1、生產設備清潔后取樣方法和檢驗方法驗證方案 目 錄1 概述2 目的3 驗證小組成員與職責3.1 驗證小組成員3.2 驗證小組職責4. 驗證正文4.1 驗證前確認4.2 驗證方法描述4.3 驗證內容4.3.1檢測方法驗證部分4.3.2綜合回收率驗證5. 偏差總結6. 再驗證情況7. 補充與修定8. 評價與結論9. 附錄1. 概述 生產過程中所用的生產設備均可能有殘留物遺留，為了最大程度的避免由于上一批次生產產品的殘留影響下一批次或其他品種，故必須對生產所用的設備進行清潔。清潔后要對該清洗方法進行取樣檢測殘留量。一般通常的取樣方法為棉簽擦拭法和淋洗法。2. 目的本驗證方案的目的是考察清洗驗證涉及取樣

2、過程和所用檢測方法的過程，是對人員取樣操作、殘留物轉移、測試過程的考察，考察項目最低定量限、線性、綜合回收率等。3. 驗證小組成員與職責3.1驗證小組成員組長：xxx組員：xxx、xxx3.2驗證小組職責組長：質量副總經理xxx，負責批準驗證方案和驗證報告。組員：xxx，參與驗證方案的制定，對驗證操作過程監督檢查，收集驗證資料和數據，參與起草驗證方案和驗證報告。組員：xxx，負責參與驗證方案的制定，對所取樣品進行化驗，收集數據并報告結果，審核驗證報告。組員：xxx，負責審核驗證方案，審核清潔驗證方案和報告，協助驗證方案的實施，并審核驗證報告。4. 驗證正文4.1驗證前確認棉花/棉簽 材質：棉簽

3、 紫外分光光度計 編號： 校驗有效期 接受 不接受 天平 編號： 校驗有效期 接受 不接受 批號： 4.2 檢測方法描述檢測過程結構中含有很強的紫外吸收官能團，如雙鍵的苯環等，故可采用紫外分光光度法。1cm比色皿，在合適的最大的吸收波長處，以甲醇為空白，測定樣品溶液的吸收度。根據測得的吸收度來計算樣品殘留的量。貯備液的配制取對照品約10mg，精密稱定，置于200ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，混勻，得貯備液（50g/ml）。 計算測定時同時進行對照品的測定，根據朗伯比爾定律，按下列公式計算：A樣C樣= C對A對A：分別為樣品和貯備液的吸收度C：分別為樣品和貯備液的溶液濃度4.3 驗證內容

4、 4.3.1檢測方法驗證部分為了保證清洗驗證和日常清洗結果的可靠性，故對本方案采用的紫外分析方法考察了最大吸收波長確定、最低檢測限/定量限、線性和范圍、精密度、回收率。 其中線性和范圍、精密度和回收率項目考察合并在綜合回收率考察中，見4.3.2章節。.1最大吸收波長的確定取貯備液，以甲醇為空白，采用紫外分光光度儀，在400nm到190nm范圍內進行掃描，找出最合適的最大吸收波長，并考察溶劑是否干擾。結果：最合適的最大吸收波長為： nm，吸收圖譜見附錄34.3.1.2最低檢測限/定量限 采用50g/ml的貯備液逐級稀釋成不同濃度的溶液測定吸收度，如25g/ml、10g/ml、5.0g/ml、2.

5、5g/ml等，直至最低定量限。 檢測限以1/3的最低定量限計算。濃度（g/ml）吸收度5025105.02.5最低定量限LOQ最低檢測限LOD4.3.1.3線性和范圍精密稱取適量對照品，用甲醇制成5個不同濃度溶液，作為研究溶液。5個不同濃度的溶液及其確定依據見附錄1描述。并以濃度(g/ml)為橫坐標，吸收度為縱坐標的線性關系曲線，得到的R2應0.99，線性曲線見附錄4。濃度（g/ml）吸收度 吸收曲線方程 R2 .4 結論： 4.3.2綜合回收率驗證.1棉簽擦拭法綜合回收率驗證A. 試驗溶液配制 精密稱取適量對照品，用甲醇制成5個不同濃度溶液，作為研究溶液。 5個不同濃度的溶液及其確定依據見附

6、錄2描述。B. 驗證過程B1. 準備一塊平整光滑的不銹鋼板材，尺寸為30cm30cm。在鋼板上劃出20cm20cm 的區域。將此區域分割成5cm5cm的16個小塊。分別將約10ml試驗溶液定量裝入噴霧器，盡量均勻地噴在20cm20cm的區域內，根據實際噴出的溶液量計算單位面積上產品的量。B2. 自然晾干不銹鋼板。B3. 將棉簽用無水甲醇潤濕，除去棉簽上多余的溶液，按照“擦拭法和淋洗法取樣程序”進行。擦拭區域選擇整個噴涂面的中心區域單位面積(5cm5cm)，整個擦拭采用同一根棉簽。每個濃度平行試驗3次。B4. 取樣結束后，將棉簽分別放入25ml的試管中，用10ml無水甲醇稀釋至刻度，并標注相關取

7、樣信息。B5. 將上述15份樣品溶液和試驗溶液依次按照本方案中描述檢測方法進行測定。B6. 回收率計算公式回收率(%) =實際測得值理論測得值100C. 接受標準綜合回收率：70% 綜合回收率RSD：15%D. 實驗結果棉簽擦拭法綜合回收率結果系列檢測溶液實際測得值g/ml對應試驗濃度實際測得值g/ml理論加入濃度g/ml回收率%試驗濃度1123試驗濃度2123試驗濃度3123試驗濃度4123試驗濃度5123平均回收率70%回收率RSD%15%備注：1. 檢測溶液實際測得值為經噴灑、稀釋后得到的檢測樣品；2. 對應試驗濃度實際測得值為由檢測得到的數值轉換至噴灑至表面上未擦拭前的濃度。E. 結論

8、 .1淋洗法綜合回收率驗證A. 試驗溶液配制 精密稱取適量對照品，用甲醇制成5個不同濃度溶液，作為研究溶液。 5個不同濃度的溶液及其確定依據見附錄2描述。B. 驗證過程B1. 精密吸取1ml試驗溶液置于50ml圓底燒瓶中，并旋轉燒瓶使試驗溶液均勻地分布在燒瓶下部內表面上。自然干燥或在30下溫和干燥。B2. 向燒瓶中加入50ml甲醇，使之延壁快速留下，同時不斷轉動燒瓶。輕微搖晃燒瓶使溶液均勻。作為測試溶液。每個濃度平行試驗3次。B3. 將上述15份樣品溶液和試驗溶液依次按照4.2.1.1檢測方法進行測定。B4. 回收率計算公式回收率(%) =實際測得值理論測得值100C. 接受標準綜合回收率：7

9、0% 綜合回收率RSD：15%D. 實驗結果淋洗法綜合回收率結果系列檢測溶液實際測得值g/ml對應試驗濃度實際測得值g/ml理論加入濃度g/ml回收率%試驗濃度1123試驗濃度2123試驗濃度3123試驗濃度4123試驗濃度5123平均回收率70%回收率RSD%15%E. 結論 6. 偏差總結如果出現偏差請詳細記錄，若沒有以N/A表示。7 .再驗證情況如果存在下列情形之一時，須進行設備清潔程序的再驗證。 清洗方法發生本質性的改變時； 設備體積、材質等參數發生改變會影響清潔效果時；8. 修改與補充如果出現修訂于補充，請詳細記錄，若沒有以N/A表示。9. 評價與結論根據獲得的驗證數據情況進行評價。

10、10. 附錄附錄1 線性范圍測試溶液濃度的確定附錄2 回收率驗證測試溶液濃度的確定附錄3 最大吸收波長掃描圖附錄4 線性和范圍關系曲線附錄1 線性范圍測試溶液濃度的確定 本次研究線性范圍濃度點確定依據以LOQ濃度點為最低濃度點，最大允許殘留量（Ld）為最高濃度點來設定線性范圍的濃度點。 最低濃度點確定由于LOQ即為在檢測時該方法能檢測到的最低濃度，故直接將LOQ濃度最為最低濃度點。 最高濃度點確定采用擦拭法和淋洗法兩種方式下最大允許殘留量相對應于可供檢測時的最高濃度點作為線性研究時的最高濃度。1. 擦拭法方式下最高濃度點確定根據“產品生產設備清潔程序驗證方案”中計算得到的擦拭法下的最大允許殘留

11、量，Ld為71.3g /cm2；在清洗后取樣檢測時溶液中濃度為178.25g/ml。 說明：在按25cm2擦拭后取樣后，需要用10ml甲醇溶解后才能測定，在假定DOND3回收率在100%的情況下（即被甲醇100%提取），此時擦拭前的濃度至少達到178.25g/ml時方能保證置于最大允許殘留量的限度（Ld為71.3g /cm2）；故在擦拭法方式下最大允許殘留量對應的檢測時濃度為178.25g/ml。2. 淋洗法方式下最高濃度點確定根據“產品生產設備清潔程序驗證方案”中計算得到的淋洗法下的最大允許殘留量，最大Ld 為109.0g /ml，最小Ld 為32.9g /ml；該濃度即為在清洗后取樣檢測時

12、的濃度。故在淋洗法方式下最大允許殘留量對應的檢測時濃度為109.0g/ml。 本次研究線性范圍濃度點最高濃度點：178.25g/ml最低濃度點：LOQ （如LOQ小于32.9g /ml時，以32.9g /ml為最低濃度）另外中間3個濃度點在范圍內最高和最低濃度范圍內合理均衡布置附錄2回收率驗證測試溶液濃度的確定 本次研究回收率濃度點確定依據以LOQ濃度點為最低濃度點，最大允許殘留量（Ld）為最高濃度點來設定回收率的濃度點。 擦拭法回收率測試溶液濃度的確定1. 最高濃度點最大允許殘留量（Ld）來設定根據“產品生產設備清潔程序驗證方案”中計算得到的擦拭法下的最大允許殘留量，Ld為71.3g /cm

13、2；在清洗后取樣檢測時溶液中濃度為178.25g/ml。 說明：在按25cm2擦拭后取樣后，需要用10ml甲醇溶解后才能測定，在假定3回收率在100%的情況下（即被甲醇100%提取），此時擦拭前的濃度至少達到178.25g/ml時方能保證置于最大允許殘留量的限度（Ld為71.3g /cm2）；由于在按本方案進行模擬擦拭法回收率研究時，需要將取研究溶液10ml噴在20cm20cm的區域內，然后在5cm5cm區域內棉簽擦拭取樣，取樣后需要用10ml甲醇溶解后才能測定，考慮到棉簽轉移和檢測方法的綜合回收率最低限為70%，故此時研究的溶液濃度須達到4074g/ml時方能保證在檢測時檢測濃度達到最大允許

14、殘留量的限度（Ld為71.3g /cm2；擦拭后檢測時濃度178.25g/ml）；計算如下：178.25g/ml（20cm20cm）10ml/（5cm5cm）10ml70%）=4074g/ml2. 最低濃度點以LOQ濃度來設定：由于在檢測時該方法能檢測到的最低濃度為LOQ，由于在按本方案進行模擬擦拭法回收率研究時，需要將取研究溶液10ml噴在20cm20cm的區域內，然后在5cm5cm區域內棉簽擦拭取樣，取樣后需要用10ml甲醇溶解后才能測定，考慮到棉簽轉移和檢測方法的綜合回收率最低限為70%，故此時研究的溶液濃度須達到23LOQ時方能保證在檢測時檢測濃度達到最低濃度點以LOQ； 計算如下：L

15、OQ（20cm20cm）10ml/（5cm5cm）10ml70%）=23 LOQ3. 故設定的濃度點為（即需要配制的取樣方法和檢驗方法回收率研究溶液濃度）:最高濃度點：4074g/ml最低濃度點：23 LOQ另外中間3個濃度點在范圍內最高和最低濃度范圍內合理均衡布置 淋洗法回收率測試溶液濃度的確定1. 最高濃度點最大允許殘留量（Ld）來設定根據“產品生產設備清潔程序驗證方案”中計算得到的淋洗法下的最大允許殘留量，Ld為最小32.9g /ml；最大109.0g /ml。該濃度即為在清洗后取樣檢測時的濃度。由于在按本方案進行模擬擦拭法回收率研究時，需要將取研究溶液1ml置于50ml圓底燒瓶中，待干后加入50ml甲醇溶解提取后得到的溶液才能測定，考慮到棉簽轉移和檢測方法的綜合回收率最低限為70%，故此時研究的溶液濃度須分別達到2350g/ml和7786g/ml時方能保證在檢測時檢測濃度達到最大允許殘留量的限度（Ld為最小32.9g /ml；最大109.0g /ml）；計算如下：32.9g/ml50ml / 70%=2350g/ml 109.0g/ml50ml / 70%=7786g/ml2. 最低濃度點以LOQ濃度來設定 由于在檢測時該方法能檢測到的最低濃度為LOQ，由于在按本方案進行模擬擦拭法回收率研究時，需要將取研究溶液1ml置于50ml圓底燒瓶中，待干