1、常用培養(yǎng)基配方目錄:01糖發(fā)酵管02 ONPG培養(yǎng)基03西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基04緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR和VP試驗(yàn)用05克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基06丙二酸鈉培養(yǎng)基07葡葡糖銨培養(yǎng)基08 Hugh-Leifson培養(yǎng)基(O/F試驗(yàn)用09 馬尿酸鈉培養(yǎng)基10營養(yǎng)明膠11苯丙氨酸培養(yǎng)基12 氨基酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基13蛋白胨水(靛基質(zhì)試驗(yàn)用14 硫酸亞鐵瓊脂(硫化氫試驗(yàn)用15 尿素瓊脂16 氰化鉀(KCN培養(yǎng)基17 氧化酶試驗(yàn)18 硝酸鹽培養(yǎng)基19 細(xì)胞色素氧化酶試驗(yàn)20 過氧化氫酶試驗(yàn)21 過氧化物酶試驗(yàn)22 磷酸鹽緩沖液23明膠磷酸鹽緩沖液24 乳酸-苯酚溶液25 肉浸液肉湯26肉浸液瓊脂27牛肉(或牛

2、心消化湯28血消化湯29豆粉瓊脂30血瓊脂31營養(yǎng)瓊脂32營養(yǎng)肉湯33 乳糖膽鹽發(fā)酵管34乳糖發(fā)酵管35 EC肉湯36 緩沖蛋白胨水(BP37 氯化鎂孔雀綠增菌液(MM38 四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB39 四硫磺酸鈉煌綠增菌液(換用方法40 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC41 GN增菌液42 腸道菌增菌肉湯43 亞硫酸鉍瓊脂(BS44 DHL瓊脂45 HE瓊脂46 SS瓊脂47 WS瓊脂48 麥康凱瓊脂49 伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB50三糖鐵瓊脂(TSI51 三糖鐵瓊脂(換用方法52 克氏雙糖鐵瓊脂(KI53 克氏雙糖鐵瓊脂(換用方法54 葡萄糖半固體發(fā)酵管55 5%乳糖發(fā)酵管56 CAYE培養(yǎng)基5

3、7 Honda氏產(chǎn)毒肉湯58 Elek氏培養(yǎng)基(毒素測定用59 氯化鎂孔雀綠羧芐青霉素培養(yǎng)基60 胰蛋白胨水61 Rustigian氏尿素培養(yǎng)液62 氯化鈉結(jié)晶紫增菌液63 氯化鈉蔗糖瓊脂64 嗜鹽菌選擇性瓊脂65 3.5%氯化鈉三糖鐵瓊脂66 氯化鈉血瓊脂67 3.5%氯化鈉生化試驗(yàn)培養(yǎng)基68 改良磷酸鹽緩沖液(小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌專用69 CIN-1培養(yǎng)基70 嗜鹽性試驗(yàn)培養(yǎng)基01 糖發(fā)酵管成分:牛肉膏5g蛋白胨10g氯化鈉3g磷酸氫二鈉(Na2HPO4·12H2O 2g0.2%滇麝香草酚藍(lán)溶液12mL蒸餾水1000mLpH7.4制法:1葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后,按0.5%加

4、入葡萄糖,分裝于有一個(gè)倒置小管的小試管內(nèi),121高壓滅菌1 5min.2其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后,分裝每瓶100mL,121高壓滅菌15min.另將各種糖類分別配好1 0%溶液,同時(shí)高壓滅菌.將5mL糖溶液加入于100mL培養(yǎng)基內(nèi),以無菌操作分裝小試管.注:蔗糖不純,加熱后會(huì)自行水解者,應(yīng)采用過濾法除菌.試驗(yàn)方法:從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種,于36±1培養(yǎng),一般觀察23d.遲緩反應(yīng)需觀察1430d.02 ONPG培養(yǎng)基成分:鄰硝基酚-D-半乳糖昔(ONPG 60mg(O-Nitrophenyl-D-galactopyranoside0.01mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7

5、.5 10mL1%蛋白胨水(PH7.5 30mL制法:將ONPG溶于緩沖液內(nèi),加入蛋白胨水,以過濾法除菌,分裝于10mm×75mm試管,每管0.5mL,用橡皮塞塞緊.試驗(yàn)方法:自瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物1滿環(huán)接種,于36±1培養(yǎng)13h和24h觀察結(jié)果.如果-半乳糖苷酶產(chǎn)生,則于13h變黃色,如無此酶則24h不變色.03 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基成分:氯化鈉5g硫酸鎂(MgSO4·7H2O 0.2g磷酸二氫銨1g磷酸氫二鉀1g檸檬酸鈉5g瓊脂20g蒸餾水1000mL0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液40mLpH6.8制法:先將鹽類溶解于水內(nèi),校正pH,再加瓊脂,加熱溶化.然后加入指示

6、劑,混合均勻后分裝試管,121高壓滅菌15min.放成斜面.試驗(yàn)方法:挑取少量瓊脂培養(yǎng)物接種,于36±1培養(yǎng)4d,每天觀察結(jié)果.陽性者斜面上有菌落生長,培養(yǎng)基從綠色轉(zhuǎn)為藍(lán)色.04 緩沖葡萄糖蛋白胨水(MR和VP試驗(yàn)用成分:磷酸氫二鉀5g多胨7g葡萄糖5g蒸餾水1000mLpH7.0制法:溶化后校正pH,分裝試管,每管1mL,121高壓滅菌15min.甲基紅(MR試驗(yàn):自瓊脂斜面挑取少量培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中,于36±1培養(yǎng)25d,哈夫尼亞菌則應(yīng)在22 25培養(yǎng).滴加甲基紅試劑一滴,立即觀察結(jié)果.鮮紅色為陽性,黃色為陰性.甲基紅試劑配法:10mg甲基紅溶于30mL95%乙醇中,

7、然后加入20mL蒸餾水.V-P試驗(yàn):用瓊脂培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中,于36±1培養(yǎng)24d.哈夫尼亞菌則應(yīng)在2225培養(yǎng).加入6%-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氫氧化鉀溶液0.2mL,充分振搖試管,觀察結(jié)果.陽性反應(yīng)立刻或于數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色,如為陰性,應(yīng)放在36±1下培養(yǎng)4h再進(jìn)行觀察.05克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基成分:檸檬酸鈉3g葡萄糖0.2g酵母浸膏0.5g單鹽酸半胱氨酸0.1g磷酸二氫鉀1g氯化鈉5g0.2%酚紅溶液6mL瓊脂15g蒸餾水1000mL制法:加熱溶解,分裝試管,121高壓滅菌15min.放成斜面.試驗(yàn)方法:用瓊脂培養(yǎng)物接種整個(gè)斜面,在36±1培養(yǎng)7d,

8、每天觀察結(jié)果.陽性者培養(yǎng)基變?yōu)榧t色.06 丙二酸鈉培養(yǎng)基成分:酵母浸膏1g硫酸銨2g磷酸氫二鉀0.6g磷酸二氫鉀0.4g氯化鈉2g丙二酸鈉3g0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液12mL蒸餾水1000mLpH6.8制法:先將酵母浸膏和鹽類溶解于水,校正pH后再加入指示劑,分裝試管,121高壓滅菌15min.試驗(yàn)方法:用新鮮的瓊脂培養(yǎng)物接種,于36±1培養(yǎng)48h,觀察結(jié)果.陽性者由綠色變?yōu)樗{(lán)色.07 葡葡糖銨培養(yǎng)基成分:氯化鈉5g硫酸鎂(MgSO4·7H2O 0.2g磷酸二氫銨1g磷酸氫二鉀1g葡萄糖2g瓊脂20g蒸餾水1000mL0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液40mLpH6.8制法:先將鹽類

9、和糖溶解于水內(nèi),校正pH,再加瓊脂,加熱溶化,然后加入指示劑,混合均勻后分裝試管,121高壓滅菌15min,放成斜面.試驗(yàn)方法:用接種針輕輕觸及培養(yǎng)物的表面,在鹽水管內(nèi)做成極稀的懸液,肉眼觀察不見混濁,以每一接種環(huán)內(nèi)含菌數(shù)在20100之間為宜.將接種環(huán)滅菌后挑取菌液接種,同時(shí)再以同法接種普通斜面一支作為對照.于36±1培養(yǎng)24h.陽性者葡萄糖銨斜面上有正常大小的菌落生長;陰性者不生長,但在對照培養(yǎng)基上生長良好.如在葡萄糖銨斜面生長極微小的菌落可視為陰性結(jié)果.注:容器使用前應(yīng)用清潔液浸泡.再用清水,蒸餾水沖洗干凈,并用新棉花做成棉塞,干熱滅菌后使用.如果操作時(shí)不注意,有雜質(zhì)污染時(shí),易造

10、成假陽性的結(jié)果.08 Hugh-Leifson培養(yǎng)基(O/F試驗(yàn)用成分:蛋白胨2g氯化鈉5g磷酸氫二鉀0.3g瓊脂4g葡萄糖10g0.2%溴麝香草酚藍(lán)溶液12mL蒸餾水1000mLpH7.2試驗(yàn)方法:從斜面上挑取小量培養(yǎng)物作穿刺接種,同時(shí)接種兩支培養(yǎng)基,其中一支于接種后滴加溶化的1%瓊脂液于表面,高度約1cm,于36±1培養(yǎng).09 馬尿酸鈉培養(yǎng)基成分:馬尿酸鈉1g肉浸液100mL制法:將馬尿酸鈉溶解于肉浸液內(nèi),分裝于小試管內(nèi),并于管壁畫一橫線.以標(biāo)志管內(nèi)液面高度,高壓滅菌12120min.試劑:三氯化鐵(FeCl3·6H2O12g,溶于2%鹽酸溶液100mL中即成.試驗(yàn)方法

11、:用純培養(yǎng)物接種,于42培養(yǎng)48h,觀察培養(yǎng)液是否到達(dá)試管壁上記號處,如不足時(shí),用蒸餾水補(bǔ)足至原量.經(jīng)離心沉淀,吸取上清液0.8mL,加入三氯化鐵試劑0.2mL,立即混合均勻,經(jīng)1015min,觀察結(jié)果.結(jié)果:出現(xiàn)恒久之沉淀物為陽性.10營養(yǎng)明膠成分:蛋白胨5g牛肉膏3g明膠120g蒸餾水1000mLpH6.87.0制法:加熱溶解,校正至pH7.47.6,分裝小管,121高壓滅菌10min,取出后迅速冷卻,使其凝固.復(fù)查最終pH 應(yīng)為6.87.0.試驗(yàn)方法:用瓊脂培養(yǎng)物穿刺接種,放在2225培養(yǎng),每天觀察結(jié)果,記錄液化時(shí)間.或放在36士1培養(yǎng),每天取出,放冰箱內(nèi)30min后再觀察結(jié)果.11苯丙

12、氨酸培養(yǎng)基成分:酵母浸膏3gDI-苯丙氨酸(或L-苯丙氨酸1g 2g磷酸氫二鈉1g氯化鈉5g瓊脂12g蒸餾水1000mL制法:加熱溶解后分裝試管,121高壓滅菌15min,使成斜面.試驗(yàn)方法:自瓊脂斜面上挑取大量培養(yǎng)物,移種于苯丙氨酸瓊脂,在36±1培養(yǎng)4h或1824h.滴加10%三氯化鐵溶液23滴,自斜面培養(yǎng)物上流下,苯丙氨酸脫氨酶陽性者呈深綠色.12 氨基酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基成分:蛋白胨5g酵母浸膏3g葡萄糖1g蒸餾水1000mL1.6%滇甲酚紫-乙醇溶液1mLL-氨基酸或DL-氨基酸0.5或1g/100mLpH6.8試驗(yàn)方法:從瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物接種,于36±1培養(yǎng)1

13、824h,觀察結(jié)果.氨基酸脫羧酶陽性者由于產(chǎn)堿,培養(yǎng)基應(yīng)呈紫色.陰性者無堿性產(chǎn)物,但因葡萄糖產(chǎn)酸而使培養(yǎng)基變?yōu)辄S色.對照管應(yīng)為黃色.13蛋白胨水(靛基質(zhì)試驗(yàn)用成分:蛋白胨(或胰蛋白胨 20g蒸餾水1000mLpH7.4制法:按上述成分配制,分裝小試管,121高壓滅菌15min.靛基質(zhì)試劑柯凡克試劑:將5g對二甲氨基苯甲醛溶解于75mL戊醇中.然后緩慢加入濃鹽酸25mL.歐-波試劑:將1g對二甲氨基苯甲醛溶解于95mL95%乙醇內(nèi).然后緩慢加入濃鹽酸20mL.注:蛋白胨中應(yīng)含有豐富的色氨酸.每批蛋白胨買來后,應(yīng)先用已知菌種鑒定后方可使用.14 硫酸亞鐵瓊脂(硫化氫試驗(yàn)用成分:牛肉膏3g酵母浸膏3

14、g蛋白胨10g硫酸亞鐵0.2g硫代硫酸鈉0.3g氯化鈉5g瓊脂12g蒸餾水1000mLpH7.4制法:加熱溶解,校正pH,分裝試管,115高壓滅菌15min,取出直立候其凝固.試驗(yàn)方法:挑取瓊脂培養(yǎng)物,沿管壁穿刺,于36±1培養(yǎng)12d,觀察結(jié)果.產(chǎn)硫化氫者使培養(yǎng)基變?yōu)楹谏?注:腸桿菌科細(xì)菌測定硫化氫的產(chǎn)生,應(yīng)采用三糖鐵瓊脂或本培養(yǎng)基.15 尿素瓊脂成分:蛋白胨1g氯化鈉5g葡萄糖1g磷酸二氫鉀2g0.4%酚紅溶液3mL瓊脂20g蒸餾水1000mL20%尿素溶液100mLpH7.2±0.1試驗(yàn)方法:挑取瓊脂培養(yǎng)物接種,在36±1培養(yǎng)24h,觀察結(jié)果.尿素酶陽性者由于

15、產(chǎn)堿而使培養(yǎng)基變?yōu)榧t色.16 氰化鉀(KCN培養(yǎng)基成分:氯化鈉5g磷酸二氫鉀0.225g磷酸氫二鈉 5.64g蒸餾水1000mL0.5%氰化鉀溶液20mLpH7.617 氧化酶試驗(yàn)試劑:1%鹽酸二甲基對苯二胺溶液:少量新鮮配制,干冰箱內(nèi)避光保存.1%-萘酚-乙醇溶液.18 硝酸鹽培養(yǎng)基成分:硝酸鉀0.2g蛋白5g蒸餾水1000mLpH7.4制法:溶解,校正pH,分裝試管,每管約5mL,121高壓滅菌15min.硝酸鹽還原試劑:試驗(yàn)方法:接種后在36±1培養(yǎng)14d,加入甲液和乙液各一滴,觀察結(jié)果.硝酸鹽還原為亞硝酸鹽時(shí)于立刻或數(shù)分鐘內(nèi)顯紅色.注:本試驗(yàn)陰性的原因有三:細(xì)菌不能還原硝酸鹽

16、;亞硝酸鹽繼續(xù)分解,生成氨和氮;培養(yǎng)基不適于細(xì)菌的生長.如欲檢查培養(yǎng)基中硝酸鹽是否未被分解,可再加入鋅粉少許,可使硝酸鹽還原為亞硝酸鹽而呈現(xiàn)紅色.19 細(xì)胞色素氧化酶試驗(yàn)試劑:1%鹽酸二甲基對苯二胺溶液.1%-萘酚-乙醇溶液.試驗(yàn)方法:取37(或低于37培養(yǎng)20h的斜面培養(yǎng)物一支,將兩種試劑各23滴,從斜面上端滴下,并將斜面略加傾斜,使試劑混合液流經(jīng)斜面上的培養(yǎng)物.如系平板培養(yǎng)物,則可用試劑混合液滴在菌落上.結(jié)果:于2min內(nèi)呈現(xiàn)藍(lán)色者為陽性.陽性培養(yǎng)物大多數(shù)于半分鐘內(nèi)出現(xiàn)強(qiáng)陽性反應(yīng),2min以后出現(xiàn)微弱或可疑反應(yīng)均作為陰性結(jié)果.20 過氧化氫酶試驗(yàn)試劑:3%過氧化氫溶液:臨用時(shí)配制.試驗(yàn)方法

17、:挑取固體培養(yǎng)基上菌落一接種環(huán),置于潔凈試管內(nèi),滴加3%過氧化氫溶液2mL,觀察結(jié)果.結(jié)果:于半分鐘內(nèi)發(fā)生氣泡者為陽性,不發(fā)生氣泡者為陰性.21 過氧化物酶試驗(yàn)試劑:2%兒茶酚溶液.3%過氧化氫溶液.試驗(yàn)方法:挑取固體培養(yǎng)基上菌落一接種環(huán),置于潔凈試管內(nèi),滴加2%兒茶酚溶液1mL及3%過氧化氫溶液1 mL.靜置于室溫(20中3060min,觀察結(jié)果.結(jié)果:陽性反應(yīng),細(xì)菌變?yōu)楹诤稚?陰性反應(yīng),細(xì)菌不變色.注:過氧化物酶的作用可受氰化鉀的抑制.22 磷酸鹽緩沖液儲(chǔ)存液磷酸二氫鉀34g1mol/L氫氧化鈉溶液175mL蒸餾水825mLpH7.2制法:先將磷酸鹽溶解于500mL蒸餾水中,用1mol/L

18、氫氧化鈉溶液校正pH后,再用蒸餾水稀釋至1000mL. 稀釋液:取儲(chǔ)存液1.25mL,用蒸餾水稀釋至1000mL.分裝每瓶100mL或每管10mL,121高壓滅菌15min.23明膠磷酸鹽緩沖液成分:明膠2g磷酸氫二鈉4g蒸餾水1000mLpH6.2制法:加熱溶解,校正pH,121高壓滅菌15min.24 乳酸-苯酚溶液成分:苯酚10g乳酸(比重1.21 10g甘油20g蒸餾水10mL制法:將苯酚在水中加熱溶解,然后加入乳酸及甘油.用途:檢驗(yàn)真菌形態(tài)時(shí)用.25 肉浸液肉湯成分:絞碎牛肉500g氯化鈉5g蛋白胨10g磷酸氫二鉀2g蒸餾水1000mL制法:將絞碎之去筋膜無油脂牛肉500g加蒸餾水1

19、000mL,混合后放冰箱過夜,除去液面之浮油,隔水煮沸半小時(shí),使肉渣完全凝結(jié)成塊,用絨布過濾,并擠壓收集全部濾液,加水補(bǔ)足原量.加入蛋白胨,氯化鈉和磷酸鹽,溶解后校正pH7.47.6煮沸并過濾,分裝燒瓶,121高壓滅菌30min.26肉浸液瓊脂成分:肉浸液肉湯(PH7.4 1000mL瓊脂1720g制法:加熱溶化瓊脂,分裝燒瓶或試管,121高壓滅菌30min.根據(jù)需要,傾注平板或放成斜面.27牛肉(或牛心消化湯成分:絞碎牛肉(或牛心 1000g15%氫氧化鈉溶液27mL胰蛋白酶40mL三氯甲烷1mL氯化鈉10g蒸餾水2000mL制法:1 稱取碎牛肉,加蒸餾水,隔水加熱到80,維持15min.2

20、 加氫氧化鈉溶液,對pH試紙呈弱堿性,冷至40.3 加胰蛋白酶,氯仿,在36±1放置45h,每小時(shí)搖動(dòng)一二次.4 4h后,吸取上層液5mL于試管中,加5%硫酸銅溶液0.1mL,4%氫氧化鈉溶液5mL,混合之.若呈紅色,則不須再消化,可由溫箱取出.5 加入15%乙酸溶液45mL,對pH試紙呈酸性.6 煮沸15min,使胰蛋白酶破壞,冷后,放冰箱內(nèi)一夜.7 次日吸取上層清液,加氯化鈉10g,并加水補(bǔ)足原量,煮沸.8 校正pH7.47.6(加15%氫氧化鈉溶液約10mL,加熱,用濾紙過濾,分裝燒瓶,121高壓滅菌20min.注:此培養(yǎng)基可作為瓊脂培養(yǎng)基的基礎(chǔ),不需加蛋白胨.28血消化湯成分

21、:絞碎豬胃100g絞碎豬血塊100g蒸餾水1000mL濃鹽酸10mL制法:1 洗滌豬胃,除去油脂,保留胃粘膜,用絞肉機(jī)絞碎.2 用絞肉機(jī)將豬血塊絞碎.3 將蒸餾水加熱至55,加入豬胃,豬血塊和鹽酸,置55水浴中24h,時(shí)常加以搖動(dòng).4 從水浴內(nèi)取出,加入1moL/L碳酸鈉溶液5mL,煮沸10min,置于冰箱內(nèi)一夜.5 吸取上層清液,加磷酸氫二鉀1g,加熱至75,加入1mol/L碳酸鈉溶液45mL,煮沸,校正pH7.27.4.6 用濾紙過濾,分裝燒瓶,121高壓滅菌20min.29豆粉瓊脂成分:牛心消化湯(PH7.47.6 1000mL瓊脂20g黃豆粉浸液50mL制法:將瓊脂加在牛心消化湯內(nèi),加

22、熱溶解,過濾.加入豌豆粉浸液,分裝每瓶100mL,121高壓滅菌15min.豌豆粉浸液制法:取豌豆粉5g,氯化鈉10g,加入蒸餾水100mL.置100水浴內(nèi)加熱1h,放于冰箱中過夜.吸取上清液即為豌豆浸液.30血瓊脂成分:pH7.47.6豆粉瓊脂100mL脫纖維羊血(或兔血 510mL制法:加熱溶化瓊脂,冷至50,以滅菌手續(xù)加入脫纖維羊血,搖勻,傾注平板.亦可分裝滅菌試管,置成斜面.亦可用其他營養(yǎng)豐富的基礎(chǔ)培養(yǎng)基配制血瓊脂.31營養(yǎng)瓊脂成分:蛋白胨10g牛肉膏3g氯化鈉5g瓊脂1520g蒸餾水1000mL注:此培養(yǎng)基可供一般細(xì)菌培養(yǎng)之用,可傾注平板或制成斜面.如用于菌落計(jì)數(shù),瓊脂量為1.5%;

23、如作成平板或斜面,則應(yīng)為2%.32營養(yǎng)肉湯成分:蛋白陳10g牛肉膏3g氯化鈉5g蒸餾水1000mLpH7.4制法:按上述成分混合,溶解后校正pH,分裝燒瓶,每瓶225mL,121高壓滅菌15min.33 乳糖膽鹽發(fā)酵管成分:蛋白胨20g豬膽鹽(或牛,羊膽鹽 5g乳糖10g0.04%滇甲酚紫水溶液25mL蒸餾水1000mLpH7.4制法:將蛋白胨,膽鹽及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示劑,分裝每管10mL,并放入一個(gè)小倒管,115高壓滅菌15min.注:雙料乳糖膽鹽發(fā)酵管除蒸餾水外,其他成分加倍.34乳糖發(fā)酵管成分:蛋白胨20g乳糖10g0.04%溴甲酚紫水溶液25mL蒸餾水1000mLpH7.

24、4制法:將蛋白胨及乳糖溶于水中,校正pH,加入指示劑,按檢驗(yàn)要求分裝30mL,10mL或3mL,并放入一個(gè)小倒管,115高壓滅菌15min.注:雙料乳糖發(fā)酵管除蒸餾水外,其他成分加倍.30mL和10mL乳糖發(fā)酵管專供醬油及醬類檢驗(yàn)用,3mL乳糖發(fā)酵管供大腸菌群證實(shí)試驗(yàn)用.35 EC肉湯成分:胰蛋白胨20g3號膽鹽(或混合膽鹽 1.5g乳糖5g磷酸氫二鉀4g磷酸二氫鉀 1.5g氯化鈉5g蒸餾水1000mL制法:將上述成分混合,溶解后,分裝有發(fā)酵倒管的試管中,121高壓滅菌15min,最終pH為6.9±0.2.36 緩沖蛋白胨水(BP成分:蛋白胨10g氯化鈉5g磷酸氫二鈉(Na2HPO4

25、·12H2O 9g磷酸二氫鉀 1.5g蒸餾水1000mLpH7.2制法:按上述成分配好后以大燒瓶裝,121高壓滅菌15min.臨用時(shí)無菌分裝每瓶225mL.注:本培養(yǎng)基供沙門氏菌前增菌用.37 氯化鎂孔雀綠增菌液(MM甲液胰蛋白胨5g氯化鈉8g磷酸二氫鉀 1.6g蒸餾水1000mL乙液氯化鎂(化學(xué)純 40g蒸餾水100mL0.4%孔雀綠水溶液.制法:分別按上述成分配好后,121高壓滅菌15min備用.臨用時(shí)取甲液90mL,乙液9mL,丙液0.9mL,以無菌操作混合即可.注:本培養(yǎng)基亦稱Rappaport 10(R10增菌液.38 四硫磺酸鈉煌綠增菌液(TTB基礎(chǔ)培養(yǎng)基多胨或眎胨5g膽

26、鹽1g碳酸鈣10g硫代硫酸鈉30g蒸餾水1000mL碘溶液碘6g碘化鉀5g蒸餾水20mL制法:將基礎(chǔ)培養(yǎng)基的各成分加入蒸餾水中,加熱溶解,分裝每瓶100mL.分裝時(shí)應(yīng)隨時(shí)振搖,使其中的碳酸鈣混勻.121高壓滅菌15min備用.臨用時(shí)每100mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基中加入碘溶液2mL,0.1%煌綠溶液1mL.39 四硫磺酸鈉煌綠增菌液(換用方法基礎(chǔ)液:蛋白胨10g牛肉膏5g氯化鈉3g碳酸鈣45g蒸餾水1000mL將各成分加入于蒸餾水中,加熱至約70溶解,校正pH至7.0±0.1,121高壓滅菌20min.硫代硫酸鈉溶液硫代硫酸鈉(Na2S2O3·5H2O 50g蒸餾水加至100mL碘溶

27、液碘片20g碘化鉀25g蒸餾水加至100mL將碘化鉀充分溶解于是少量的蒸餾水中,加入碘片,振搖玻瓶至碘片全部溶解,再加入蒸餾水至規(guī)定量.貯于棕色玻瓶內(nèi),緊塞瓶蓋備用.煌綠水溶液煌綠0.5g蒸餾水100mL存放暗處,不少于1d,使其自然滅菌.牛膽鹽溶液干燥的牛膽鹽10g蒸餾水100mL煮沸溶解,121高壓滅菌20min.制備:基礎(chǔ)液900mL硫代硫酸鈉溶液100mL碘液20mL煌綠溶液2mL牛膽鹽溶液50mL臨用前,按上列順序,以無菌操作依次加入于基礎(chǔ)液中,每加入一種成分,均應(yīng)搖勻后再加入另一種成分.分裝于滅菌瓶中,每瓶100mL.40 亞硒酸鹽胱氨酸增菌液(SC成分:蛋白胨5g乳糖4g亞硒酸氫

28、鈉4g磷酸氫二鈉 5.5g磷酸二氫鉀 4.58L-胱氨酸0.01g蒸餾水1000mL1%L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液的配法:稱取L-胱氨酸0.1g(或DL-胱氨酸0.2g,加1mol/L氫氧化鈉1.5mL,使溶解,再加入蒸餾水8.5mL即成.制法:將除亞硒酸氫鈉和L-胱氨酸以外的各成分溶解于900mL蒸餾水中,加熱煮沸,俟冷備用.另將亞硒酸氫鈉溶解于100mL蒸餾水中,加熱煮沸,候冷,以無菌操作與上液混合.再加入1%L-胱氨酸-氫氧化鈉溶液1mL.分裝于滅菌瓶中,每瓶100mL,pH應(yīng)為7.0±0.1.41 GN增菌液成分:胰蛋白胨20g葡萄糖1g甘露醇2g檸檬酸鈉5g去氧膽酸鈉0.5g

29、磷酸氫二鉀4g磷酸二氫鉀 1.5g氯化鈉5g蒸餾水1000mLpH7.0制法:按上述成分配好,加熱使溶解,校正pH.分裝每瓶225mL,115高壓滅菌15min.42 腸道菌增菌肉湯成分:蛋白胨1 10g葡萄糖5g牛膽鹽20g磷酸氫二鈉8g磷酸二氫鉀2g煌綠0.015g蒸餾水1000mLpH7.2制法:按上述成分配好,加熱使溶解,校正pH.分裝每瓶30mL,115高壓滅菌15min.43 亞硫酸鉍瓊脂(BS成分:蛋白胨10g牛肉膏5g葡萄糖5g硫酸亞鐵0.3g磷酸氫二鈉4g煌綠0.025g檸檬酸鉍銨2g亞硫酸鈉6g瓊脂1820g蒸餾水1000mLpH7.5制法:1 將前面5種成分溶解于300m

30、L蒸餾水中.2 將檸檬酸鉍銨和亞硫酸鈉另用50mL蒸餾水溶解.3 將瓊脂于600mL蒸餾水中煮沸溶解,冷至8044 DHL瓊脂成分:蛋白胨20g牛肉膏3g乳糖10g蔗糖10g去氧膽酸鈉1g硫代硫酸鈉 2.3g檸檬酸鐵銨1g中性紅0.03g瓊脂1820g蒸餾水1000mLpH7.3制法:將除中性紅和瓊脂以外的成分溶解于400mL蒸餾水中,校正pH. 再將瓊脂于600mL蒸餾水中煮沸溶解,兩液合并,并加入0.5%中性紅水溶液6mL,待冷至5055,傾注平板.45 HE瓊脂成分:脙胨12g牛肉膏3g乳糖12g蔗糖12g水楊素2g膽鹽20g氯化鈉5g瓊脂1820g蒸餾水1000mL0.4%溴麝香草酚藍(lán)

31、溶液16mLAndrade指示劑20mL甲液20mL乙液20mLpH7.5制法:將前面七種成分溶解于400mL蒸餾水內(nèi)作為基礎(chǔ)液;將瓊脂加入于600mL蒸餾水內(nèi),加熱溶解.加入甲液和乙液于基礎(chǔ)液內(nèi),校正pH.再加入指示劑,并與瓊脂液合并,待冷至5055,傾注平板.注:此培養(yǎng)基不可高壓滅菌.甲液的配制硫代硫酸鈉34g檸檬酸鐵銨4g蒸餾水100mL乙液的配制去氧膽酸鈉10g蒸餾水100mLAndrade指示劑酸性復(fù)紅0.5g1mol/L氫氧化鈉溶液16mL蒸餾水100mL將復(fù)紅溶解于蒸餾水中,加入氫氧化鈉溶液.數(shù)小時(shí)后如復(fù)紅褪色不全,再加氫氧化鈉溶液12mL.46 SS瓊脂基礎(chǔ)培養(yǎng)基:牛肉膏5g眎

32、胨5g瓊脂17g蒸餾水1000mL再將兩液混合,121高壓滅菌15min,保存?zhèn)溆?完全培養(yǎng)基:基礎(chǔ)培養(yǎng)基100mL乳糖10g檸檬酸鈉8.5g硫代硫酸鈉8.5g10%檸檬酸鐵溶液10mL1%中性紅溶液2.5mL0.1%煌綠溶液0.33mL加熱溶化基礎(chǔ)培養(yǎng)基,按比例加入上述染料以外之各成分,充分混合均勻,校正至pH7.0,加入中性紅和煌綠溶液,傾注平板.注:制好的培養(yǎng)基宜當(dāng)日使用,或保存于冰箱內(nèi)于48h內(nèi)使用.煌綠溶液配好后應(yīng)在10d以內(nèi)使用.可以購用SS瓊脂的干燥培養(yǎng)基.47 WS瓊脂成分:胨12g牛肉膏3g氯化鈉5g乳糖12g蔗糖12g十二烷基硫酸鈉2g瓊脂15gAndrade指示劑20mL

33、0.4%溴麝香草酚藍(lán)溶液16mL甲液20mL蒸餾水1000mLpH7.0制法:除指示劑和甲液外,將其他成分加熱溶解,不需消毒,校正pH后加入指示劑和甲液,傾注平板應(yīng)呈草綠色.注:供沙門氏菌分離用.Andrade指示劑和甲液的配制均見HE瓊脂.48 麥康凱瓊脂成分:蛋白胨17g眎胨3g豬膽鹽(或牛,羊膽鹽 5g氯化鈉5g瓊脂17g蒸餾水1000mL0.01%結(jié)晶紫水溶液10mL0.5%中性紅水溶液5mL制法:加熱溶解.將兩液合并,分裝于燒瓶內(nèi),121高壓滅菌15min備用.2 臨用時(shí)加熱溶化瓊脂,趁熱加入乳糖,冷至5055時(shí),加入結(jié)晶紫和中性紅水溶液,搖勻后傾注平板.注:結(jié)晶紫及中性紅水溶液配好

34、后須經(jīng)高壓滅菌.49 伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB成分:蛋白胨10g乳糖10g磷酸氫二鉀2g瓊脂17g2%伊紅Y溶液20mL0.65%美藍(lán)溶液10mL蒸餾水1000mLpH7.1制法:將蛋白胨,磷酸鹽和瓊脂溶解于蒸餾水中,校正pH,分裝于燒瓶內(nèi),121高壓滅菌15min備用.臨用時(shí)加入乳糖并加熱溶化瓊脂,冷至5055,加入伊紅和美藍(lán)溶液,搖勻,傾注平板.50三糖鐵瓊脂(TSI成分:蛋白胨20g牛肉膏5g乳糖10g蔗糖10g葡萄糖1g氯化鈉5g硫酸亞鐵銨Fe(NH42(SO42·6H2O0.2g硫代硫酸鈉0.2g瓊脂12g酚紅0.025g蒸餾水1000mLpH7.451 三糖鐵瓊脂(換用方法成

35、分:蛋白胨15g眎胨5g牛肉膏3g酵母膏3g蔗糖10g葡萄糖1g氯化鈉5g硫酸亞鐵0.2g硫代硫酸鈉0.3g瓊脂12g酚紅0.025g蒸餾水1000mLpH7.452 克氏雙糖鐵瓊脂(KI上層培養(yǎng)基成分血消化湯(pH7.6 500mL瓊脂 6.5g硫代硫酸鈉0.1g硫酸亞鐵銨0.1g乳糖5g0.2%酚紅溶液5mL下層培養(yǎng)基成分血消化湯(pH7.6 500mL瓊脂2g葡萄糖1g0.2%酚紅溶液5mL制法:1 取血消化湯按上層和下層的瓊脂用量,分別加入瓊脂,加熱溶解.2 分別加入其他各種成分.將上層培養(yǎng)基分裝于燒瓶內(nèi);將下層培養(yǎng)基分裝于滅菌12mm×100mm試管內(nèi),每管約2mL.115

36、高壓滅菌10min.3 將上層培養(yǎng)基放在56水浴箱內(nèi)保溫;將下層培養(yǎng)基直立放在室溫內(nèi),使其凝固.4 當(dāng)下層培養(yǎng)基凝固后,以無菌手續(xù)將上層培養(yǎng)基分裝于下層培養(yǎng)基的上面,每管約1.5mL,放成斜面.53 克氏雙糖鐵瓊脂(換用方法成分:蛋白胨20g牛肉膏3g酵母膏3g乳糖10g葡萄糖1g氯化鈉5g檸檬酸鐵銨0.5g硫代硫酸鈉0.5g瓊脂12g蒸餾水1000mLpH7.454 葡萄糖半固體發(fā)酵管成分:蛋白胨1g牛肉膏0.3g氯化鈉0.5g1.6%溴甲酚紫酒精溶液0.1mL葡萄糖1g瓊脂0.3g蒸餾水100mLpH7.4制法:將蛋白胨,牛肉膏和氯化鈉加入于水中,校正pH后加入瓊脂加熱溶解,再加入指示劑和

37、葡萄糖,分裝小試管,滅菌12115 min.55 5%乳糖發(fā)酵管成分:蛋白胨0.2g氯化鈉0.5g乳糖5g2%溴麝香草酚藍(lán)水溶液1.2mL蒸餾水100mLpH7.4制法:除乳糖以外的各成分:溶解于50mL蒸餾水內(nèi),校正pH.將乳糖溶解于另外50mL蒸餾水內(nèi),分別滅菌12 115min,將兩液混合,以無菌操作分裝于滅菌小試管內(nèi).注:在此培養(yǎng)基內(nèi),大部分乳糖遲緩發(fā)酵的細(xì)菌可于1d內(nèi)發(fā)酵.56 CAYE培養(yǎng)基此培養(yǎng)基附在腸毒素診斷試劑盒內(nèi),如無此培養(yǎng)基,亦可用Honda氏產(chǎn)毒肉湯.57 Honda氏產(chǎn)毒肉湯成分:水解酪蛋白20g酵母浸膏粉10g氯化鈉 2.5g磷酸氫二鈉15g葡萄糖5g微量元素0.5

38、mL蒸餾水1000mLpH7.5 制法:溶解后校正 pH,高壓滅菌 121 15min,待冷至 4550時(shí),加入林可霉素溶液,每毫升培養(yǎng)基內(nèi)含 90g. 微量元素配方:硫酸鎂 5g,氯化鐵 0.5g,氯化鉆 2g,蒸餾水 100mL 58 Elek 氏培養(yǎng)基(毒素測定用 成分: 胨 20g 麥芽糖 3g 乳糖 0.7g 氯化鈉 5g 瓊脂 15g 40%氫氧化鈉溶液 1.5mL 蒸餾水 1000mL pH7.8 制法:用 500mL 蒸餾水溶解瓊脂以外的成分,煮沸,并用濾紙過濾.用 1mo1/L 氫氧化鈉校正 pH.用另外 500mL 蒸餾水加熱溶解瓊脂.將兩液混合,分裝試管 10mL 或 2

39、0mL.121高壓滅菌 15min.臨用時(shí)加熱溶化瓊脂傾注 平板. 59 氯化鎂孔雀綠羧芐青霉素培養(yǎng)基 成分: 甲液:胰蛋白胨 10g 蒸餾水 1000mL 乙液:磷酸氫二鈉 9.5g 蒸餾水 1000mL 丙液:氯化鎂(MgCl2· 6H2O 40g 蒸餾水 400mL 以上分別在 121滅菌 15min. 丁液:孔雀綠 0.2g 蒸餾水 100mL 戊液:羧芐青霉素 1mg/mL 制法:取甲液 620mL,乙液 160mL,丙液 212mL 混合,再加入丁液 6.4mL 和戊液 2.4mL,即為 1000mL 培養(yǎng)基.分 裝滅菌燒瓶,每瓶 100mL,或滅菌試管 10mL. 60 胰蛋白胨水 成分: 胰蛋白胨 10g 蒸餾水 1000mL pH7.0 制法:將上述成分溶解,校正 pH.分裝試管,121高壓滅菌 15min. 61 Rustigian 氏尿素培養(yǎng)液 成分: 尿素 20.0g 酵母浸膏 0.1g 磷酸二氫鉀(KH2PO4