1、微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用考綱要求1.微生物的分離和培養(yǎng)。2.某種微生物數(shù)量的測(cè)定。3.培養(yǎng)基對(duì)微生物的選擇作用。考點(diǎn)一微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)1培養(yǎng)基的分析(1)據(jù)物理狀態(tài)的不同，培養(yǎng)基只有液體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基兩種類型()(2)培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽四種成分 ()(3)在配制培養(yǎng)基時(shí)，除滿足營(yíng)養(yǎng)需求外，還應(yīng)考慮pH、O2及特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的需求 ()2無(wú)菌技術(shù)(連一連)3純化大腸桿菌(1)制備固體培養(yǎng)基的流程(2)純化大腸桿菌的方法常用的微生物接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法。平板劃線法：是通過(guò)接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。稀釋涂布平

2、板法：是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。易錯(cuò)警示(1)自養(yǎng)微生物與異養(yǎng)微生物所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)不同：自養(yǎng)微生物所需的碳源、氮源來(lái)自含碳、含氮的無(wú)機(jī)物，而異養(yǎng)微生物需要的碳源、氮源來(lái)自含碳、含氮的有機(jī)物，因此可根據(jù)培養(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)判斷微生物的代謝類型。含氮無(wú)機(jī)物不但能給自養(yǎng)微生物提供氮源，也能作為能源物質(zhì)，提供能量，如NH3既作為硝化細(xì)菌的氮源也作為能源。(2)配制牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的注意事項(xiàng)：倒平板的適宜溫度是50 左右，溫度過(guò)高會(huì)燙手，過(guò)低培養(yǎng)基又會(huì)凝固。平板需倒置，這樣既可使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)

3、基，造成污染。(3)平板劃線操作的注意事項(xiàng)：第一次劃線及每次劃線之前都需要灼燒接種環(huán)。灼燒接種環(huán)，待其冷卻后才能伸入菌液，以免溫度太高殺死菌種。劃線時(shí)最后一區(qū)不要與第一區(qū)相連。劃線用力大小要適當(dāng)，防止用力過(guò)大將培養(yǎng)基劃破。1下列無(wú)菌操作中，錯(cuò)誤的是()A無(wú)菌操作的目的是防止雜菌污染B用酒精擦拭雙手的方法對(duì)操作者進(jìn)行消毒C實(shí)驗(yàn)操作過(guò)程應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行D玻璃器皿(吸管、培養(yǎng)皿)可用酒精擦拭2下列是用于從土壤中分離純化土壤細(xì)菌的培養(yǎng)基配方。請(qǐng)回答：試劑牛肉膏蛋白胨NaCl瓊脂水用量5 g10 g5 g20 g1 000 mL(1)培養(yǎng)基的類型有很多，但培養(yǎng)基中一般都含有水、碳源、_和無(wú)機(jī)鹽。上

4、述培養(yǎng)基配方中能充當(dāng)碳源的成分是_。培養(yǎng)基配制完成以后，一般還要調(diào)節(jié)pH，并對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行_處理。該培養(yǎng)基從物理性質(zhì)上分類屬于_。(2)分離純化微生物最常使用的接種方法是_和_。(3)假設(shè)培養(yǎng)結(jié)束后，發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基上菌落連成一片，可能的原因是什么？(列舉兩項(xiàng))_1微生物和動(dòng)植物營(yíng)養(yǎng)要素的比較項(xiàng)目碳源氮源能源無(wú)機(jī)鹽、水動(dòng)物糖類、脂肪等蛋白質(zhì)或其降解物同碳源都需要，種類及功能基本相同微生物異養(yǎng)型糖類、脂肪、醇、有機(jī)酸等蛋白質(zhì)或其降解物、銨鹽、硝酸鹽、N2等同碳源自養(yǎng)型CO2、碳酸鹽等NH3、銨鹽、硝酸鹽等氧化無(wú)機(jī)物或利用光能綠色植物銨鹽、硝酸鹽光能2消毒和滅菌比較比較項(xiàng)目理化因素的作用強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)

5、量芽孢和孢子能否被消滅消毒較為溫和部分生活狀態(tài)的微生物不能滅菌強(qiáng)烈全部微生物能3.兩種純化細(xì)菌的方法的比較項(xiàng)目?jī)?yōu)點(diǎn)缺點(diǎn)平板劃線法可以觀察菌落特征，對(duì)混合菌進(jìn)行分離不能計(jì)數(shù)稀釋涂布平板法可以計(jì)數(shù)，可以觀察菌落特征吸收量較小，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延4培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)構(gòu)成(1)各種培養(yǎng)基的具體配方不同，但一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽。(2)不同培養(yǎng)基要滿足不同微生物對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及氧氣的需求。考點(diǎn)二分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)1完善土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)(1)分離原理：土壤中細(xì)菌之所以能分解尿素，是由于它們體內(nèi)能合成脲酶，這種物質(zhì)在把尿素分解成無(wú)機(jī)物的過(guò)程中起到催化作用。

6、(2)統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目：統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用稀釋涂布平板法。(3)實(shí)驗(yàn)流程：土壤取樣樣品的稀釋微生物的培養(yǎng)與觀察細(xì)菌的計(jì)數(shù)。2判斷正誤(1)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素()(2)篩選分解尿素的細(xì)菌應(yīng)以尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源()(3)統(tǒng)計(jì)樣品中的活菌一般用平板劃線法()(4)在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變藍(lán)， 則說(shuō)明篩選到分解尿素的細(xì)菌 ()易錯(cuò)警示(1)在同一稀釋度下，至少對(duì)3個(gè)平板進(jìn)行重復(fù)計(jì)數(shù)，然后求出平均值，并根據(jù)平板所對(duì)應(yīng)的稀釋度計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。如果某個(gè)平板的菌落數(shù)與其他差別甚遠(yuǎn)，說(shuō)明該平板操作過(guò)程中出現(xiàn)失誤，應(yīng)舍棄。(2)統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)

7、際數(shù)目低。這是因?yàn)楫?dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的只是一個(gè)菌落。因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來(lái)表示。3自然界中的微生物往往是混雜生長(zhǎng)的。人們?cè)谘芯课⑸飼r(shí)一般要將它們分離提純，然后進(jìn)行數(shù)量的測(cè)定。下面是對(duì)大腸桿菌進(jìn)行數(shù)量測(cè)定的實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答有關(guān)問(wèn)題。實(shí)驗(yàn)步驟：(1)制備稀釋倍數(shù)為102、103、104、105、106的系列稀釋液。(2)為了得到更加準(zhǔn)確的結(jié)果，你選用_法接種樣品。(3)適宜溫度下培養(yǎng)。結(jié)果分析：(1)測(cè)定大腸桿菌數(shù)時(shí)，在對(duì)應(yīng)稀釋倍數(shù)為106的培養(yǎng)基中，得到以下幾種統(tǒng)計(jì)結(jié)果，正確可信的是_，其理由是_。A一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是230B兩個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)是

8、220和260，取平均值240C三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、50和520，取平均值260D四個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別是210、300、240和250，取平均值250(2)一同學(xué)在稀釋倍數(shù)為105的培養(yǎng)基中測(cè)得平板上菌落數(shù)的平均值為234，那么每毫升樣品中的菌落數(shù)是_(涂布平板時(shí)所用稀釋液的體積為0.1 mL)。(3)用這種方法測(cè)定的大腸桿菌密度，實(shí)際活菌數(shù)量要比測(cè)得的數(shù)量_，因?yàn)開(kāi)。1篩選菌株的原理微生物的選擇培養(yǎng)：在選擇培養(yǎng)基的配方中，把尿素作為培養(yǎng)基中的唯一氮源，原則上只有能夠利用尿素的微生物才能夠生長(zhǎng)。2統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的方法(1)顯微鏡直接計(jì)數(shù)法原理：利用特定細(xì)菌計(jì)數(shù)板或血細(xì)胞計(jì)數(shù)

9、板，在顯微鏡下計(jì)算一定容積的樣品中微生物數(shù)量。方法：用計(jì)數(shù)板計(jì)算。缺點(diǎn)：不能區(qū)分死菌與活菌。(2)間接計(jì)數(shù)法(活菌計(jì)數(shù)法)原理：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活菌。操作：a.設(shè)置重復(fù)組，增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說(shuō)服力與準(zhǔn)確性。b為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。計(jì)算公式：每克樣品中的菌株數(shù)(C÷V)×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)，M代表稀釋倍數(shù)。3鑒定分解尿素的細(xì)菌(1)原理：CO(NH2)2H2O

10、CO22NH3；由于NH3的產(chǎn)生，培養(yǎng)基堿性增強(qiáng)，pH升高，因此可通過(guò)檢測(cè)pH的變化來(lái)判斷該化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生。(2)方法：以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌，若指示劑變紅，則pH升高，說(shuō)明該種細(xì)菌能分解尿素。4對(duì)照原則的運(yùn)用(1)判斷培養(yǎng)基中是否有雜菌污染，需將未接種的培養(yǎng)基同時(shí)進(jìn)行培養(yǎng)。(2)判斷選擇培養(yǎng)基是否具有篩選作用，需設(shè)立牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進(jìn)行接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目，進(jìn)行對(duì)比得出結(jié)論。考點(diǎn)三分解纖維素的微生物的分離1纖維素酶(1)組成：一種復(fù)合酶，它至少包括三種組分，即C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。(2)作用：纖維素纖維二糖葡萄糖2篩選方法(1)方法：

11、剛果紅染色法，即通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。(2)培養(yǎng)基：以纖維素為唯一碳源的選擇培養(yǎng)基。3篩選流程土壤取樣選擇培養(yǎng)梯度稀釋將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上挑選產(chǎn)生透明圈的菌落。易錯(cuò)警示對(duì)選擇培養(yǎng)基的選擇方法區(qū)分不清(1)在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)。例如，加入青霉素可以分離出酵母菌和霉菌；加入高濃度的食鹽可以得到金黃色葡萄球菌。這里的加入是在主要營(yíng)養(yǎng)成分完整的基礎(chǔ)上加入。(2)改變培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分。例如缺乏氮源時(shí)可以分離出固氮微生物；石油作為唯一碳源時(shí)，可以分離出能消除石油污染的微生物。(3)改變微生物的培養(yǎng)條件。例如，將培養(yǎng)基放在高溫環(huán)境下培養(yǎng)，可以得到耐高溫的微生物。4纖

12、維素分解菌能夠產(chǎn)生纖維素酶分解纖維素。回答下列問(wèn)題：(1)在篩選纖維素分解菌的過(guò)程中，通常用_染色法，這種方法能夠通過(guò)顏色反應(yīng)直接對(duì)纖維素分解菌進(jìn)行篩選。甲同學(xué)在實(shí)驗(yàn)時(shí)得到了如圖所示的結(jié)果，則纖維素分解菌位于()A B C D(2)乙同學(xué)打算從牛胃中分離纖維素分解菌并計(jì)數(shù)，與分離醋酸菌相比，進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)除了營(yíng)養(yǎng)不同外，最主要的實(shí)驗(yàn)條件差別是_。該同學(xué)采用活菌計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)目往往比活菌的實(shí)際數(shù)目_。(3)丙同學(xué)在提取和分離纖維素酶的過(guò)程中，為了抵制外界酸和堿對(duì)酶活性的影響，采取的措施是向提取液和分離液中添加_。若探究纖維素酶活性的最適溫度，如何設(shè)置對(duì)照？_。答案(1)剛果紅A(2)保證無(wú)氧環(huán)境

13、小(低)(3)緩沖溶液不同的溫度梯度之間相互對(duì)照解析(1)剛果紅與纖維素形成的紅色復(fù)合物在纖維素被分解后將不再形成，則在培養(yǎng)基上出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。(2)牛胃是一個(gè)厭氧的環(huán)境，所以其中的纖維素分解菌與需氧的醋酸菌培養(yǎng)條件有所不同。因是活菌計(jì)數(shù)法，所以部分死亡菌無(wú)法計(jì)數(shù)。另外當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)菌連在一起時(shí)平板上只觀察到一個(gè)菌落，所以偏小。(3)探究最適溫度可設(shè)置一系列的溫度梯度相互對(duì)照，其他無(wú)關(guān)變量要適宜。1兩種菌株篩選原理的比較土壤中分解尿素的細(xì)菌分解纖維素的微生物選擇培養(yǎng)基的成分：尿素作為唯一的氮源鑒定方法：在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，若指示劑變紅，pH升高，說(shuō)明細(xì)菌能分解尿素選擇培養(yǎng)基的成分：纖維素作為唯一的碳源鑒定方法：剛果紅染色法，即剛果紅與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，培養(yǎng)基出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈2選擇培養(yǎng)基與鑒別培養(yǎng)基的比較種類制備方法原理用途舉例選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某些化學(xué)物質(zhì)依據(jù)某些微生物對(duì)某些物質(zhì)或環(huán)境條件的嗜好、抗性而設(shè)計(jì)從眾多微生物中分離所需的微生物加入青霉素分離得到酵母菌和霉菌鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品依據(jù)微生物產(chǎn)生的某種代謝產(chǎn)物與培養(yǎng)基中的特定試劑或化學(xué)藥品反應(yīng)，產(chǎn)生明顯的特征變化而設(shè)計(jì)鑒別不同種類的微