乙醇夾帶符合技術對核桃中蛋白的提取效果。(7)提取物除雜純化。(8)蛋白粉、核桃油精煉化。(9)通過對制品的感官、理化及微生物指標的評價選出工藝簡單合理，成本低廉的提取核桃蛋白、核桃油的生產工藝。四、研究材料與方法1、材料與設備材料核桃、氫氧化鈉、鹽酸、無水乙醚、石油醚、硫酸銅、硫酸鉀、磷酸氫二鈉、檸檬酸、無水亞硫酸鈉，均為分析純。設備HH2 型數顯電子恒溫水浴鍋；格蘭仕牌WD800G型微波爐； AS10200AT 型超聲波儀； Sigma3k15 型離心機； DZF6090 型真空干燥箱； DHG9140A型數顯電熱鼓風干燥箱；BT224S 型電子天平；

17、Buchi B290 型噴霧干燥機。2、方法工藝流程石油醚核桃去殼核桃仁去皮粉碎去油堿溶過濾 酸沉離心棄上清液核桃蛋白噴霧干燥核桃蛋白。核桃原料預處理將去殼后的核桃仁用0.6% NaOH堿液55浸泡核桃仁20min，采用高壓小流量清水槍噴淋，清水浸泡，將去皮后的核桃仁置于 55 的烘箱中烘干，研碎成粉末5。采用石油醚浸泡核桃粉末處理 48 h，期間需更換石油醚 1 次，并進行攪拌 34 次，保證最大限度去掉核桃油。酸沉劑的選擇核桃仁中含有少量的酚類物質，對核桃蛋白的顏色具有一定的影響，而且這類顏色很難在脫色過程中洗脫掉。采用磷酸鹽檸檬酸緩沖溶液為酸沉劑，核桃蛋白的顏色更佳。理化指標測定（1）水

18、分測定采用 GB/T 5009.32003，直接干燥法。（2）脂肪含量的測定依據 GB/T 1477.22008。（3）蛋白質含量的測定依據 GB/T 5009.52003，凱氏定氮法。（4）在本實驗中蛋白提取率以浸出率為指標。蛋白浸出率按照下式計算式中：X浸出率，%； m1去油處理后的核桃原料粉質量，g； m2干物質質量，g。核桃蛋白提取工藝的優化（1）核桃蛋白等電點的確定。用酸調節核桃蛋白溶液至不同 pH 值： 4.0， 4.2， 4.4， 4.6， 4.8， 5.0， 5.2，5.4，5.6，5.8，6.0，過濾后，烘干，稱質量，分析核桃蛋白的等電點。（2）輔助浸提方式的選擇。堿液 pH

19、 值 9.0，溫度 55 ，固液比 130，時間 60 min 的條件下，選取輔助浸提方式分別為：堿提（磁力攪拌器）、水浴、超聲波、水浴微波、水浴光波，確定較佳方式。（3） pH 值的選擇。在 55 ，固液比 130，超聲波處理 60 min 的條件下，選取堿液 pH 值分別為：7.0，7.5，8.0，8.5，9.0，9.5，進行單因素試驗，確定較佳的因素水平。（4）溫度的選擇。在 pH 值 9.0，固液比 130，超聲波處理 60 min 的條件下，選取溫度分別為：40，45，50，55，60，65 ，進行單因素試驗，確定較佳的因素水平。5）時間的選擇。在溫度55 ，固液比 130， pH

20、值 9.0，超聲波條件下，選取處理時間分別為： 30，40，50，60，70 min，進行單因素試驗，確定較佳的因素水平。（6）固液比的選擇。在溫度55 ，pH 值 9.0，超聲波處理 60 min 的條件下，選取固液比分別為：110，120，130，140，150，160，170， 180，190，1100，1110，1120，進行單因素試驗，確定較佳的因素水平。（7）核桃蛋白提取正交試驗。為了優化核桃蛋白的提取工藝，得到較高的提取率，以浸出蛋白質為指標，依據單因素試驗選取堿液 pH 值、溫度、時間、固液比進行 4 因素 3 水平 L (34)正交試驗。通過正交驗，分析核桃蛋白提取過程中各因

21、素對核桃蛋白提取率的影響，并確定最佳核桃蛋白質提取參數。正交試驗因素與水平設計見表 1。（8）核桃蛋白噴霧干燥6。根據設備情況，對核桃蛋白噴霧干燥選取料液的質量分數為 10%，進風溫度為 165 ，出風溫度為 50 ，進料溫度 35 ，抽風量 19 m3/h，進料流量 11 mL/min。3、結果與分析2.1 等點電的測定等電點pH值對提取率的影響見圖1由圖 1 可知，在 pH 值為 4.65.0，核桃蛋白的提取率的波動范圍不大，其中，pH 值為 4.6 時，核桃蛋白的提取率最高。由此可以判斷，核桃蛋白等電點為 4.6。以下試驗中，酸沉 pH 值均選擇 4.6。2.2 輔助浸提方式的選擇輔助提

22、取方式對核桃蛋白提取率的影響見表 2。由表 2 可知，采用超聲波進行輔助提取時，核桃蛋白的提取率最高，可以達到 48.85%，其他提取方式都較小。故選取超聲波作為核桃蛋白的輔助提取方式，在以下試驗中，均以超聲波為核桃蛋白的輔助浸提方式。2.3 pH 值對提取率的影響堿液 pH 值對提取率的影響見圖 2。從圖 2 可知，pH 值為 7.5 時，核桃蛋白的提取率最高，達到48.9%。pH值為7.0和9.0時的提取率次之。在實驗中發現，pH 值的變化會影響所提取核桃蛋白成品的顏色，而且隨著PH值的增大，顏色也越來深。在 pH 值為 9.0 時，形成了一些酚醛類物質，使成品顏色呈現紫褐色，但在 pH

23、值 7.08.0 范圍內，顏色較淺，故綜合考慮，選取 7.0，7.5，8.0為 pH 值的 3 個水平。2.4 溫度對提取率的影響：溫度對提取率的影響見圖3從圖 3 可知，隨著溫度的增加，核桃蛋白質的提取率逐漸增加，超過 55 之后，提取率開始呈下降趨勢。這主要是由于溫度升高，蛋白質的變性引起的。溫度為 55 時，核桃蛋白的提取率最高；50 和 60 時的提取率次之。故選取 50，55，60 為溫度的 3 個水平。2.5、時間對提取率的影響：時間對提取率的影響見圖4從圖 4 可知，隨著浸提時間的增加，核桃蛋白提取率也提高，當時間為 70 min 時，略有下降，這可能是提取時間增加后，少量蛋白質

24、被分解的原因。因此，選取 50，60，70min為時間的3個時間水平段。2.6、固液比對提去率的影響：固液比對提去率的影響見圖5從圖 5 可知，隨著固液比的增加，核桃蛋白質的提取率逐漸增加，在(190)(1100)時，核桃蛋白的增加有一個明顯的提高。故選擇 190，1100， 1110 為固液比的 3 個水平。2.7、核桃蛋白提取的正交實驗正交實驗結果見表3由表 3 可知，各因素的水平對試驗結果影響的主次順序為：D （固液比），B （溫度），A （pH 值）， C（時間）。其最優方案為 A2B2C3D1，即堿液 pH 值為 7.5，浸提溫度為 55 ，提取時間為 70 min，固液比為 190

25、。2.8 噴霧干燥蛋白質粉末理化性質見表 4。由表 4 可知，噴霧干燥出的核桃蛋白脂肪含量較高，這主要是由于實驗過程中去油不徹底引起的。同時也說明核桃蛋白質具有很好的吸油性。在實際生產過程中，核桃殘渣中只含有少量的油脂，因此采用此法生產核桃蛋白質時，其油脂不會如此高，蛋白質的含量會大大提高。4、核桃蛋白粉、核桃油的純化精制分析提取物中雜質的成分，有針對性的選擇精制純化條件，采用溶劑提取、板框過濾、脫酸、脫色等工藝，對所得蛋白粗品、油脂提取物進行純化，以獲得高純度核桃蛋白和核桃油。5、結論采用堿溶酸沉方法提取核桃蛋白質，其等電點為 4.6，輔助浸提方式為超聲波；提取優化參數為： pH 值 7.5

26、，溫度55 ，固液比 190，時間 60 min，在此條件下，得到的蛋白提取率可達 55.83%。采用噴霧干燥制取干燥后的成品干粉，其顆粒度較均勻細致，不會出現黏壁現象。6. 測定項目和方法（1）核桃中蛋白含量測定粉狀、固液體試樣：稱取0.55g試樣（使試樣中含氮3040mg），精確至0.001g，放入凱氏燒瓶中（避免粘附在瓶壁上）。 112 液體試樣：取1020±0.05mL試樣（使試樣中含氮3040mg），移入凱氏燒瓶中，蒸發至近干。 12 消化 向凱氏燒瓶中依次加入硫酸銅（4.1）0.4g、硫酸鉀（4.2）10g、硫酸（4.3）20mL及數粒玻璃珠。將凱氏燒瓶斜放（45

27、6;）在電爐上，緩慢加熱。待起泡停止，內容物均勻后，升高溫度，保持液面微沸。當溶液呈藍綠色透明時，繼續加熱0.51h。取下凱氏燒瓶冷卻至約40，緩慢加入適量水，搖勻。冷卻至室溫。 13 蒸餾 采用下列方法之一蒸餾。 131 常量蒸餾 向接收瓶內加入50mL4%硼酸溶液（4.5）及4滴甲基紅-次甲基藍混合指示液（4.8）。將接收瓶置于蒸餾裝置的冷凝管下口，使冷凝管下口浸入硼酸溶液中。將盛有消化液的凱氏燒瓶連接在氮素球下，塑料管下端浸入消化液中。沿漏斗向凱氏燒瓶中緩慢加入70mL40%氫氧化鈉溶液（4.4）（使漏斗底部始終留有少量堿液，封口）。加堿后燒瓶內的液體應為堿性（黑褐色）。通入蒸汽，蒸餾2

28、0min（始終保持液面沸騰）。至少收集80mL蒸餾液。降低接收瓶的位置，使冷凝管口離開液面，繼續蒸餾3min。用少量水沖洗冷凝管管口，洗液并入接收瓶內，取下接收瓶。 132 微量蒸餾 將消化好并冷卻至室溫的消化溶液（7.2）全部轉移到100mL容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，搖勻。 向接收瓶內加入10mL4%硼酸溶液（4.5）和1滴混合指示劑（4.8）。將接收瓶置于蒸餾裝置的冷凝管下口，使下口浸入硼酸溶液中。取10±0.05mL稀釋定容后的試液，沿小玻璃杯移入反應室，并用少量蒸餾水沖洗小玻璃杯，一并移入反應室。塞緊棒狀玻璃塞，向小玻璃杯內加入約10mL40%氫氧化鈉溶液（4.4）。提起

29、玻璃塞，使氫氧化鈉溶液緩慢流入反應室，立即塞緊玻璃塞，并在小玻璃杯中加水，使之密封。通入蒸汽，蒸餾5min。降低接收瓶的位置，使冷凝管管 口離開液面，繼續蒸餾1min。用少量蒸餾水沖洗冷凝管管口，洗液并入接收瓶內。取下接收瓶。74 滴定 用0.1mol/L鹽酸標準滴定溶液滴定收集液至剛剛出現紫紅色為終點。 同一試樣做兩次平行試驗，同時做空白試驗。 分析結果的表述 常量蒸餾按式（1）計算： 常量蒸餾按式（1）計算：X(%)=(V-V0)*0.014*C*F*100/M微量蒸餾按式（2）計算：X(%)=(V-V0)*0.014*C*F*100/M*10%式中：X食品中蛋白質含量（質量百分率），%（

30、m/m）或%（m/V）； V滴定試樣時消耗0.1mol/L鹽酸標準滴定溶液的體積，mL； V0空白試驗時消耗0.1mol/L鹽酸標準滴定溶液的體積，Ml;C鹽酸標準滴定溶液的摩爾濃度，mol/L； 0.0141mL1mol/L鹽酸標準滴定溶液相當于氮的質量，g；M試樣的質量，g； F氮換算為蛋白質的系數。標準曲線的繪制：用移液管分別吸取蘆丁標準溶液0.25ml、0.50ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml置于10ml容量瓶中，加入三氯化鋁溶液2ml、乙酸鉀溶液3ml，用甲醇溶液定容至刻度，搖勻，室溫下放置30min。同時做空白。標準曲線中蘆丁含量分別為0.00125mg/ml、

31、0.00250mg/ml、0.00500mg./ml、0.0100mg/ml、0.0150mg/ml、0.0200mg/ml。在波長420nm處測定吸光度。以吸光度值為橫坐標，濃度值為縱坐標，繪制標準曲線。試料溶液的制備及測定：稱取試樣0.2-1.0g，精確至0.0001g，置于150mL具塞三角瓶中，加入甲醇溶液30mL，蓋緊瓶塞，將三角瓶置于將三角瓶置于（65±2）的恒溫水浴振蕩器中在（160±10）r/min的振蕩頻率下振搖2h，趁熱過濾，濾液置于50mL容量瓶中，用甲醇溶液清洗濾紙和殘渣，合并濾液，冷卻至室溫，加甲醇溶液至刻度，為試料待測液。準確吸取1.0ml試料待

32、測液置于10ml容量瓶中，分別加入三氯化鋁溶液2ml、乙酸鉀溶液3ml，用70%甲醇溶液定容至刻度，搖勻，室溫下放置30min。于波長420nm處測定吸光度值，將其帶入標準曲線方程計算出總黃酮的濃度。水分含量的測定：按照GB/T 5497規定執行。結果計算：總黃酮含量（以干基結果表示）以蘆丁的質量分數w計，數值以10-2或%表示，按以下公式計算：式中：C由標準曲線計算得出的待測試液的總黃酮濃度的數值，單位為毫克每毫升（mg/ml）；V待測試液的體積，單位為毫升（ml）；D試料的總稀釋倍數；m試料的質量，單位為克（g）；H試樣水分的質量分數。取平行測定結果的算術平均值為測定結果。計算結果表示到小

33、數點后兩位。（2）核桃蛋白粉、核桃油品質分析核桃蛋白粉品質分析理化指標測定水分測定：參照GB/T 5009.31985規定執行蛋白測定：參照GB/T 5009.51985規定執行灰分測定：參照GB/T 5009.41985規定執行脂肪測定：參照GB/T 5009.61985規定執行純度測定總蛋白含量的測定：參照GB/T 5009.51985規定執行紅外光譜測定：供試品與KBr混合壓片法4000400cm-1紅外光譜儀掃描以確定黃酮純度，采用傅立葉紅外光譜儀Nicolet NEXUS 670 FT-IR，該儀器由邁克遜干涉儀和數據處理系統組成，干涉儀將信號以干涉圖的形式送往計算機進行Fourier變換，再經繪圖儀、電傳打字機就送出了紅外光譜圖。采用KBr壓片法，將1-2mg的樣品和200-300mg的溴化鉀粉末，在瑪瑙研缽中研磨混均，然后在壓片機上壓成透明的薄片進行測量，在4000400cm-1紅外光譜儀掃描以確定黃酮純度。核桃油品質分析理化指標測定參照GB/T5009.37食用植物油衛生標準分析方法，分別測定通過精制純化后的核桃油的折光率、酸價、皂化價、過氧化值、碘價和色澤。脂肪酸分析采用1515高