1、高效液相色譜法測定普盧利沙星片的含量和有關物質                 作者:王琦，李志峰，徐艷麗，裴月湖【摘要】 目的 采用高效液相色譜法建立普盧利沙星片有關物質檢查及其含量測定方法。方法 Diamonsil-C18柱（4.6mm×200mm， 5m），以0.01molL三乙胺的水溶液（用磷酸調節pH為2.8）-乙腈（73：27）為流動相；檢測波長278nm；流速1.0mlmin；柱溫30；進樣量10l。結果 制劑中

2、輔料對主藥測定無干擾，普盧利沙星與有關物質完全分離。在10.0200.0g/ml范圍內峰面積與濃度呈良好的線性關系。精密度（RSD=0.13%）良好。平均回收率為99.6%。結論 本方法簡便，迅速，準確，專屬性強。【關鍵詞】 普盧利沙星；片劑；高效液相色譜法；含量測定；有關物質Determination of prulifloxacin and its related substances in tablets by HPLC【Abstract】 Objective To establish an HPLC-UV method for the determination of pruliflo

3、xacin and its related substances in tablets. Methods Diamonsil-C18 column (4.6mm×200mm， 5m) was used. The mobile phase is consisted of 0.01molLtriethylamine (pH was adjusted to 2.8 using phosphoric acid)-acetonitrile (7327). The flow rate was 1.0 mlmin with UV detection at 278nm. The column tem

4、perature was 30. The injection volume was 10l.Results The linear range for the content of prulifloxacin was 10.0200.0g/ml (r=0.9999 3，n=5). The recoveries of prulifloxacin tablets were 99.6%，and its RSDs were 0.14 %.Conclusion The method is sample， efficient，ac 【Key words】 prulifoxacin； tablets； HPL

5、C；content determination； related substances普盧利沙星是新的廣譜氟喹諾酮抗菌藥NM-394 的前體藥物，可改善口服后的胃腸吸收程度。本品對革蘭陰性菌和陽性菌均有效，特別是對綠膿桿菌、沙雷氏菌、腸桿菌屬等革蘭陰性菌具有較強的抗菌力，尤其是對綠膿桿菌的抗菌活性優于其他所有同類藥物，也超過目前上市的其他抗生素藥物。本品毒副作用小，口服吸收好，反復給藥在體內無蓄積性。有文獻報道其原料和膠囊含量的高效液相測定方法1，采用其方法測定本品其分離及峰形均不理想，遂在其基礎上略加調整制定本法，本文采用高效液相色譜法測定普盧利沙星片劑的含量及其有關物質，方法專屬性強，靈敏

6、度高，重復性好。1 儀器、試藥與實驗樣品高效液相色譜儀(HITACHI UV-VIS Detector L-7420，Pump L-7110)；普盧利沙星對照品（純度：99.6%，歸一化法），普盧利沙星片劑：132.1mg（批號：20050801、20050802、20050803，自制 ）；乙腈為色譜純，磷酸和三乙胺為分析純，水為二次蒸餾水。2 實驗方法2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil-C18 (4.6mm×200mm， 5m)；流動相：0.01 mol/L三乙胺的水溶液（用磷酸調節pH為2.8）-乙腈（73：27）；流速1.0 ml/min；檢測波長278nm；柱溫3

7、0；進樣量10l。2.2 系統適用性實驗 取流動相10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖。取處方量輔料適量和普盧利沙星片，按“2.9”項下操作，記錄色譜圖。另取普盧利沙星對照品適量，精密稱定，用流動相配成濃度約為100g/ml的溶液，取10l注入液相色譜儀，記錄色譜圖。取普盧利沙星適量，分別進行酸、堿、高溫（熱）、光照破壞處理后，各進樣10l，色譜圖見圖1。實驗結果表明，在“2.1”項的色譜條件下，流動相、輔料對測定無干擾，普盧利沙星經酸、堿、高溫、光照破壞后，均有明顯的分解產物峰，但分解產物均與主峰有良好的分離度，不影響測定。色譜柱理論塔板數按普盧利沙星計算不得少于5000。A-空白溶液；B-對照

8、品溶液；C-片劑溶液；D-堿破壞；E-酸破壞；F-高熱破壞；G-光照破壞；1-普盧利沙星2.3 線性實驗 精密量取對照品約25mg，置25ml棕色量瓶中，加乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。分別精密量取貯備液適量，以乙腈分別稀釋至濃度為10.0、20.0、40.0、80.0、120.0、160.0、200.0g/ml的溶液，各取10l進樣，記錄色譜圖，以濃度（C，g/ml）為橫坐標，峰面積（A）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程：A=21549C+191，r=0.9999，可見在普盧利沙星10.0200.0 (此 資 料 轉 貼 于 ) g/ml范圍內線性良好。2.4 精密度實驗 配制濃度

9、約為100g/ml的普盧利沙星對照品溶液，進樣10l，連續進樣6次，記錄峰面積，RSD為0.14%。2.5 重現性實驗 取20050801批樣品，按“2.9”項下操作平行測定6次，計算其含量分別為標示量的100.2%、100.2%、100.1%、100.1%、100.0%、99.9%，平均值為100.1%，RSD為0.13%。2.6 穩定性實驗 按“2.9”項下方法，取供試品溶液一份，于室溫下放置，每隔1h進樣1次，連續進樣6h，進樣量為10l，記錄峰面積，RSD=0.66%，說明樣品溶液在6h內較穩定。2.7 回收率實驗 按處方，取高（120%）、中（100%）、低（80%）三種量的普盧利沙

10、星對照品，分別加入處方量的輔料于同一100ml棕色量瓶中，加乙腈適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密取溶液10l進樣，記錄峰面積，并計算回收率，每個濃度測定3份，結果分別為98.5、99.7、101.6，RSD分別為0.83%、0.89%、0.63%（n=3）。2.8 最低檢測限 在選定的色譜條件下，按信噪比為3對最低檢測限進行測定，結果表明，最小檢出量0.05g/ml。2.9 含量測定 取普盧利沙星對照品約10mg，精密稱定，置100ml棕色量瓶中，乙腈溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液。取本品適量(約相當于普盧利沙星10mg)，精密稱定，置100ml棕色量瓶中，用乙腈溶解，并稀釋至刻

11、度，搖勻，作為供試品溶液。精密吸取對照溶液和供試品溶液各10l，注入高效液相色譜儀，測定，按外標法以峰面積計算，即得。3批樣品的含量分別為標示量的99.7%、100.3%、100.0%。2.10 有關物質測定 取本品適量，加流動相稀釋成每1ml中約含500.0g的溶液作為供試品溶液。取供試品溶液加流動相稀釋成每1ml中約含5.0g的溶液作為對照溶液。精密吸取對照溶液10l注入高效液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分色譜峰高約為滿量程的20%。精密吸取供試品溶液10l注入高效液相色譜儀， 記錄色譜圖（圖2）至主成分峰保留時間的2.5倍，用峰面積歸一化法計算雜質含量2。供試品溶液中各雜質峰面積之和不得大于對照溶液主峰面積的1.0%。用自身對照法2計算三批樣品雜質峰面積總和分別為0.36%、0.36%、0.33%。3 討論3.1 檢測波長的選擇 對各輔料和普盧利沙星分別在200400nm波長處進行紫外掃描，結果發現，普盧利沙星在波長為278nm處有最大紫外吸收，而在此波長下輔料沒有吸收，不會干擾測定'' >高效液相色譜法測定普盧利沙星片的含量和有關物質(3) 圓?78nm。3.2 流動相的選擇 由于普盧利沙星具有酸性，單獨用乙腈-水作流動相時色譜峰拖尾嚴重、峰形不好、分離效果差。加入0.01mol/