1、1.概述:培養基是微生物試驗的基礎，直接影響微生物試驗結果。適宜的培養基制備方法、貯藏條件和質量控制是提供優質培養基的保證。供試品微生物限度檢查中所使用的培養基應進行適用性檢查。2.驗證目的：本次驗證的目的是確認需氧菌總數、霉菌及酵母菌總數檢查用的胰酪大豆胨瓊脂培養基、胰酪大豆胨液體培養基、沙氏葡萄糖瓊脂培養基的質量，以及其制備程序、保存條件等是否滿足微生物限度檢查用要求。3.驗證依據：中國藥典2015年版四部“非無菌產品微生物限度檢查：微生物計數法”、“9203 藥品微生物實驗室質量管理指導原則”。4.驗證項目：胰酪大豆胨瓊脂培養基、胰酪大豆胨液體培養基、沙氏葡萄糖瓊脂培養基的適用性檢查。5

2、.適用范圍：成品培養基、由脫水培養基或按處方配制的培養基均應進行培養基適用性檢查。6.驗證周期：除另有規定外，在實驗室中，若采用已驗證的配制和滅菌程序制備培養基且過程受控，那么同一批脫水培養基的適用性檢查試驗可以只進行一次。如果培養基的制備過程未經驗證，那么每一滅菌批培養基均要進行適用性檢查試驗。7.驗證小組人員及職責：小組人員職務姓 名簽字所在部門職 務組 長質量部質量總監組 員質量控制實驗室QC主任組 員質量控制實驗室微生物QC 7.1驗證小組人員:7.2驗證人員職責及要求7.2.1按驗證方案及相關文件實施驗證。7.2.2認真觀察并做好驗證原始記錄。7.2.3對實施驗證的結果負責。7.3驗

3、證中各部門的職責7.3.1驗證領導組職責7.3.1.1制訂驗證總計劃，負責全公司驗證工作的管理。7.3.1.2確定驗證項目及驗證項目負責人。7.3.1.3負責驗證方案的批準工作。7.3.1.4負責驗證資料及結果的審核工作。7.3.1.5負責驗證報告的批準工作。7.3.2驗證項目小組職責7.3.2.1負責驗證方案的起草工作。7.3.2.2參與驗證方案的討論、確認工作。7.3.2.3負責驗證方案的實施。7.3.2.4負責驗證結果的分析、統計、報告工作。7.3.2.5參與驗證結果的評價工作。7.3.3質量部職責7.3.3.1負責公司驗證日常管理工作。7.3.3.2負責驗證方案的審核工作。7.3.3.

4、3負責驗證過程中儀器、儀表、計量器具的校驗工作。7.3.3.4負責檢驗儀器及檢驗方法的驗證。7.3.3.5負責驗證中各項檢測工作，提供驗證的檢驗記錄、檢驗報告，對驗證過程中的各項檢驗工作負責。7.3.3.6負責對驗證人員的培訓、考核工作。7.3.3.7負責驗證資料和報告的審核工作。7.3.3.8負責驗證文件回收、歸檔管理工作。 8.合格標準：8.1被檢固體培養基上的菌落平均數與對照培養基上的菌落平均數的比值應在0.5-2范圍內，且菌落形態大小應與對照培養基上的菌落一致；8.2被檢液體培養基管與對照培養基管比較，試驗菌應生長良好。9.驗證實施條件9.1驗證方案培訓：在驗證實施前，應對參與驗證的人

5、員進行驗證方案以及與驗證相關的文件進行培訓，確保相關人員掌握了驗證的相關要求與知識。9.2微生物限度檢測室：檢驗所使用的檢測室應經過HVAC系統確認，并符合要求。9.3檢驗用水：驗證過程使用的純化水其制備系統應經過確認并符合要求，純化水質量應經過檢驗并符合中國藥典2015年版二部的要求。9.4檢驗儀器設備：驗證涉及的檢驗儀器（設備）與檢驗方法，應經過技術監督局校驗合格或者公司確認/驗證合格。9.5驗證菌種：驗證所使用的菌種，其種類與傳代次數應符合中國藥典的相關要求。菌種情況見附件2:菌種確認。 10.驗證過程10.1菌液制備10.1.1取經30-35培養18-24h的銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球

6、菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養物1ml加入9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍遞增稀釋至10-6-10-8，約為100cfu/ml的菌懸液備用。10.1.2取經20-25培養2-3天的白色念珠菌、黑曲霉的液體培養物1ml, 加入9ml0.9%無菌氯化鈉溶液中，10倍遞增稀釋至10-5-10-8，約為100cfu/ml的菌懸液備用。10.2實驗操作10.2.1胰酪大豆胨瓊脂培養基：取11個無菌平皿，分別接種上述銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接種1ml菌液（接種量100cfu），另1平皿不接種菌作為空白對照，傾注對照胰酪大豆胨瓊脂培養基，混勻，凝固后于30

7、35倒置培養，培養時間不超過3天（白色念珠菌、黑曲霉培養時間不超過5天），計數；被檢培養基同法操作。10.2.2胰酪大豆胨液體培養基：新鮮配制10ml/支的對照胰酪大豆胨液體培養基7支，121滅菌15min，備用。取6支，分別接種上述銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌各2支，每支接種1ml菌液（接種量100cfu），另1支不接種菌作為空白對照；被檢培養基同法操作。置3035培養，培養時間不超過3天，分別觀察結果。10.2.3沙氏葡萄糖瓊脂培養基：取5個無菌平皿，分別接種上述白色念珠菌、黑曲霉各2皿，每皿接種1ml菌液（接種量100cfu），另1平皿不接種菌作為空白對照，傾注對照沙氏葡萄

8、糖瓊脂培養基，混勻，凝固后于2025倒置培養培養，培養時間不超過5天，計數；被檢培養基同法操作。10.3.檢查結果：見附件5：計數用培養基適用性檢查結果11.異常情況與偏差處理：當出現偏差時，應按偏差處理管理規程進行處理。12.驗證結果評定、結論與建議驗證小組組長負責收集各項驗證、試驗記錄，根據驗證、試驗結果對驗證效果進行綜合評審，起草驗證報告、做出驗證結論。對驗證結果的評審應包括以下內容：12.1驗證試驗是否有遺漏？12.2驗證實施過程中對驗證方案有無修改？修改原因、依據以及是否經過批準？12.3驗證記錄是否完整？12.4驗證試驗結果是否符合標準要求？偏差及對偏差的說明是否合理？是否需要進一

9、步補充試驗？13.附件13.1 附件1:驗證實施條件確認13.2 附件2:培養基確認13.3 附件3:菌種確認13.4 附件4:菌液濃度確定13.5 附件5:計數用培養基適用性檢查結果13.6 附件6:驗證結果審批表附件1： 設施設備驗證確認設施設備名稱驗證報告編號驗證結果實驗室HVAC系統純化水系統LDZX-40A型立式自控電熱壓力蒸汽滅菌器PSH-500A型生化培養箱303AS-2型電熱恒溫隔水式培養箱SW-CJ-1C型雙人凈化工作臺確認結論： 確認人： 確認日期：附件2： 培養基確認培養基名稱來源批號有效期至胰酪大豆胨瓊脂培養基胰酪大豆胨液體培養基沙氏葡萄糖瓊脂培養基胰酪大豆胨瓊脂對照培

10、養基胰酪大豆胨液體對照培養基沙氏葡萄糖瓊脂對照培養基確認結論： 確認人： 確認日期：附件3： 菌種確認培養基名稱來源批號枯草芽孢桿菌CMCC(B) 63 501 銅綠假單胞菌 CMCC(B)10 104金黃色葡萄球菌 CMCC(B) 26 003白色念珠菌 CMCC(F) 98 001黑曲霉CMCC(F) 98 003確認結論： 確認人： 確認日期：附件4：菌液濃度確定10-310-410-510-610-7銅綠假單胞菌皿1皿2金黃色葡萄球菌皿1皿2大腸埃希菌皿1皿2枯草芽孢桿菌皿1皿2白色念珠菌皿1皿2白色念珠菌（沙氏）皿1皿2黑曲霉皿1皿2黑曲霉（沙氏）皿1皿2結論： 根據要求，菌數要控制

11、在每1ml中含菌數在100cfu，因此，我們確定菌液制備：銅綠假單胞菌： 稀釋 金黃色葡萄球菌: 稀釋 大腸埃希菌： 稀釋 枯草芽孢桿菌: 稀釋 白色念珠菌（胰酪）: 稀釋 白色念珠菌（沙氏）: 稀釋黑曲霉（胰酪）：稀釋 黑曲霉（沙氏）： 稀釋 檢驗人檢驗時間 年 月 日- 年 月 日復核人復核時間 年 月 日附件5：計數用培養基適用性檢查結果培養基驗證菌株皿號被檢培養基cfu/ml對照培養基cfu/ml比值0.5-2菌落形態大小生長情況胰酪大豆胨瓊脂培養基（3035，3天）*白色念珠菌、黑曲霉5天銅綠假單胞菌12平均金黃色葡萄球12平均枯草芽孢桿菌12平均白色念珠菌12平均黑曲霉12平均空白1胰酪大豆胨液體培養基（3035，3天）銅綠假單胞菌12金黃色葡萄球12枯草芽孢桿菌12空白1沙氏葡萄糖瓊脂培養基（2328，72h）白色念珠菌12平均黑曲霉12平均空白1檢驗人檢驗時間 年 月 日- 年 月 日復核人復核時間 年 月 日表6:驗證結果審批表驗證對象驗證開始日期驗證