1、大腸癌組織中真核細胞起始因子4E的表達及其意義【摘要】 目的 探討真核細胞起始因子4E(eIF4E)在大腸癌組織中的表達，eIF4E與大腸癌發生、發展、臨床病理特征及預后間的關系。方法 采用免疫組化法檢測60例大腸癌組織中eIF4E的表達情況，以癌旁正常組織和大腸腺瘤各20例作對照。結果 大腸癌組織、癌旁正常組織和大腸腺瘤組織中eIF4E陽性表達率分別為91.7、10和90%，eIF4E陽性表達在不同性別、年齡、腺瘤史及腫瘤家族史患者間未見統計學意義，不同腫瘤部位、大小及分化程度、臨床分期及有無淋巴結轉移的eIF4E陽性表達差異也未見統計學意義(P0.05)，但腫瘤浸潤深度不同eIF4E陽性表

2、達不同(P0.05)。結論 大腸癌組織中存在著eIF4E蛋白高表達現象，eIF4E陽性表達與患者性別、年齡、腺瘤史、腫瘤家族史、病變部位、腫瘤大小、病理分化程度、臨床分期及淋巴結轉移無關，與浸潤深度有關(P0.05)。 【關鍵詞】 大腸癌；真核細胞起始因子4E；免疫組織化學Expression of eIF4E in Human Colorectal Cancer(The Affiliated Hospital of Ningxia Medical College，Yinchuan 750004)Abstract：Objective To study the expression of Euk

3、aryotic Initiation Factor 4E(eIF4E)in human colorectal cancer and its relationship to clinical pathologic feature.Methods The express of eIF4E in 60 cases with colorectal cancer were examined by immunohistochemical assay.The normal tissue of adjacent to cancer and large intestine adenomas(20 cases)w

4、ere served as a contral group.Results The positive expression rates of eIF4E in the colorectal cancer tissues，the normal tissues of adjacent to cancer，and the large intestine adenoma tissues were 91.7%，10%，and 90% respectively.Compared colorectal cancer tissue with the normal tissue of adjacent to c

5、ancer，there was a significant difference(P0.05)；compared large intestine adenoma tissue with the normal tissue of adjacent to cancer，there was a significant difference(P0.05)；The positive expression was associated with invasiveness depth，but not related to patients' gender，age，profession，family

6、history，location of cancer，tumor size，histological differentiation，lymph node metastasis and Dukes'stage.Conclusion eIF4E was over-expressed in colorectal cancer.Key words：colorectal cancer；eIF4E；immunohistochemistry近年來，真核細胞起始因子4E(eukaryotic initiation factor 4E，eIF4E)與腫瘤的關系日益受到重視。eIF4E即mRNA帽結合蛋

7、白，在蛋白質合成的起始階段起重要調控作用，是蛋白質合成的限速因子，參與細胞生長調節，并具有抗凋亡活性1-4。有關eIF4E在大腸癌方面的研究尚少，本研究通過檢測eIF4E在大腸癌組織中的表達情況，探討其在大腸癌發生、發展中的作用。1 資料與方法1.1 臨床資料 寧夏醫學院附屬醫院20012003年收住且隨訪資料完整60例大腸癌患者，均經病理組織學確診。其中男36例，女24例，年齡2674歲，中位年齡56歲。有腫瘤家族史7例，大腸腺瘤病史10例。腫瘤部位：直腸21例，乙狀結腸12例，升結腸17例，橫結腸3例，降結腸7例。組織學類型按WHO國際腫瘤學分類標準，其中：低分化腺癌17例，高中分化腺癌4

8、3例。浸潤深度：漿膜內9例，漿膜外51例。腫瘤大小：最長徑5cm者32例，5cm者28例。按我國大腸癌Dukes分期標準進行臨床分期：A期6例，B期33例，C期11例，D期10例。術后發現有淋巴結轉移16例，無淋巴結轉移44例；遠處轉移9例。根治性切除50例，姑息性切除10例。根治術后出現復發轉移12例。所有患者術前均未接受化療、放療或針對腫瘤的非手術治療。病例均隨訪2年以上，隨訪率100%；尚存活46例，死亡14例。取癌旁正常組織和大腸息肉各20例作為對照。1.2 方法 兔抗人eIF4E多克隆抗體購于CST公司，DAB及免疫組化Elivision plus廣譜試劑盒均購于福州邁新生物技術開發

9、有限公司。所有標本經10福爾馬林固定，石蠟包埋、連續切片4m厚，脫蠟水化。經微波爐熱修復和3H2O2處理后，加eIF4E抗體4過夜。PBS洗片后加入第二抗體室溫下孵育30min。PBS洗片后加入DAB顯色液，光學顯微鏡顯色，蘇木素復染，脫水，封片。用PBS液代替一抗作陰性對照，用已知的肺癌陽性片作陽性對照。1.3 結果判斷 eIF4E定位于細胞漿，以細胞漿中出現棕黃色顆粒，而背景清晰為陽性。高倍鏡下取10個不同視野，每個視野計數100個細胞，取平均值。結合陽性細胞所占百分比和染色強度進行半定量分析5：染色強度按下列標準評定：陰性為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分；染色的陽性細胞所

10、占百分比評定：陰性為0分，陽性細胞數25為1分，2650為2分，5175為3分，75為4分。綜合染色細胞百分比及染色強度分為三級：03分為陰性表達(-)；4分為陽性表達()。1.4 統計學方法 數據處理采用SPSS 13.0統計軟件，2檢驗及Kaplan-Meier法，P0.05為差異有統計學意義。2 結果2.1 eIF4E在大腸癌組織、大腸腺瘤及癌旁正常組織中的表達 eIF4E在大腸癌組織及大腸腺瘤組織的表達較癌旁組織高(P0.05)；大腸癌組織與大腸腺瘤組織差異無統計學意義(P0.05)，詳見表1，免疫組化表達見圖13(見封2)。表1 eIF4E在三種組織中表達水平的比較（略）2.2 eI

11、F4E表達與大腸癌一般臨床特征的關系 不同性別、年齡、腺瘤史及腫瘤家族史患者的eIF4E陽性表達差異未見統計學意義(P0.05)，詳見表2。表2 eIF4E的表達與大腸癌患者一般臨床特征的關系（略）2.3 eIF4E表達與大腸癌病理特征的關系 不同腫瘤部位、大小及分化程度組織eIF4E陽性表達差異未見統計學意義(P0.05)，詳見表3。表3 eIF4E表達與大腸癌病理特征的關系（略）2.4 eIF4E表達與大腸癌臨床分期的關系 eIF4E陽性表達與臨床分期及淋巴結轉移情況無關(P0.05)，而與腫瘤浸潤深度有關(P0.05)，陽性表達率隨浸潤深度的增加而增高。表4 eIF4E表達與臨床分期的關

12、系（略）2.5 eIF4E表達與大腸癌根治術后復發轉移的關系 eIF4E在根治術后無復發轉移的38例中陽性表達34例，有復發轉移12例均為陽性表達，表達率分別為89.5及100，兩組比較差異無統計學意義(P0.05)。2.6 eIF4E表達與大腸癌患者生存的關系 eIF4E表達陽性者生存曲線較陰性者降低，2年生存率eIF4E(-)者為100，()者為87.0，()者為69.6。(-)、()及()三組間比較差異無統計學意義(P0.05)，(詳見圖4，見封3)。3 討論 eIF4E是分子量為25kD的細胞質蛋白，基因定位于4號染色體。正常情況下，eIF4E的表達水平低，主要用于維持細胞正常生命活動

13、。高水平eIF4E選擇性增加體內影響細胞生長、分化的蛋白質的合成，促進細胞的增殖反應，并對癌基因表達起重要作用，導致細胞惡性轉化。也發現eIF4E在一些腫瘤中高表達，調控腫瘤惡性相關基因和因子的表達，參與腫瘤的侵襲和轉移。 Rosenwald等6報道eIF4E在大腸癌組織中出現高表達，證實eIF4E表達水平增高是大腸癌發生的早期事件。Barkeld等7檢測結腸癌、結腸息肉及正常組織中eIF4E的表達情況，發現結腸癌中eIF4E表達水平最高，而正常組織表達水平最低，說明其對結腸癌的發生起重要作用，他們通過多元分析進一步發現，eIF4E的表達與結腸癌患者性別、年齡、種族、息肉史及結腸癌家族史沒有相

14、關性。本研究結果顯示eIF4E在大腸癌組織中的陽性表達率為91.7，在癌旁組織中陽性表達為10，在大腸腺瘤中陽性表達為90。大腸癌及大腸腺瘤與癌旁正常組織相比差異有統計學意義(P0.05)，大腸癌與大腸腺瘤間的陽性表達率差異無統計學意義，提示eIF4E參與了大腸黏膜的早期癌變，在大腸癌的發生中起了重要作用。本研究未發現eIF4E的表達與患者性別、年齡、病變部位、腫瘤大小有關，與上述Barkeld7的研究結果一致。 本研究結果顯示eIF4E的表達與腫瘤分化程度、淋巴結轉移、臨床分期無關，而與原發病灶浸潤深度密切相關。這與一些作者將該指標用于其它腫瘤研究的結果不完全一致1，5，8-9，進一步說明腫

15、瘤的浸潤、轉移機制復雜，尚難得出一致結論。本研究發現eIF4E表達與根治術后有無復發轉移及生存率之間無關，提示eIF4E可否作為大腸癌的預后指標尚需進一步論證。【參考文獻】 1Rosenwald IB.The role of translation in neoplastic transformation from a pathologists point of viewJ.Oncogene，2004，23(18)：3230-3247.2Norton KS，McClusky D，Sen S，et al.LK1B is elevate with eIF4E over expr-ession in

16、 breast cancerJ.Surg Res，2004，116(1)：98.3Seki N，Takasu T，Mandai K，et al.Expression of eukaryotic initiation Factor 4E in atypical adenomatous hyperplasia and adenocarcinoma of the Human peripheral lungJ.Clin Cancer Res，2002，8(10)：3046-3053.4Topisirovic I，Guzman MJ，McConnell JD，et al.Aberrant dukaryo

17、tic translation initiation factor 4E-dependent mRNA transport impedes hematopoietic differentiation and contributes to leukem-ogenesisJ.Mol Cell Biol，2003(18)：8992-9002.5劉子沛，朱瑾，周金蓮，等.膽管癌組織中真核細胞翻譯起始因子4E和基質金屬蛋白酶-9 的表達及臨床意義的研究J.消化外科，2005，4(2)：113-118.6Rosenwald IB，Chen JJ，Wang S，et al.Upregulation of protein synthesis initiation factor eIF4E is an early event during colon carcinogenesisJ.Oncogene，1999，18(15)：2507-1257.7Berkeld H，Elba A，Turbat H.Expression of the Translation Initiation Factor eIF4E in the Polyp-Cancer Sequence in the