1、高級生物化學作業2008級 細胞生物學 周文期 導師：侯歲穩治療癌癥T細胞療法改進關鍵詞：免疫治療，基因療法，腫瘤免疫學T細胞活體外或者在試管內的激活和抗原特異性的擴大，已經在預防和治療相關病毒的感染及死后移植方面取得了可喜的療效和成果。Riddell 和他的同事們感染了具有巨細胞病毒特異性的CD8+T細胞克隆注入到造血干細胞移植(HSCT)的接受者的同種基因的異體內，發現注入細胞在人體內是安全的，并能夠恢復細胞病毒特異性細胞毒性T淋巴細胞（CTL），這在接受者異體骨髓移植中有所體現。但是，這些細胞在缺少CD4+T細胞復原的場所并不活躍，后來，Einsele和他的同事們將多病毒巨細胞病毒特異性

2、的細胞毒性T淋巴細胞注入到八個造血干細胞移植的接受者體內，這些接受者都患有或再次復發巨細胞病毒感染，盡管他們長期使用抗病毒的藥物。接下來的T細胞療法，如同定量聚合酶鏈反應決定的一樣，在患者的評估中表明顯著減少。更有趣的是，隨著T細胞療法的時間的推進，這兩位病人都具有了強烈的對移植物抗宿主病的免疫抑制。因此，繼T細胞療法在再造巨細胞病毒的免疫力方面是成功的，但是有可能會阻礙患者接受的高劑量免疫抑制。這種繼承性免疫療法的試驗在 (EBV)病毒相關的移植后淋巴組織增生疾病的預防和治療方面同樣是成功的。Rooney和它的同事已將捐助的多細胞EBV-特殊T細胞系注入到超過60位造血干細胞移植的接受者體內

3、來預防移植后淋巴組織增生疾病。另有六位患者發現淋巴瘤后，注入了病毒特異性細胞毒性T淋巴細胞。成熟的移植后淋巴組織增生疾病預防組中沒有一例病人，相比之下，歷史上未經處理的對照組的發病率為11.5%。分析EBV病毒DNA水平注射后看出抗病毒活性的直接證據，在三周內的第一個T細胞輸注中，DNA水平就減少了。此外，過繼性轉讓T細胞能夠長期堅持和保持對病毒性恢復的抵制。對六例顯性淋巴瘤的患者，五年內實現了完全緩解，而對其他病人全面的體外分析表明，注射細胞毒性T淋巴細胞（CTL）后，對病毒缺失突變體的控制得到增強。因此，連續性免疫療法對免疫系統能力較低的患者預防和治療病毒相關的疾病時，在其體內是安全、有效

4、、有保護作用的。這些成就促進了本方法在免疫特異性方面治療腫瘤的擴展運用。最初治療轉移性黑色素瘤患者的方法是注入高度活躍的腫瘤特異性T細胞，沒有顯示移交細胞被嫁接及持續存在。在EB病毒相關的霍奇金病(HD)和鼻咽癌（NPC）的病例中，注入EB病毒特異性CTL,觀察出留在體內，大量通過腫瘤位點，并產生抗腫瘤反應。但是，腫瘤面積較大的患者響應是有限和瞬態的。因此可看出，針對病毒的細胞免疫能力促使免疫系統較弱的患者通過轉移體外擴大、抗原特異性T細胞盡可能地改組，而惡性腫瘤中出現的免疫活性還需要更進一步的治療。許多腫瘤的形成機制已經進化到可以逃避先天性免疫能力和適應性免疫能力。這些包括：a.主要組織相容

5、性復合體（MHC）的調制和功能刺激分子的調制；b.在細胞表面表達Fas配體和其他凋亡分子；c.抑制因子的產生，如轉化生長因子和白細胞介素；d.色氨酸臭氧酶，吲哚2，3-雙加氧酶的組成性表達；e.調節性T細胞的補充。任何過繼性免疫治療的議定書都必須考慮到這些因素，或者調整T細胞使其有抗免疫規避能力，或者修改腫瘤環境，使其減少對T細胞激活函數和效應函數的抑制。這些評論著眼于針對癌癥的過繼性T細胞療法，已經通過一些團體的臨床試驗來提高其治療效能。表一 T-細胞的遺傳修飾通過基因修復來增強T細胞的功能隨著免疫逃避特征描述的上述情況的推論，腫瘤細胞可能存在，甚至可能在存有大量腫瘤特異性T細胞的區域擴散。

6、確實，他們盡管用100gp的多肽移苗誘導體內高水平黑色素瘤特異性T細胞，腫瘤特異性T細胞的頻率和疾病進展之間也沒有相關性。此外，利用強大的腫瘤反應侵入T細胞就能很容易的從黑色素瘤腫瘤的活檢中發現并分離腫瘤，說明這些細胞無力誘導腫瘤回歸。這些試驗及其他的一些臨床試驗表明，存在腫瘤特異性T細胞的區域并不能保證一個抗腫瘤效應，也不能通過提高腫瘤特異性T細胞在惡性腫瘤環境下的作用能力來改善臨床療效。隨著基因轉移技術的發展，如高滴度逆轉錄病毒系統，現在有可能利用基因修改T細胞，提高他們擴散，存活，和抵抗腫瘤抑制分子的能力，或者改變其受體特異性。在這里，我們討論新的提高T細胞功能來治療癌癥的遺傳特性。T細

7、胞腫瘤特異性的產生過繼免疫療法中，通常是用含有抗原特性的抗原提呈細胞(APC)來反復刺激外周血的單核細胞而生成腫瘤特異性CTL。抗原來源包括：主要組織相容復合限制肽、重組蛋白、腫瘤裂解物、以及遺傳學采用的腫瘤抗原基因。同樣，已經開始檢驗一系列能夠恢復和擴大抗原特異性T細胞的抗原提呈細胞。APCs如刺激腫瘤特異性T細胞的DCs是備受青睞的。不過，他們數量有限，并且是勞動密集型生產。一些團體已經對抗原提呈細胞（APC）的有用性做了調查，這些APCs包括：T細胞、活性單核細胞、轉移性EBV淋巴母細胞系，所有這些抗原提呈細胞表達了刺激和激活分子的高水平，并且能被病毒載體轉換以過度特異性抗原，讓新一代C

8、TL系具有更突出的反應活性。最近，多媒體技術和IFN-r技術為直接從外周血分離抗原特異性T細胞提供了便利。一旦被分離，這些細胞既可以立即被注入也可以體外擴大。最后，細胞毒性T淋巴細胞被傳統性的培養在含白細胞介素2(IL-2)的媒介中支持T細胞存活和體外增值。但是，細胞因子例如IL-6、IL-12、IL-15、IL-21已證明，其對腫瘤特異性T細胞在體外恢復、存活和擴大是至關重要的。過繼免疫療法依賴于確定疾病特征的能力以及從健康捐血者或癌癥患者分離腫瘤特異性細胞毒性T細胞的能力。許多療法還需要大量的體外腫瘤特異性T細胞擴展。此過程的第一步是確定異常表達的腫瘤相關抗原（TAA）或相對正常組織在腫瘤

9、細胞中過度表達的腫瘤抗原。從理論上講，這些抗原使得腫瘤細胞的具體目標和破壞不會反作用于正常組織。然而，盡管TAAs在腫瘤細胞中異常表達，許多這些蛋白也表達非惡性的成人組織。因此，免疫系統可能認出TAAs屬于自我抗原，并能通過正常的容忍機制限制T細胞免疫能力，包括克隆缺失和無反應性。由于具有較高自我親和力的T細胞在容忍過程中可能被刪除，所以分離TAA特異性T細胞過程可能需要低親和力的細胞受體，這樣殺死腫瘤細胞的效率較低。如果蛋白在正常組織中不能表達，那么源于TAAs決定抗原的T細胞特異性在免疫學上是單純而稀有的。這些因素限制了一些能從患者外周血分離的TAA特異性T細胞，影響了TAA特異性T細胞在

10、同源抗原刺激下于體外擴展的能力。繞過這些實際的限制，研究人員用能夠明確認識TAAs的受體研究獲得轉基因T細胞。在這里，我們研究兩個重定T細胞特殊性的最相近的方法:a.其T細胞受體（TCR）變量a和鏈源于高親和力TAA特異性T細胞克隆的基因修飾；b.插入嵌合抗原受體，通過分離于TAA特異性抗體的單鏈可變片段（SCFV）來識別腫瘤。TCR基因的轉移 由于大多數TAA（腫瘤相關抗原）是自我蛋白，所以腫瘤特異性T細胞從癌患者和健康捐贈者的常規分離和擴大被證明是困難的。研究人員從罕有患者的腫瘤反應T細胞中發現帶有編碼有a和鏈的克隆基因，然后將這種克隆基因插入到接受者的T細胞，捐贈給那些具有捐贈者T細胞受

11、體（TCR）特異性的接受者。這個程序允許將一個腫瘤特異性TCR插入到大量的有絲分裂原激活T細胞，使得抗原特異性T細胞快速生產。這一充滿希望的方法已經被應用到惡性黑色素抗原、次要組織相容抗原、常見的癌基因。體外實驗表明，隨著基因轉移的推進，引導T細胞獲得主體T細胞克隆的抗原特異性，包括針對抗原刺激的IFN-生產和裂解腫瘤細胞培養實驗。此外，小鼠的研究表明，輸入有抗原特異性TCRs的T細胞轉移能夠消除體外腫瘤。這一激動人心的治療方法最近已被證明可用來治療轉移性黑色素瘤。在這項研究中，將T細胞轉基因注入兩位患者，（這種T細胞轉基因具有可識別MART-1黑色素瘤抗原的TCR，）并觀察CTL的持續存留性

12、和轉移灶的客觀衰退。盡管臨床數據很有價值，但目前治療TCR基因轉移方面仍存在問題，這些問題可能限制基因轉移在臨床的應用。首先關注的是轉移a和鏈與內源性TCR鏈交叉配對，與無意識的自身免疫反應形成混合TCR系，減少了正確配對。這些問題可以通過改變跨膜結合區以消除內源性a和鏈二聚化來解決。為了克服基因轉移中有高親和力腫瘤特異性TCRs的同種自體T細胞的缺失，從已被探知的同種異體T細胞克隆高親和力TCR系。最后，TCR克隆系只認識單一的人類白細胞抗原限制部位，這會限制病人適合以人類白細胞抗原（HLA）為基礎的單模型，引導腫瘤通過突變或下調來躲避危險。嵌合抗原受體（CAR）的遺傳修復表二 嵌合抗原受體

13、另一種修飾T細胞特異性的方法是利用基因編碼作用于TAA系的單克隆抗體鏈。CAR系（也稱T機構）由胞內域和胞外域兩個區域組成。胞外域負責抗原識別，包含一個通過一個靈活連接結合的單鏈可變片段（scFv），這個SCFV擁有一個含重型（Vh）和輕型變鏈(Vl）（重鏈可變區和輕鏈可變相互獨立）的單克隆抗體。scFv然后與細胞內信號區域連接，這個區域通常由TCR鏈 (CD3-)或 IgE 高親和力受體(FcRI) 序組成。這種方式可使腫瘤針對非人類白細胞抗原限制，提高患者適應能力。由于T細胞受體只約束來自蛋白抗原的短肽，嵌合抗原受體（CAR）系抗原的擴展范圍課識別碳水化合物和糖脂，卻不能被常規的TCR系所

14、識別。小鼠模型臨床研究表明，T細胞表達CAR系可以消除腫瘤。但是，盡管CARs包含的只有CD3-信號域能過調節腫瘤細胞死亡，它們并不轉交增生信號或誘導細胞因子產生，除非通過腫瘤細胞定位提供刺激信號。對于再加活化，T細胞要求有自己的TCR系信號和共刺激分子，只要是CD28分子。由于大多數腫瘤不表達刺激抗原，增加CARs系已被添加到鏈的細胞內信號域。從CD28列入信號域導致獨立刺激細胞因子針對腫瘤刺激分泌和擴散。來自其他刺激分子的信號域，如4-1BB、 OX40、 ICOS（誘導T細胞共刺激分子），同時通過CAR識別提高T細胞誘導的效應功能。另一種提高CAR表達T細胞在體內存活的方式是確保T細胞借

15、助他們的內源性TCR系在體內被刺激，或者通過疫苗接種，或者通過持久性病毒感染（如CAR表達病毒特異性T細胞）。同樣，使用再生CAR的T細胞的問題必須在被廣泛采納應用于臨床治療之前加以解決。首先是可溶性抗原的約束力，如，可溶性CD30 或癌胚抗原(CEA)通過惡性細胞或正常細胞分泌，可能會干擾腫瘤認識和/或功能。然而，迄今完成的體外研究表明可溶性抗原并不損害CAR功能。其次，大多數來自小鼠抗體的CAR可能通過大量片段Vh和Vl誘導免疫反應。Lamers 和它的同時使用CAIX特異性 CAR的報告表明，治療三例病例運用了基因修飾T細胞成熟的反單鏈可變片段（scFv）抗原反應。可能必須使用將設CAR

16、系的完全非人類抗體，去克服大量針對基因修飾T細胞的免疫應答。總之，具外源性受體的T細胞遺傳修飾能夠明確地認識到腫瘤細胞提供了一個強大而又快速的產生腫瘤特異性T細胞的方式。T細胞存活性和持久性 有效地T細胞療法需求注入腫瘤特異性T細胞的體內擴展。這就需要體內抗原刺激，無論是針對腫瘤細胞還是交叉出現腫瘤抗原的專業APC（抗原提呈細胞）系。理想情況下，T細胞注入然后應保留在T細胞記憶室，長期提供對惡性細胞的抵制。大多數腫瘤并不提呈有效抗原和強有力的方法去阻止專業APC系。所以采納的轉移T細胞并不擴展或輸入記憶。在一些非病毒生存的臨床試驗中，腫瘤特異性T細胞和克隆是短命的，T細胞檢測到的只有1天，且只

17、有患者注入IL-2 時才能檢測到。在本節中，我們討論幾個腫瘤特異性T細胞提高持續性和擴散的策略，T細胞遺傳修飾和患者環境的處理去創建擴展的空間，并消除抑制細胞類型。效應T細胞與記憶T細胞的比較下面遇到同源抗體和刺激，初始型T細胞分化成細胞毒性潛力增加的效應T細胞，包括穿透細胞膜蛋白質和顆粒酶的水平提高，但是，隨著增生潛力下降，表明過繼性轉讓，體外擴展效應記憶性T細胞可能導致較低的存活力和臨床效應。實際上，幾項研究支持假設較少區別T細胞（如，較長的端粒、刺激表達受體）在小鼠模型和人類免疫試驗中顯示較長的持續性。這些數據表明，長期體外擴增和T細胞克隆可能不利于生存。替代性策略，如以中央記憶性或穩態

18、細胞因子培養為基礎的細胞選擇，可能會延長過繼性轉移細胞的壽命，提高臨床療效。但是，我們的體外擴展試驗，多克隆EB病毒特異性T細胞系表明，擴大效應、記憶性T細胞，加入給予合適的環境，可以在體內大規模展開，進入內存室，輸入后最多持續七年。T細胞基因修飾提高生存率 另一種體高T細胞存活和增殖的方法是，利用基因轉移技術（例如，逆轉錄病毒、慢性病毒和電穿孔）修飾其基因能提高細胞調亡和衰老的T細胞或提高增強擴散的自分泌生長信號。為了延長T細胞體內擴展壽命，研究人員用抗基因轉換T細胞，包括Bcl-2 和 Bcl-xL,從而提高T細胞多細胞死亡和IL-2 細胞因子衰老的抵抗力。為了提高增殖潛力，人類端粒逆轉錄

19、酶(hTERT)基因的過度表達已通過逆轉錄病毒轉導來測試。雖然這種做法通過防止端粒侵蝕大大的提高了轉移性T細胞的人口加倍數量，但也伴隨著基因組的不穩定性，可能限制其臨床應用。T細胞生長因子的獲得（如白介素-2）也似乎是一個過繼性轉移T細胞決定持續性和生存的重要因素。針對抗原的T細胞擴展在失去生產IL-2能力的期間會長時間存在。為了解決這一缺陷，他在T細胞中過表達白介素-2（IL-2），導致自我擴散沒有改變在體內殺死腫瘤細胞的能力。由于IL-2涉及CD4+CD25+ Tregs的擴展，使用其他細胞因子如IL-7、IL-15和 IL-21提高效應T細胞的體內擴散可能是可取的。許和他的同事表示，具I

20、L-15的T細胞轉基因維持其抗調亡分子Bcl-2 和 Bcl-xL的表達，并抵抗IL-2撤出后細胞調亡。因此，具抗調亡分子或細胞因子的T細胞基因修飾在體內和小鼠系統誘導正常的自生存和擴散。然而，任何延長T細胞壽命或干擾它們穩態運行的遺傳策略，都存在生產不受歡迎的淋巴細胞的風險，并需要進行認真的風險評估。這些技術是否將轉化為對患者有利的療法仍有待觀察。抗腫瘤相關抑制因子各種癌癥都具有一些免疫逃避策略。這些策略包括的TGF-產生、對CD4+CD25+ Tregs表達的補充以及反應腫瘤特異性T細胞細胞調亡的分子表達。在這節中，我們討論幾個基因治療的方法，增進T細胞在不良環境作用的能力。-生長因子的轉

21、化（TGF-）TGF-是一種介導細胞增殖、生長停止、分化和調亡的多功能細胞因子。它通過血管生成促進腫瘤生長，此外，TGF- 限制 Th1/Tc1細胞擴散和誘導耐受性。許多癌癥能探知一個T細胞在體內的免疫反應，從而通過分泌TGF-來避免免疫消除。TGF-通過Smad 蛋白受體介導磷酸化一直T細胞生長，反過來，又下調c-myc 并誘導細胞周期蛋白依賴性激酶（如p15和p21)的抑制劑。TGF-還影響CD4+ T細胞的Th1和Th2分化，并抑制他們獲得效應功能(如細胞毒性和IFN-生產)。此外, TGF-影響Tregs 的發展、維持和誘導。在體內, TGF-通過抑制功能將CD4+CD25表達的T細胞

22、分化為CD4+CD25+T細胞，并且，TGF-胰島細胞的過表達能提高Tregs 的出現頻率。這些研究表明，抑制TGF-對T細胞的影響可能改善T細胞過繼轉移后的效能。一些組織已經表明，TGF-的大分子抑制劑和小分子抑制劑通過提升它們的免疫原性和減少它們的生存能力可以消除腫瘤。雖然研究人員已經表明，TGF-受體拮抗劑在小鼠體內長期暴露會產生抗癌作用，而且會產生很好的耐受性，全球封鎖TGF-可能導致較大的副作用，包括炎癥和生長依賴于TGF-控制的腫瘤的我免疫反應及其進展。雖然TGF-也抑制惡性腫瘤的生長，但是許多腫瘤通過其TGF-受體或下游Smad蛋白的下調或突變能夠抵制TGF-的影響。研究人員采用

23、腫瘤源性，顯陰性TGF-受體來評價T細胞中TGF-信號。因此，Gorelik & Flavell證明，通過在轉基因小鼠的T細胞中表達主導陰性TGF-受體型II(dnTGF-RII)，TGF-是必不可少的T細胞穩態，其抑制可導致T細胞淋巴細胞和自我免疫疾病。隨后，我們的研究組織表明，TGF-抗T細胞的性能優于抗腫瘤活性，成熟的抗原特異性T細胞修飾顯示dnTGF-RII抵抗TGF-的抑制作用，并在體內保留其效應功能的影響，同時保留它們依賴抗原和細胞因子擴散的能力。過繼性轉移dnTGF-RII 基因修飾小鼠T細胞顯示在TGF-表達的負有腫瘤的小鼠體內腫瘤侵入和消除長期存在。在長期的安全性研究

24、中，沒有淋巴細胞或自身免疫是在dnTGF-RII修飾、免疫小鼠體內的抗原特異性鼠類脾細胞轉移后被觀察的，基因修飾T細胞作用下只要小鼠能夠接種抗原，表明這種修飾可能是安全的，并且有利于治療患有頑固性腫瘤的病人。Fas/FasL和其他的調亡誘導分子Fas配體(FasL/CD95L)是一個腫瘤壞死因子(TNF)家族的成員，可以通過其受體Fas交聯觸發細胞死亡。激活脂肪酸吸收一個死亡誘導信號復合體及半光天冬酶活化。研究人員認為，各種不同的腫瘤在其細胞表面表達Fas ，這是一個免疫赦免機制，因為激活效應T細胞在其細胞表面表達Fas，并對Fas介導的細胞調亡很敏感。一些體內研究已經證實，人類腫瘤的Fas表

25、達與細胞調亡以及腫瘤侵潤淋巴細胞的損失是相關聯的。指出Fas/FasL 系統與T細胞系相互作用，嚴重削弱了T細胞介導的腫瘤排斥反應。Dotti和它的同事表示，小分子干擾核糖核酸(siRNA)的轉基因旨在降低Fas (CD95)能夠致使T細胞抵抗FasL 表達腫瘤細胞的調亡能力的影響。修飾宿主環境T細胞功能的提高一些腫瘤相關因素在破壞腫瘤系統中發揮著重要作用，并有助于腫瘤的生長和轉移（如下圖一）。腫瘤細胞或腫瘤輔佐細胞可以通過IDO 表達消耗腫瘤環境中的色氨酸，致使效應T細胞喪失反應能力。另外，腫瘤可以通過可溶性因素（如TGF- 和 IL-10）的分泌物吸收Tregs。而這些Tregs通過效應T

26、細胞的抑制誘導和維持一個耐受性腫瘤微環境。一些組織正在針對這些免疫逃避策略進行研究，進行了策略的概述。吲哚 2，3-氧（IDO）IDO是在色氨酸沿線的犬尿氨酸分解途徑中，初始階段和限速階段的一種催化酶。IDO是先天性免疫反應的組成部分，而先天性免疫反應主要預防某些對IDO損耗比較敏感的病原體，并且IDO在產婦胎盤維持母親容忍性是有所體現。T細胞似乎對色氨酸的短缺特別敏感，這種現象促使一些團體去研究，是否IDO通過腫瘤細胞逃避細胞免疫的表達是有利用價值的。Uyttenhove和它的同事分析腫瘤細胞株，以及多種人類腫瘤樣本，并指出機能活躍的IDO在一些腫瘤類型中，包括前列腺癌、結腸癌、胰腺癌和子宮

27、頸癌的構成性表達。此外，他們證實，IDO表達腫瘤能夠在腫瘤部位阻止腫瘤抗原特異性T細胞擴散，從而防止其自身的毀滅。由于IDO也可以在刺激性細胞因子出現的場所誘發炎癥，所以一個IDO陰性腫瘤可能上調IDO，引起一個免疫反應產生誘導作用，從而在IDO生效之前，否定任何腫瘤特異性細胞免疫功效。IDO在APC系中的反應還允許巨噬細胞和DC系抑制細胞擴散。Munn和他的同事們確定，存在于TDLNs中的CD19+漿樹突狀細胞的一個子集，能夠通過pDC系制止T細胞活性抑制抗原反應。這種抑制是通過IDO 的組成型表達來調節，并且pDC系還能夠在同一地點通過非抑制DC系抑制針對第三方抗原的T細胞反應。此外，ID

28、O表達pDC系過繼轉移從TDLNs進入單純的主體，通過轉移細胞導致專門針對抗原出現的T細胞缺乏癥。CD19+ pDCs不局限于TDLNs，但也能夠在正常的淋巴結和脾臟中發現，在這里它們還沒有組成型表達IDO.但是IDO表達能夠被誘導，并已被假定激活信號能通過CTLA-4中活性Tregs在細胞表面表達被轉移。此外，成熟的單核細胞衍生的DC系在前列腺素E2存在的場所導致IDO的上調和可溶性CD25的分泌，從而抑制T細胞擴散和細胞因子的產生。因而，如果在成熟過程中能接受適當信號，耐受性DC可以被生成。有兩種途徑可以了解氨基酸信號轉導。其中T細胞可以感知自由色氨酸的降低級別。普通氨基酸缺乏通過mTOR

29、激酶途徑和GCN2蛋白激酶通路的拮抗信號。如T細胞無反應性導致通過IDO表達DCs，曼恩和他的同事表明，由GCN2蛋白激酶發起的途徑作為受影響的途徑，就如同T細胞缺乏GCN2難以應付IDO介導的抑制。IDO發揮三分之一的作用通過誘導犬尿氨酸的產生來幫助腫瘤免疫性逃避，這是在IDO作用下色氨酸代謝的主要產品。最近的一些報告結果表明，犬尿氨酸的代謝產物，（如犬尿氨酸、3羥基犬尿氨酸、3羥基鄰氨基苯甲酸），調節免疫功能。這些代謝產物能導致活性T細胞、B細胞和NK細胞的細胞調亡，但DC系卻對代謝產物有抵抗作用。 總之，IDO 是腫瘤逃避免疫系統所使用的主要機制之一。IDO可能直接由腫瘤細胞或副衛細胞在

30、微環境中活化后產生。這兩條路線都可以通過色氨酸枯竭或有毒代謝物的產生而導致T細胞無反應性和細胞調亡。盡管IDO產生細胞，但最終的結果還是腫瘤逃脫。IDO抑制作用提高T細胞治療初步報告顯示，IDO是服從藥理干預的，看來IDO活性能夠被各種色氨酸類似物所抑制，包括競爭性抑制劑1甲基色氨酸，這是成功的用于體內胎盤的免疫特權，并且抑制腫瘤和APC系中的IDO活性。另外，GCN2激酶途徑能夠利用色氨酸枯竭誘導T細胞相關的無反應性。GCN2蛋白破壞的T細胞，在體內擴散中不易受IDO調節的抑制。并且在體內，GCN2蛋白催壞的T細胞擴散不會受到IDO表達的DC系的抑制。因此，在腫瘤反應中使用RNA干擾技術破壞

31、或催壞GCN2蛋白，體內擴展效應T細胞能夠幫助它們抵抗IDO誘導無反應性。調節性T細胞Tregs負責誘導和維持外圍容忍性。CD4+ 和 CD8+ Tregs已經與人類腫瘤聯系了起來，并且已被報道，患有各種癌癥（包括乳癌、大腸癌、食管癌、胃癌、肝癌、白血病、肺癌、淋巴瘤、黑色素瘤、卵巢瘤和胰腺癌）的病人的血液和腫瘤中Tregs的數量有所提高。Tregs 誘導已經與一些腫瘤環境因子建立了聯系，如 血管內皮生長因子、白介素-10（IL-10）、轉化生長因子-、IDO、以及抑制性APCs,同時Tregs能夠在各種條件下抑制腫瘤特異性細胞免疫應答。 Tregs表達IL-2受體、CD25,因此可能扮演腫瘤

32、微環境條件下IL-2 的一個“集合”。此外，人類Tregs能夠通過穿透細胞膜蛋白質或顆粒乙途徑直接殺死T細胞和APC系。如上文所述，CTLA-4+ Tregs 誘導 IDO 在APCs中表達,可以通過減少色氨酸抑制T細胞活化。Tregs可以在體內釋放IL-10 和 TGF-,它們能夠通過抑制MHC分子、CD80和CD86表達以及IL-12 的產生直接抑制T細胞活化。Tregs也促使B7-H4 在APCs上表達,誘導T細胞周期阻滯。另外，在小鼠系統，Tregs能夠利用APCs引發IL-10高強度的生產，出現B7-H4 上調并成為免疫抑制。因此,Tregs可能直接或間接地通過APCs抑制乙酰胺特異

33、性免疫。Tregs枯竭一些團體以Treg 相關分子 如糖皮質激素誘導的腫瘤壞死因子受體家族分子(GITR)、CD25和CTLA-4為研究對象，關注Tregs的系統衰竭。初步小鼠實驗指出，競爭性的反GITR 單克隆抗體的單一管理，引起患有腫瘤的小鼠產生強有力的腫瘤特異性免疫，并消滅已建立的腫瘤。這表明在體內配置GITR可能是有效的。Attia和他的同事根據融合蛋白IL-2和毒喉素的高親和力IL-2受體的表達，考察了他們消除調節性T淋巴細胞的能力。13名患者接受治療，但沒有一例客觀的臨床經驗反應。通過完全地抗CTLA-4抗體的管理，并同時接種2gp的黑色素瘤相關的CD8+肽疫苗，這個團體對14名患

34、有轉移性黑色素瘤的病人進行治療。CTLA-4誘導阻礙了其中六位病人（占43%）在第三/四級的自我免疫能力，包括皮炎、腸炎、肝炎和性垂體，但其在三例病人中客觀調節癌癥衰退（占21%;兩個完整和一個部分反應）。Ribas和他的同事在后來的一份報告中指出，在治療39例患有固體腫瘤的病人時使用CTLA-4封閉抗體，在10%的患者和治療后病情穩定的23%患者中完整或部分地顯示反應結果。然而他們的禱告和其他人的報告指出，抗CTLA-4的長期管理或增加劑量強度第三/四級自身毒性強度更大的發病率，但似乎沒有增加客觀反應率。因此，低劑量CTLA-4管理看來是成功地突破人類腫瘤的容忍度。T細胞亞群枯竭促進穩態擴散T細胞和B 細胞數量在單個人身上是固定的，感染可能會引起數量增加，但是感染后，細胞數量又會通過穩態機制誘導細胞調亡回到起點。同樣，無論任何