1、螃蟹腳黃酮類(lèi)化合物提取工藝優(yōu)化研究                  作者：楊鳳賢，向軼波，馮小飛，劉祥義【摘要】  目的用乙醇提取螃蟹腳中總黃酮的最佳工藝。方法比較超聲提取和回流提取實(shí)驗(yàn)，用比色法測(cè)定有效成分；采用回流提取正交實(shí)驗(yàn)，并對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)不同的計(jì)算和分析比較優(yōu)選螃蟹腳的提取工藝條件。結(jié)果總黃酮提取率是超聲提取低于回流提取；實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)不同的數(shù)據(jù)處理方式得到不同的優(yōu)化工藝條件。通過(guò)驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)可得到重復(fù)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)

2、果用多元線(xiàn)性回歸計(jì)算，可彌補(bǔ)正交極差、方差計(jì)算的不足，更有利于結(jié)果解釋和工藝條件的優(yōu)化。 【關(guān)鍵詞】  正交設(shè)計(jì) 螃蟹腳 黃酮 提取工藝Abstract：ObjectiveTo optimize the extraction process of total flavonoids with alcohol from Viscum articulatum Burm. MethodsCompared with the ultrasonic extraction and the refluent extraction experiment，colorimetric analysis was

3、 used to measure the content of active ingredients. Besides，orthogonal design of the refluent extraction was applied to optimize the technologies of Viscum articulatum Burm in comparison with two ways to deal with the experimental results.ResultsThe extraction rate of the total flavonoids of the ult

4、rasonic was lower than that of the refluent extraction. Besides，the different optimum extraction processes could be obtained by different ways to deal with the experiment results but the same experiment results were found. ConclusionThe multivariate regression analysis can make up shortage of sense.

5、 The equation of regression is more helpful for explanation of result and optimum of preparation technology.Key words：Orthogonal design；  Viscum articulatum Burm；  Flavonoid；  Extraction process   螃蟹腳（扁枝槲寄生）Viscum articulatum Burm系桑寄生科槲寄生屬植物，是一種寄生在樹(shù)齡較高的古喬木茶樹(shù)上的寄生物。螃蟹腳為多年生草本，形

6、狀像小珊瑚，因寄生枝桿節(jié)狀帶毫，故此被稱(chēng)為“螃蟹腳”。在緬甸，由于其特殊的地理位置和生態(tài)環(huán)境，千年古茶園里的古茶樹(shù)上就寄生著“螃蟹腳”。主治風(fēng)濕痹痛、腰膝酸軟、胎動(dòng)不安，與中國(guó)藥典收載的“槲寄生”Viscum coloratum （Kom.）Nakai具有同等功效1，同時(shí)還具有降壓、抗心律失常、增加冠脈流量、改善冠脈循環(huán)、增強(qiáng)心臟收縮力、抗腫瘤、治療肝炎等作用2。對(duì)于槲寄生屬的研究，國(guó)內(nèi)已對(duì)寄生在柿、栗、榆、樺、柳、楓、楊等樹(shù)上的有報(bào)道和專(zhuān)利34，但迄今未見(jiàn)對(duì)寄生在緬甸茶樹(shù)上的螃蟹腳提取工藝優(yōu)化研究的報(bào)道。   經(jīng)研究,槲寄生屬的主要有效成分為黃酮類(lèi)化合物和一些高分子化合物

7、34，黃酮類(lèi)化合物廣泛存在于植物中，具有抗腫瘤、增強(qiáng)心血管功能、抑菌、抗病毒等作用，同時(shí)它還是一種天然的抗氧化劑5。本文以乙醇為溶劑，采用超聲提取和回流提取兩種方法，以總黃酮得率為指標(biāo)進(jìn)行比較。然后對(duì)回流提取的正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)選出螃蟹腳的最佳提取工藝，并對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行了極差、方差計(jì)算，經(jīng)直觀分析以及多元線(xiàn)性回歸分析，計(jì)算機(jī)程序計(jì)算處理兩種方法所優(yōu)選工藝條件的比較，為合理篩選螃蟹腳的提取工藝提供科學(xué)依據(jù)。1  儀器與試劑   UV-22201型紫外分光光度計(jì)（日本島津公司），KESP-100KH超聲波萃取器（深圳市科工達(dá)超聲公司）。   螃蟹腳采自

8、緬甸，并經(jīng)西南林學(xué)院資源學(xué)院植物學(xué)教研室鑒定。   蘆丁（供含量測(cè)定用），由中國(guó)醫(yī)藥（集團(tuán)）上?；瘜W(xué)試劑公司提供，所用試劑均為分析純。2  方法與結(jié)果2.1  超聲提取和回流提取的比較取3 g樣品，在50條件下以乙醇為提取溶劑，固液比15。超聲提取3次，30 min/次；回流提取3次，2 h/次。3次提取液分別合并至50 ml容量瓶中，并用相應(yīng)濃度的乙醇定容至刻度，使其作為供試品溶液。2.2  正交實(shí)驗(yàn)（回流提?。┕┰嚻啡芤褐苽?#160; 按文獻(xiàn)4的方法進(jìn)行研究。2.3  總黃酮的測(cè)定2.4  超聲提取和回流提取總黃酮結(jié)果

9、見(jiàn)表1。表1  超聲提取和回流提取總黃酮的結(jié)果（略）由表1可知，回流提取螃蟹腳總黃酮得率高于超聲提取。2.5  回流提取正交實(shí)驗(yàn)及結(jié)果  根據(jù)初步預(yù)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，擬用3因素3水平（表2），按L9（33）正交實(shí)驗(yàn)表對(duì)螃蟹腳進(jìn)行回流提取實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表3。表2  正交設(shè)計(jì)因素水平（略）表3  正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果（略）多元線(xiàn)性回歸計(jì)算78由于正交設(shè)計(jì)因素間彼此正交，即因素間的相關(guān)系數(shù)rij=0本試驗(yàn)設(shè)計(jì)的相關(guān)系數(shù)矩陣見(jiàn)表4，符合多元線(xiàn)性回歸對(duì)因素的要求。因此，試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)可采用多元線(xiàn)性回歸計(jì)算處理，結(jié)果見(jiàn)表5。表4  相關(guān)系數(shù)矩陣結(jié)果（略）以總黃酮含

10、量為指標(biāo)y，回歸方程   y=1.665 0-0.533 3A+0.001 1B-0.028 3C；   N =9  R =0.643 8  F=1.179 6  S=0.083 5   F0.1（3，5）=3.62   該回歸方程線(xiàn)性不顯著。計(jì)算結(jié)果顯示：溫度在4080的變化對(duì)結(jié)果影響不大，可視為常量，為此刪去因素B。         表5  正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果用多元線(xiàn)性回歸處理（略）誤差*：指相對(duì)百

11、分誤差=(y- y/y)×100%。y：指標(biāo)實(shí)測(cè)值， y：回歸計(jì)算值   此外y指標(biāo)中有1、5等試驗(yàn)誤差較大，影響了回歸方程的線(xiàn)性顯著性，為此刪去這兩點(diǎn)，結(jié)果見(jiàn)表6。   以總黃酮含量為指標(biāo)y，回歸方程   y=1.908 7-0.862 8A-0.010 9C；   N =7  R =0.913 1  F=10.032 7  S=0.043 8  F0.05（2，4）=6.94   回歸方程線(xiàn)性很顯著。主要影響因素是A，其次是C。表6 

12、; 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果用多元線(xiàn)性回歸處理（略）“*”同前述，“*”表示被刪去的樣品號(hào)表7  正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果用多元線(xiàn)性回歸處理（略）由表7可見(jiàn)優(yōu)化提取條件3次實(shí)驗(yàn)均能達(dá)到正交實(shí)驗(yàn)表中結(jié)果的較高值。表8  驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)（略）實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，螃蟹腳總黃酮含量3次實(shí)驗(yàn)值均高于正交設(shè)計(jì)預(yù)測(cè)值，表明回歸方程能描述本提取工藝系統(tǒng)，優(yōu)化是成功的。3  結(jié)論   通過(guò)超聲提取和回流提取兩種方法比較：回流提取螃蟹腳總黃酮得率高于超聲提取。   對(duì)回流提取實(shí)驗(yàn)采用兩種不同的數(shù)據(jù)處理方式得到的優(yōu)化工藝條件不同，分別是：極差、方差優(yōu)化工藝條件為45%乙醇在60條件

13、下回流提取3次，2 h/次；而多元線(xiàn)性回歸優(yōu)化工藝條件為45%乙醇在60條件下回流提取3次，1 h/次。   由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理結(jié)果顯示出采用極差、方差有如下不足：極差計(jì)算只依賴(lài)于指標(biāo)值，無(wú)法判斷實(shí)驗(yàn)點(diǎn)的誤差大小，此外在進(jìn)行工藝優(yōu)化時(shí)只能從正交設(shè)計(jì)表中找出最好點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)條件作為優(yōu)化條件，未必是真正的優(yōu)化條件。但若采用多元線(xiàn)性回歸計(jì)算，可彌補(bǔ)正交極差、方差計(jì)算的不足。而回歸方程既能明確每個(gè)因素對(duì)指標(biāo)的影響，又可判斷實(shí)驗(yàn)點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)誤差。因而，更有利于結(jié)果解釋和工藝條件的優(yōu)化，較之單純的極差、方差分析更為明顯、可靠?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì)中國(guó)藥典（部）S廣州：廣東科技出版社，19952 趙 晶，賀江萍槲寄生化學(xué)成分及藥理作用研究J天津中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，24(3)：1853 趙啟友，王曉林，張 浩，等扁枝槲寄生的生藥學(xué)鑒定研究J天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā)，1998，11(5)：46 4 陶明