1、驗 證 文 件文件名稱：阿戈美拉汀片（25mg)微生物限度檢查方法驗證方案文件編號： 部 門簽 名日 期制 定 人QCQC驗證管理員QA質量管理部部長批 準 人質量負責人 揚 子 江 藥 業 集 團 四 川 海 蓉 藥 業 有 限 公 司目錄一、驗證概述21.驗證對象22.驗證原因23.驗證目的24.驗證要求2二、驗證組織機構和職責31.職責32.組織機構4三、驗證風險評估及范圍51.嚴重性（S）52.可能性（O）53.可檢測性（D）64.風險優先數量等級判定（RPN）6四、驗證實施計劃17五、驗證準備181.驗證依據182.驗證條件18六、驗證內容20七、驗證異常情況處理28八、驗證結論29

2、九、再驗證周期30十、附 件31一、驗證概述1.驗證對象本次驗證的對象為阿戈美拉汀片（25mg）微生物限度檢查法。2.驗證原因對阿戈美拉汀片（25mg）微生物限度檢查法進行適用性驗證。3.驗證目的確認阿戈美拉汀片（25mg)微生物限度檢查法的可靠性。4.驗證要求驗證過程需嚴格按方案中規定的步驟進行。對于驗證過程中出現的所有偏差，應查明原因并得到有效處理后，驗證方可進入下一步驟。二、驗證組織機構和職責1.職責1.1.質量受權人驗證文件的批準。組織驗證工作的實施及各部門的協調，保證驗證工作有序的進行。1.2.質量管理部現場監督保證整個操作過程按照驗證計劃進行。負責驗證方案的審核，及操作過程中對驗證

3、文件修訂的審核工作。驗證文件的歸檔工作。按照驗證方案要求對操作過程中的樣品抽樣檢測。涉及到的儀器儀表的校驗，以及一些相關的化驗工作。1.3.質量控制實驗室負責驗證文件的起草工作。負責驗證文件的審核工作。驗證方案起草人員現場對操作過程進行指導。對驗證實施過程中資料和數據進行匯總并完成驗證報告。需要時與相關部門的協調工作。1.4.供應部按照驗證物資采購計劃進行物資采購。2.組織機構2.1驗證領導小組姓名職務驗證職務驗證工作職責質量負責人驗證總負責人驗證文件審核、批準質量管理部部長領導小組組員驗證文件審核QA主管驗證文件審核QC主管驗證文件審核供應部部長保證驗證物料的提供驗證管理員驗證文件審核、歸檔

4、2.2.驗證實施小組姓名職務確認職務確認工作職責生物組組組長實施小組組長驗證文件審核、現場指導化驗員實施小組組員文件起草、操作培訓、現場指導按要求進行操作及數據整理，填寫相關數據，及檢查相關項按要求進行操作及數據整理，填寫相關數據，及檢查相關項儀器管理員確保所有儀器設備正常運行三、驗證風險評估及范圍根據SOP6-00001驗證管理規程對驗證的相關要求，對檢測過程中可能影響檢測結果的因素進行風險分析。風險定性標準如下：1.嚴重性（S）： 危害可能產生后果的程度。嚴重程度分為十個等級，如下：權重嚴重性等級在產品質量或法規方面可能導致的后果對產品造成的后果10極高可能會導致藥監部門吊銷藥品生產許可證

5、或撤銷GMP證書可能會導致檢測結果不準確或不可靠，直接影響產品質量9非常高8很高可能會產生不符合GMP的關鍵缺陷，或者導致上市藥品召回7高6中等可能會產生不符合GMP、SOP的重要缺陷可能導致檢測結果產生重大偏差，對產品質量有較大影響5低可能會產生不符合GMP、SOP的一般缺陷可能導致檢測結果產生偏差，對產品質量有一定影響4很低可能會產生不符合GMP、SOP的一般缺陷可能導致檢測結果產生偏差，但在可接受范圍3輕微2很輕微不違反GMP、SOP的輕微缺陷對產品檢測無影響或影響可以忽略1無2.可能性（O）：影響檢測結果的事件發生的可能性頻率或概率，建立以下等級：權重發生的可能性等級確認標準可能的失效

6、率10很高幾乎是不可避免的。1/291/38高一般與以前異常情況時有發生，且為主要因素。1/871/206中等一般與以前異常情況時有發生，但不是主要因素。1/8051/400權重發生的可能性等級確認標準可能的失效率4中等一般與以前異常情況時有發生，但不是主要素。1/20003低很少幾次與相似的情況發生。1/150002很低很少幾次與幾乎完全相同的情況發生。1/1500001極低異常情況不大可能發生，幾乎完全相同的異常情況也未發生過。1/15000003.可檢測性（D）： 檢測到異常情況存在的能力的程度，定義如下：權重可檢測性等級確認標準10幾乎不可能沒有已知的控制方法能找出異常情況。9很微小現

7、行控制方法找出異常情況的可能性很微小。8微小現行控制方法找出異常情況的可能性微小。7很小現行控制方法找出異常情況的可能性很小。6小現行控制方法找出異常情況的可能性小。5中等現行控制方法找出異常情況的可能性中等。4中上現行控制方法找出異常情況的可能性中等偏上。3高現行控制方法找出異常情況的可能性高。2很高現行控制方法找出異常情況的可能性很高。1幾乎肯定現行控制方法幾乎肯定能找出異常情況，已知相似過程的可靠的檢測控制方法。4.風險優先數量等級判定（RPN） 4.1.風險等級判定標準的確定等級低風險上限(不包括)高風險下限(包括)嚴重性輕微：對產品質量的影響：可能導致檢測結果產生偏差，但在可接受范圍

8、。(分值：3分)低：對產品質量對影響：可能會導致檢測結果不準確或不可靠，直接影響產品質量。(分值：5分)等級低風險上限(不包括)高風險下限(包括)可能性低：很少幾次與相似的情況發生。(分值：3分)偶爾發生的失敗。(分值：5分)可檢測性高：現行控制方法找出異常情況的可能性高。(分值：3分)中等：現行控制方法找出異常情況的可能性中等。(分值：5分)RPN3×3×3=275×5×5=1254.2.風險等級判定標準判定公式（測量范圍1-10）RPN風險等級是否可接受是否須采取措施RPN=S×O×D1RPN27低是否27RPN125中否提高可檢

9、測性及或降低風險產生的可能性來降低最終風險水平125RPN1000高否注：當1RPN27，但嚴重性S×發生可能性O為10×2或9×2時，仍需按中等以上風險進行后續控制。是4.3.風險控制流程圖與相關人員溝通并記錄接受該風險的依據RPN是否在低風險區區 否RPN是否在中風險區或高風險區，SO值為10×2或9×2是組長將評估結果進行匯總，提出風險控制措施是嚴重性、發生可能性、可檢測性權重是否可降低降低嚴重性、發生可能性、提高可檢測性風險管理委員會及決策人審核批準否組長提出采取中止、暫停項目或風險自留、風險回避或后備措施重新完善風評報告4.4.風險評

10、估過程4.4.1.風險識別采用5M1E分析法從人、機、料、法、環等方面進行分析：方法驗證異常料人機培養箱，凈化工作臺對照培養基、檢查用培養基、檢定菌、干熱/濕熱滅菌指示條 驗證方案編寫人員電子天平，pH計，干熱滅菌烘箱，滅菌器緩沖液、消毒劑、純化水無菌器具、無菌手套/衣服試驗人員控制菌檢驗結果不符合實驗組菌種回收率不達標樣品儲存環境驗證方法不正確 培養環境及觀察環境 驗證所依據的檢驗操作規 程培養基、緩沖液、無菌器具、消毒劑的制備方法潔凈區環境（供試品溶液檢查環境）測環法4.5. 阿戈美拉汀片（25mg）微生物限度檢查方法驗證風險分析：序號項目潛在的失效模式潛在的失效后果嚴重性S潛在失效造成原

11、因發生可能性O現有控制措施可檢測性DRPN責任及目標完成日期措施結果采取措施SODRPN01驗證方案編寫人員編寫人員未按照“6-00014-01微生物限度檢查方法驗證操作管理規程規定編寫驗證方案。驗證方法錯誤，導致實驗結果不可靠。8人員培訓考評不到位。2嚴格按照“6-00014-01微生物限度檢查方法驗證操作管理規程規定編寫驗證方案1162015.10.20 對驗證方案編寫人員進行培訓和考評，合格后方可進行驗證方案的編寫工作。811802試驗人員試驗人員未按照編寫驗證方案進行操作。操作不正確，導致實驗結果不可靠。8試驗人員培訓不到位。2對實驗人員進行驗證方案培訓116方案批準后一個工作日完成驗

12、證方案培訓檢測前培訓驗證方案，試驗嚴格按驗證方案實施。811803培養箱，凈化工作臺儀器沒有經過計量、確認，或不在計量、確認效期內。導致檢測環境和培養環境不符合要求，最終導致驗證試驗失敗。6使用人員使用前未對使用的設備進行校準日期進行檢查。2編寫驗證方案前檢查所使用儀器的校準日期112設備使用人員使用前對設備的計量效期、確認效期進行確認，在效期內方可使用。611604電子天平，pH計，干熱滅菌烘箱，滅菌器儀器沒有經過計量、確認，或不在計量、確認效期內。導致實驗結果出現異常。8使用人員使用前未對使用的設備進行檢查確認。2編寫驗證方案前檢查所使用儀器的校準日期116設備使用人員使用前對設備的計量效

13、期、確認效期進行確認。在效期內方可使用。8118序號項目潛在的失效模式潛在的失效后果嚴重性S潛在失效造成原因發生可能性O現有控制措施可檢測性DRPN責任及目標完成日期措施結果采取措施SODRPN05對照培養基、檢查用培養基、檢定菌、干熱/濕熱滅菌指示條對照培養基、檢查用培養基、檢定菌、干熱/濕熱滅菌指示條，失效。導致驗證失敗。6未對照培養基、檢查用培養基、檢定菌、干熱/濕熱滅菌指示條進行期間核查。使用前未對效期進行檢查確認。2對照培養基、檢查用培養基、檢定菌、干熱/濕熱滅菌指示條進行期間核查。使用前未對效期進行檢查確認。112對耗材管理人員進行培訓，嚴格執行“2-01012-11培養基的制備和

14、保管管理規程”和“2-01013-07檢定菌管理規程”規定的核查周期。試驗人員使用前對有效期進行檢查確認，合格后方可投入使用。811806緩沖液、消毒劑、純化水緩沖液、消毒劑、純化水配制不正確或過有效期或性狀明顯異常。導致驗證失敗。61.未嚴格按照標準要求制備緩沖液和消毒劑。2.使用前未對緩沖液、消毒劑、純化水進行效期和性狀確認。2對實驗人員進行驗證方案培訓112對緩沖液、消毒劑、純化水的管理人員進行培訓，抽查期間核查效果。8118序號項目潛在的失效模式潛在的失效后果嚴重性S潛在失效造成原因發生可能性O現有控制措施可檢測性DRPN責任及目標完成日期措施結果采取措施SODRPN07無菌器具、無菌

15、手套/衣服無菌器具、無菌手套/衣服，過有效期或被污染。導致驗證失敗。61.未.嚴格按照“2-01022-05質量控制實驗室消毒劑、無菌器具管理規程”制備無菌器具和“2-01000-07質量控制實驗室管理規程”制備無菌衣服。2.使用前未確認無菌器具、無菌手套/衣服進行效期、包裝確認。2使用前對無菌器具、無菌手套/衣服的制備方法、有效期及包裝的完整性進行檢查。1121.嚴格按照“2-01022-05質量控制實驗室消毒劑、無菌器具管理規程”制備無菌器具和“2-01000-07質量控制實驗室管理規程”制備無菌衣服。2.使用前對無菌器具、無菌手套/衣服的有效期及包裝的完整性進行確認。無誤后方可投入使用6

16、11608驗證依據所用檢驗操作規程驗證方案依據的檢驗操作規程不正確。導致驗證失敗。8驗證依據所用檢驗操作規程未經批準。1檢驗操作規程審核批準后進行驗證方案編寫18所用檢驗操作規程在驗證編寫前對其與現行版藥典進行比對。8118序號項目潛在的失效模式潛在的失效后果嚴重性S潛在失效造成原因發生可能性O現有控制措施可檢測性DRPN責任及目標完成日期措施結果采取措施SODRPN09培養基、緩沖液、無菌器具、無菌衣服/手套、消毒劑的制備方法試驗人員未按 “2-01022-05質量控制實驗室消毒劑、無菌器具管理規程”、“2-01000-07質量控制實驗室管理規程”和“2-01012-11培養基的制備和保管管

17、理規程”制備相關檢驗用物料。導致驗證失敗。7人員培訓考評不到位。2對“2-01022-05質量控制實驗室消毒劑、無菌器具管理規程”、“2-01000-07質量控制實驗室管理規程”和“2-01012-11培養基的制備和保管管理規程進行培訓114對其人員進行“2-01022-05質量控制實驗室消毒劑、無菌器具管理規程”、“2-01000-07質量控制實驗室管理規程”和“2-01012-11培養基的制備和保管管理規程培訓，考評合格后上崗。711710驗證方法不正確1.驗證方案編寫不正確。2.未嚴格按照驗證方案開展驗證工作。導致驗證失敗。8檢測方案未經批準。1對驗證方案進行審核181.驗證方案審核批準

18、后方可開展確驗證工作。2.驗證方案培訓后方可實施。8118序號項目潛在的失效模式潛在的失效后果嚴重性S潛在失效造成原因發生可能性O現有控制措施可檢測性DRPN責任及目標完成日期措施結果采取措施SODRPN11控制菌檢驗結果不符合實驗組無菌落生長，供試品可能有抑菌性。導致驗證失敗。101.供試品可能對試驗菌存在抑制作用。2.試驗人員判斷錯誤。2采用薄膜過濾法或者培養基稀釋法消除產品抑菌性120方案批準后15個工作日1.可考慮采用薄膜過濾法或者培養基稀釋法消除產品抑菌性。2.對實驗室人員進行培訓，結果觀察時實施復核制度。10111012實驗組菌種回收率不達標各實驗組菌落回收率高于或低于標準范圍。導

19、致驗證失敗。101.供試品可能對試驗菌存在抑制作用。2.試驗人員計數錯誤。2采用薄膜過濾法或者培養基稀釋法消除產品抑菌性120方案批準后15個工作日1.可考慮采用薄膜過濾法或者培養基稀釋法消除產品抑菌性。2.對實驗室人員進行培訓，結果觀察時實施復核制度。101110序號項目潛在的失效模式潛在的失效后果嚴重性S潛在失效造成原因發生可能性O現有控制措施可檢測性DRPN責任及目標完成日期措施結果采取措施SODRPN13樣品儲存環境樣品儲存環境溫度、濕度異常。不符合樣品規定的存放環境。導致樣品被污染或失效。7樣品存放環境溫濕度控制不當。2嚴格控制樣品存放環境溫濕度114每天定期觀察每天定期觀察樣品存放

20、室的溫濕度，若異常，及時采取措施調整。711714培養環境及觀察環境培養箱培養環境溫濕度和觀察環境異常。培養計數結果不準確，導致驗證失敗。7培養箱溫濕度控制不準確及觀察方法不正確。2每日定期觀察培養箱溫濕度114每天定期觀察1.每天定期觀察培養箱的溫度，若異常，及時采取措施。2.對觀察方法進行培訓。7117序號項目潛在的失效模式潛在的失效后果嚴重性S潛在失效造成原因發生可能性O現有控制措施可檢測性DRPN責任及目標完成日期措施結果采取措施SODRPN15潔凈區環境（供試品溶液檢查環境）1.潔凈區溫濕度、壓差異常。2.潔凈區環境被污染。影響驗證結果。71.檢測環境溫濕度、壓差控制不當。2.未定期

21、對潔凈區進行清潔和消毒。3.未定期監測潔凈區的環境。2每天定期觀察潔凈區溫濕度、壓差114每天定期觀察1.每天定期觀察潔凈區溫濕度、壓差，若異常，及時采取措施調整。2.按照SOP規定定期對潔凈區環境進行清潔和消毒；3.按照“2-01000-07質量控制實驗室管理規程”規定定期對潔凈區環境進行監測并出具報告。71174.6. 阿戈美拉汀片（25mg）微生物限度檢查方法驗證的不可接受風險匯總：編號項目/功能RPN（S×O×D）風險等級01控制菌檢驗結果不符合20（10×2×1）中02實驗組菌種回收率不達標20（10×2×1）中注：當1RP

22、N27，但嚴重性S×發生可能性O為10×2或9×2時，仍需按中等以上風險進行后續控制。四、驗證實施計劃1.確認前培訓方案批準后1個工作日完成驗證方案培訓。2.組織實施確認方案批準后15個工作日完成驗證方案的實施工作。3.出具報告 驗證方案實施完成后5個工作日出具報告。 五、驗證準備1.驗證依據1.1.中國藥典(2015年版) 四部：（1105）非無菌產品微生物限度檢查：微生物計數法；（1106）非無菌產品微生物限度檢查：控制菌檢查法。 1.2.非無菌產品微生物限度檢查：微生物計數法(SOP2-02567)；非無菌產品微生物限度檢查：控制菌檢查法（SOP2-0256

23、8）2.驗證條件2.1.試驗環境檢測日期房間名稱房間編號潔凈級別試驗溫度相對溫度環境測試報告書編號及結論環境監測報告復印件微生物限度檢查室1207-5C+A陽性室1212-5C+A2.2.使用的主要儀器及設備：儀器及設備名稱型號設備管理編號校驗有效期至生產廠家校準報告復印件電子天平pH計立式壓力蒸汽滅菌器（制備無菌器具）恒溫干燥箱自動漩渦混合儀生化培養箱（需氧菌）生化培養箱（霉菌和酵母菌）生化培養箱（控制菌）立式壓力蒸汽滅菌器(滅活)生物安全柜凈化工作臺2.3.菌種菌種名稱檢定菌編號配制菌液編號菌液有效期至菌種來源金黃色葡萄球菌CMCC（B）26003大腸埃希菌CMCC（B）44102銅綠假單

24、胞菌CMCC（B）10104枯草芽孢桿菌CMCC（B）63501白色念珠菌CMCC（F）98001黑曲霉CMCC（F）980032.4.培養基培養基名稱配制批號干粉批號干粉來源培養基適用性檢查報告復印件胰酪大豆胨瓊脂培養基沙氏葡萄糖瓊脂培養基胰酪大豆胨液體培養基沙氏葡萄糖液體培養基麥糠凱液體培養基麥糠凱瓊脂培養基2.5.稀釋液及溶液、消毒劑稀釋液及溶液（消毒劑）名稱配制批號有效期至pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液pH6.8無菌磷酸鹽緩沖液0.9%無菌氯化鈉溶液含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液0.2%新潔爾滅溶液75%乙醇溶液2.6.實驗方法 中國藥典(2015年

25、版) 四部：（1105）非無菌產品微生物限度檢查：微生物計數法；（1106）非無菌產品微生物限度檢查：控制菌檢查法。2.7.人員資質 驗證操作人員應具備微生物限度檢查上崗資質，且在驗證實施前應對其批準的驗證方案進行培訓，應能證明驗證人員能依照驗證方案正確實施。培訓時間培訓人參加培訓人員溯源資料確認人： 確認日期： 復核人： 復核日期： 六、驗證內容1.供試液的制備1.1.取供試品10g，加pH7.0無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液至100ml，充分振搖使混勻，作為1:10的供試液。1.2.取1:10供試品10ml，加pH7.0無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液至100ml，充分振搖使混勻，作為1:100的供試液。1

26、.3.取1:100供試品10ml，加pH7.0無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液至100ml，充分振搖使混勻，作為1:1000的供試液。 備注：供試液制備若需加溫時，應均勻加熱，且溫度不超過45。供試液從制備至加入檢驗用培養基，不得超過1小時。 2.菌液制備 2.1.接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、枯草芽孢桿菌的新鮮培養 物至胰酪大豆胨液體培養基中，3035培養1824小時；分別取上述培養物用0.9%無菌氯化鈉溶液或pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，依次稀釋至 、 、 、 制成每1ml含菌數為小于100cfu的菌懸液。 2.2.接種白色念珠菌的新鮮培養物至沙氏葡萄糖液體培養基中，2025培

27、養23 天；取此培養物用0.9%無菌氯化鈉溶液或pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，依次稀釋至 ，制成每1ml含菌數為小于100cfu的菌懸液。 2.3.將黑曲霉菌斜面的新鮮培養物接種至沙氏葡萄糖瓊脂斜面培養基上，2025培養5 7天，使大量的孢子成熟。加入3-5ml含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液或pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，將孢子洗脫。然后，采用適宜方法吸出孢子懸液至無菌試管內，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化鈉溶液或pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液依次稀釋至 ，制成每 1ml 含孢子數小于100cfu 的孢子懸液。 2.4

28、.上述菌懸液制備后若在室溫下放置，應在2小時之內使用；若保存在28，可在24小時內使用。黑曲霉孢子懸液可保存在28，在驗證過的貯存有效期內使用。3.計數方法的驗證3.1.需氧菌、霉菌及酵母菌計數（平皿法） 所加菌液的體積不得超過供試液體積的1%。為確認供試品中的微生物能被充分檢出，首先應選擇最低稀釋級的供試液進行計數方法適用性檢查。3.1.1.試驗組 取上述制備好的供試液，加入試驗菌液、混勻，使每1ml供試液或每張濾膜過濾的供試液中含菌量不大于100cfu。取 的供試液9.9ml和小于10000cfu的銅綠假單胞菌菌懸液0.1ml混勻后，吸取1ml注入平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養基 15

29、20ml，混勻，凝固，于3035倒置培養3天點計菌落數。平行制備2個平皿。取 的供試液9.9ml和小于10000cfu的金黃色葡萄球菌菌懸液0.1ml混勻后，吸取1ml注入平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養基1520ml，混勻，凝固，于3035倒置培養3天點計菌落數。平行制備2個平皿。取 的供試液9.9ml和小于10000cfu的枯草芽孢桿菌菌懸液0.1ml混勻后，吸取1ml注入平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養基1520ml，混勻，凝固，于3035倒置培養3天點計菌落數。平行制備2個平皿。取 的供試液9.9ml和小于10000cfu的白色念珠菌菌懸液0.1ml混勻后，吸取1ml注入平皿中，立

30、即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養基1520ml，混勻，凝固，于3035倒置培養3天點計菌落數。平行制備2個平皿。取 的供試液9.9ml和小于10000cfu的黑曲霉菌懸液0.1ml混勻后，吸取1ml注入平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養基1520ml，混勻，凝固，于3035倒置培養3天點計菌落數。平行制備2個平皿。取 的供試液9.9ml和小于10000cfu的白色念珠菌菌懸液0.1ml混勻后，吸取1ml注入平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養基1520ml，混勻，凝固，于2025倒置培養5天點計菌落數。平行制備2個平皿。取 的供試液9.9ml和小于10000cfu的黑曲霉菌懸液0.1ml混勻后，吸取1m

31、l注入平皿中，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養基1520ml，混勻，凝固，于2025倒置培養5天點計菌落數。平行制備2個平皿。 3.1.2.菌液組取小于100cfu的銅綠假單胞菌菌懸液、金黃色葡萄球菌菌懸液、枯草芽孢桿菌菌懸液、白色念珠菌菌懸液、黑曲霉菌懸液各1ml，注入平皿中，立即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養基約1520ml，混勻，凝固，于3035倒置培養3天點計菌落數。各平行制備2個平皿。取小于100cfu的白色念珠菌菌懸液、黑曲霉菌懸液各1ml，立即傾注沙氏葡萄糖瓊脂培養基各1520ml，混勻，凝固，于2025倒置培養5天點計菌落數。各平行制備2個平皿。3.1.3.供試品對照組取 的供試液1ml，注

32、入平皿中，分別立即傾注1520 ml溫度不超過45胰酪大豆胨瓊脂培養基和沙氏葡萄糖瓊脂培養基，混勻，凝固，胰酪大豆胨瓊脂培養基3035倒置培養3天點計菌落數，沙氏葡萄糖瓊脂培養基2025倒置培養5天點計菌落數。各組平行制備2個平皿。 3.1.4.結果判斷3.1.4.1計算公式：稀釋劑對照組菌數的回收率稀釋劑對照組的平均菌落數供試品對照組的平均菌落數菌液組的平均菌落數試驗組菌數的回收率試驗組的平均菌落數供試品對照組的平均菌落數菌液組的平均菌落數 判定標準：實驗組、稀釋劑對照組（如有）的菌數回收率應在0.52之間。若各試驗菌的回收率均符合規定，照所用的供試液制備方法及計數方法進行該供試品的需氧菌總

33、數、霉菌和酵母菌總數計數。 3.1.5試驗結果 供試品批號 、 、 。菌種類型試驗次數菌液組試驗組供試品對照組回收率銅綠假單胞菌1平均2平均3平均金黃色葡萄球菌1平均2平均3平均枯草芽孢桿菌1平均2平均3平均白色念珠菌（需氧菌驗證）1平均2平均3平均黑曲霉（需氧菌驗證）1平均2平均3平均白色念珠菌（霉菌、酵母菌驗證）1平均2平均3平均黑曲霉（霉菌、酵母菌驗證）1平均2平均3平均 結果判定： 驗證人： 日期： 復核人： 日期： 4.控制菌檢查4.1.（大腸埃希菌）的驗證4.1.1.試驗組取 的供試液 ml（取相當于1g或1ml供試品的供試液），小于100cfu的大腸埃希菌菌懸液1ml，加至約10

34、0ml的胰酪大豆胨液體培養基，于3035培養1824小時。4.1.2.陰性對照組取pH7.0無菌氯化鈉蛋白胨緩沖液10ml，加至約100ml的胰酪大豆胨液體培養基，于3035培養1824小時。4.1.3.陽性對照組取小于100cfu的大腸埃希菌菌懸液1ml，加至約100ml的胰酪大豆胨液體培養基，于3035培養1824小時。.檢查取上述培養物1ml，接種至含100ml 麥康凱液體培養基內培養，4244培養2448小時。取麥康凱液體培養物劃線接種于麥康凱瓊脂平板上3035培養1872小時。檢查結果如下： 第一次試驗結果： 供試品批號 序號步 驟實驗組陽性對照組陰性對照組1胰酪大豆胨液體培養基，3035培養1824小時2麥康凱液體培養基，4244培養2448小時3取麥康凱液體培養物劃線接種于麥康凱瓊脂平板上，3035培養1872小時。若麥康凱瓊脂培養基平板上有菌落生長，應進行分離、純化及適宜的鑒定試驗, 確證是否為大腸埃希菌；若麥康凱瓊脂培養基平板上沒有菌落生長，或雖有菌落生長但鑒定