1、精選優(yōu)質文檔-傾情為你奉上當前位置： >  >  > 正文蛋白酶及蛋白酶抑制劑大全日期：2012-06-13     來源：互聯(lián)網標簽：相關專題：摘要 : 破碎細胞提取蛋白質的同時可釋放出蛋白酶，這些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白質不被降解。在蛋白質提取過程中，需要加入蛋白酶抑制劑以防止蛋白水解。以下列舉了5種常用的蛋白酶抑制劑和他們各自的作用特點，因為各種蛋白酶對不同蛋白質的敏感性各不相同，因此需要調整各種蛋白酶的濃度破碎細胞提取蛋白質的同時可釋放出蛋白酶，這些蛋白酶需要迅速的被抑制

2、以保持蛋白質不被降解。在蛋白質提取過程中，需要加入蛋白酶以防止蛋白水解。以下列舉了5種常用的蛋白酶抑制劑和他們各自的作用特點，因為各種蛋白酶對不同蛋白質的敏感性各不相同，因此需要調整各種蛋白酶的濃度。由于蛋白酶抑制劑在液體中的溶解度極低，尤其應注意在緩沖液中加人蛋白酶抑制劑時應充分混勻以減少蛋白酶抑制劑的沉淀。在寶靈曼公司的目錄上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制劑表。常用抑制劑PMSF1)抑制絲氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，凝血酶)和巰基蛋白酶(如木瓜蛋白酶);2)10mg/ml溶于異丙醇中;3)在室溫下可保存一年;4)工作濃度:17174ug/ml(0.11.0mmol/L);5)在水液體溶液

3、中不穩(wěn)定，必須在每一分離和純化步驟中加入新鮮的PMSF。1)抑制金屬水解酶;2)0.5mol/L水溶液，pH89;3)溶液在4穩(wěn)定六個月以上;4)工作濃度:0.51.5mmol/L. (0.20.5mg/ml);5)加入NaOH調節(jié)溶液的pH值，否則EDTA不溶解。胃蛋白酶抑制劑(pepstn)l)抑制酸性如胃蛋白酶，血管緊張肽原酶，組織蛋白酶D和凝乳酶;2)1mg/ml溶于甲醇中;3儲存液在4一周內穩(wěn)定，-20穩(wěn)定6個月;4)1作濃度:0.7ug/ml(1umol/L)5)在水中不溶解。亮抑蛋白酶肽(leupeptin)1)抑制絲氨酸和巰基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血漿酶和組織蛋白酶B;2)lO

4、mg/ml溶于水;3)儲存液4穩(wěn)定一周，-20穩(wěn)定6個月;4)工作濃度0.5mg/ml。胰蛋白酶抑制劑(aprotinin)1)抑制絲氨酸蛋白酶，如血漿酶，血管舒緩素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶;2)lOmg/ml溶于水，pH783儲存液4穩(wěn)定一周，-20穩(wěn)定6個月;4)工作濃度:0.062.0ug/ml(0.010.3umol/L);5)避免反復凍融:6)在pH>12.8時失活。蛋白酶抑制劑混合使用35ug/ml PMSF絲氨酸蛋白酶抑制劑0.3mg/ml EDTA金屬蛋白酶抑制劑0.7ug/ml胃蛋白酶抑制劑(Pepstatin)酸性蛋白酶抑制劑0.5ug/ml亮抑蛋白肽酶(Leupep

5、tin)廣譜蛋白酶抑制劑常用蛋白酶抑制劑表抑制劑靶蛋白酶有效濃度儲藏溶液注解Antipain木瓜酶和胰酶50g/ml1mg/ml水溶液對胰凝蛋白酶，胃液素，纖溶酶無影響APMSF胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶10-40g/ml或10-20M100mmol/L水溶液毒性比PMSF低，不能抑制胰凝蛋白酶或乙酰膽堿酯酶抑肽酶絲氨酸蛋白酶0.06-2g/ml10mg/mlPBS溶液避免反復動凍融抑氨肽酶B氨基肽酶40g/ml溶于甲醇不能抑制羧肽酶Calpain抑制劑、Calpain (鈣依賴性半胱氨酸蛋白酶):17g/ml:7g/ml溶于乙醇可滲透薄膜抑糜朊酶素胰凝乳蛋白酶6-60g/ml溶于DMSO

6、0;B.M.綜合酶片絲氨酸，半胱氨酸和金屬蛋白酶每10-50ml細胞提取液內加一片 不含EDTAEDTA金屬蛋白酶0.2-0.5mg/ml或0.5-1.3mol/L500mmol/L水溶液pH=8.0 抑蛋白酶醛肽絲氨酸蛋白酶，巰基蛋白酶0.5-2g/ml10mg/ml水溶液 a2-巨球蛋白廣譜1/ml100/ml PBS 溶液避免接觸還原劑Pefabloc SC(boe- hringer Mannheim)絲氨酸蛋白酶0.1-1.0mg/ml或0.4-4mmol/L100mM水溶液無毒，在中性pH下較PMSF 穩(wěn)定胃蛋白酶抑制劑酸性蛋白酶0.7g/ml1mg/m

7、l甲醇溶液 PMSF絲氨酸蛋白酶17-170g/ml10mg/ml異丙醇溶液每一操作步驟時新鮮加入TLCK胰蛋白酶37-50g/ml1mg/ml溶于50mMmol/L醋酸鹽溶液，pH=5.0對胰凝蛋白酶無影響TPCK胰凝乳蛋白酶70-100g/ml3mg/ml乙醇溶液對胰蛋白酶無影響作者：青嵐 點擊：次來源于-生物秀知道常用蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)和磷酸酶抑制劑的貯存與工作液濃度2014-06-09 23:01:02 來源： 瀏覽次數(shù)：119 常用蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)和磷酸酶抑制劑的貯存與工作液

8、濃度 在與蛋白相關的檢測中，首先最關鍵的一步便是蛋白質的提取。蛋白質的提取過程中，我們要經常加和蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)以防止蛋白質的降解。另外在磷酸化蛋白的研究過程中，磷酸酶抑制劑也是必不可少的，本文總結了常用的蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)PMSF，Leupeptin 亮肽素，Aprotinin抑肽酶，Pepstatin胃蛋白酶抑制劑(proteas 蛋白酶抑制劑 分子量 溶解性 磷酸酶抑制劑 工作濃度 貯存液 胰蛋白酶 

9、絲氨酸在與蛋白相關的檢測中，首先最關鍵的一步便是蛋白質的提取。蛋白質的提取過程中，我們要經常加和抑制劑(protease inhibitor)以防止蛋白質的降解。另外在磷酸化蛋白的研究過程中，抑制劑也是必不可少的，本文總結了常用的抑制劑(protease inhibitor)PMSF，Leupeptin 亮肽素，Aprotinin抑肽酶，Pepstatin胃蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)，-Na2等以及抑制劑NaF氟化鈉，Na3VO4 原礬酸鈉 ，BETA-glycerophosphate甘油磷酸鈉，Na2P2O4 焦磷酸鈉等。對這

10、些蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)的溶解配制，貯存液與工作液濃度，保存都做了詳細的說明。蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)PMSF：特性：絲氨酸蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)，如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶和凝血酶，也抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶（可逆的地面處理）。溶解性：溶于異丙醇，乙醇，甲醇和丙二醇果>10mg/ml。在水溶液中不穩(wěn)定。在100%異丙醇， +25時穩(wěn)定至少9個月分子量：174.2使用：貯存濃度：200mM，工作濃度：1mMLeupeptin 亮肽素特性：抑制絲氨酸和半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶，木瓜蛋白酶，

11、纖溶酶，和組織蛋白酶B溶解性：高度溶于水（1mg/ml）。4一周穩(wěn)定,分成小份冷凍在-20至少6個月分子量：C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4:475.6C20H38N6O4 x 1/2 H2SO4 x H2O:493.6使用：貯存濃度：1mg/ml，工作濃度0.5 ug/ml (1mM)Aprotinin抑肽酶特性：絲氨酸蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)，抑制纖維蛋白溶酶， 激肽釋放酶，胰蛋白酶，糜蛋白酶的高活性。不抑制凝血酶或因子X。溶解性：易溶于水（10mg/ml）或（例如，tris，0.1M，pH8.0）。pH約7-8的溶液在4可保存1周，分裝保存在-20

12、可至少保存6個月。避免反復凍融, pH>12.8的堿性環(huán)境可使其滅活。分子量：6,512使用：貯存濃度:1mg/ml, 工作濃度：0.062.0 ug/ml(0.010.3 uM)Pepstatin胃蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)特性：抑制天冬氨酸（酸）蛋白酶如胃蛋白酶，腎素，組織蛋白酶D，凝乳酶， 許多微生物酸性蛋白酶溶解性：溶于甲醇約1mg/ml； 可溶于乙醇，過夜溶解可達到1 mg/ml；在6當量乙酸中溶解度為300ug/ml。4穩(wěn)定一周，分裝儲存于-20時可保存1個月分子量： 685.9使用：貯存濃度：1mg/ml，使用濃度：0.7 g/ml(1

13、M)-Na2特性：金屬蛋白酶抑制劑(protease inhibitor)溶解性：溶于水至0.5M，在pH8-9的條件下，4穩(wěn)定至少6個月分子量: 372.24使用：工作濃度：0.20.5 mg/ml(0.51.3 mM)，不需現(xiàn)用現(xiàn)配，在溶液pH值調至8-9時再加入。磷酸酶抑制劑NaF氟化鈉溶解性：溶于水分子量： 41.99使用： 貯存液：5M 工作濃度：10-20mMNa3VO4 原礬酸鈉分子量：183.91溶解性：溶于水，我們購買過來的是原礬酸鈉.原礬酸鈉需要經過處理以后才能成為激活的礬酸鈉,激活的礬酸鈉才具有抑制去磷酸化的作用.原礬酸鈉變成激活的礬酸鈉的過程是:100mM原礬酸鈉激活儲存液配制(1).取0.183克的原礬酸鈉溶解于10ml的雙蒸水中,加酸調節(jié)PH至10(顏色變黃)(2).煮至無色(3).室溫冷卻(4).重調PH至10(5)重復（）（）（）（）直至溶液保持無色，并且穩(wěn)定于10,分裝