1、喉癌發生發展過程中TRAIL和Survivin蛋白的表達研究    【摘要】  探討喉癌發生發展過程中TRAIL、Survivin蛋白的表達及與喉癌病理特征的關系。方法：采用免疫組化SP法對48例喉癌患者手術后大體標本中喉正常黏膜、不典型增生及浸潤癌組織進行檢測及分析。結果：TRAIL蛋白從正常黏膜-不典型增生-浸潤癌呈漸進性低表達，而Survivin蛋白則呈漸進性高表達。喉浸潤癌組織中TRAIL蛋白的低表達與Survivin蛋白的高表達呈負相關(r=-0.510, P<0.01)。結論：TRAIL和Survivin兩種蛋白參與了喉癌的發

2、生發展，兩者的表達失調與喉癌發生密切相關。 【關鍵詞】  喉腫瘤 病理學 免疫組織化學 腫瘤壞死因子相關的凋亡誘導配體 凋亡抑制基因      AExpression of TRAIL and Survivin proteins in the carcinogenesis and    ABSTRACT  Objective: To explore the correlation between the expressions of TRAIL and Survivin proteins and

3、 the pathologic features of laryngeal epithelial lesions. Methods: Immunohistochemistry was used to determine the expressions of TRAIL and Survivin proteins in normal mucosa and displasia and invasive carcinoma tissues of 48 cases of laryngeal carcinoma. Results: The expression of Survivin protein&#

4、160; progressively increased, whereas that of TRAIL protein gradually decreased in a route of normal mucosa and displasia and invasive carcinoma tissues. The expression of TRAIL protein in laryngeal invasive carcinoma was negatively correlated with that of Survivin protein (r=-0.510, P<0.01). Con

5、clusions: The expressions of TRAIL and Survivin proteins are significantly related to the genesis and progression of laryngeal carcinoma.    KEY WORDS  Laryngeal neoplasms; Pathology; Immunohistochemistry;  Tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand;  Survi

6、vin    腫瘤壞死因子相關的凋亡誘導配體(TNF related apoptosis inducing ligand, TRAIL)屬于腫瘤壞死因子家族，可激活腫瘤細胞的凋亡1； Survivin基因是凋亡抑制基因的新成員，與腫瘤的發生發展及預后密切相關2。本研究通過免疫組化的方法檢測兩種蛋白在喉癌、不典型增生及正常組織中的表達，以探討其陽性表達與喉癌發生發展的關系。    1  資料與方法    1.1  材料  選擇我院2000 2005年收集的喉癌手術標本48例，每

7、例均在喉正常黏膜、癌旁及癌組織 處分別取材，常規脫水，石蠟包埋。第一抗體TRAIL和Survivin多克隆抗體為Sigma公司產品，SP免疫組化試劑盒購自北京中山公司。第一抗體工作液濃度TRAIL為1:100,Survivin為1:200， PBS替代第一抗體作陰性對照。    1.2  檢測方法  常規脫蠟，3%過氧化氫液去除內源性過氧化物酶，正常羊血清封閉，分別加TRAIL和Surviv工作液，4?過夜，生物素標記二抗孵育，室溫靜置30?min,滴加辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，室溫靜置30?min, DAB顯色，蘇木素復染，中性樹膠封片。&

8、#160;   1.3  結果判定  陽性顯色為棕黃色，TRAIL和Survivin蛋白表達以胞漿著色為主，偶見胞核表達。計數5個高倍視野中陽性細胞的百分比，陽性細胞>10%的計為陽性。    1.4  統計學處理  兩樣本率的比較采用四格表資料的2檢驗及相關分析。    2  結  果    21  組織分型及分級  本組48例均為浸潤性鱗狀細胞癌，癌旁黏膜不典型增生40例，正常黏膜組織48例。浸潤

9、癌組織學分級: 級16例，級20例，級12例；有淋巴結轉移20例，無淋巴結轉移28例。    2.2  不同病變喉組織中TRAIL, Survivin蛋白的表達及其與浸潤癌臨床病理特征的關系  不同病變喉組織中TRAIL陽性表達水平按正常黏膜-不典型增生-浸潤癌順序逐漸降低（圖1 3）；而Survivin蛋白表達逐漸升高（圖4 6）。TRAIL的陽性表達水平與喉鱗狀細胞癌組織的分級呈負相關。、級鱗狀細胞癌呈高表達，而在級鱗狀細胞癌呈低表達或不表達，分級越高，TRAIL陽性表達率越低，即分化程度愈差，TRAIL表達愈低；本次實驗發現Survivi

10、n蛋白表達與分級無關，不同分化程度的浸潤癌中，Survivin蛋白表達無明顯變化，見表1。    圖 5  Survivin在不典型增生中表達陽性(SP法，×400)    2.3  喉浸潤癌組織中TRAIL蛋白的低表達與Survivin蛋白的高表達呈負相關  見表2。表1  TRAIL，Survivin蛋白的表達與喉癌臨床病理特征的關系表2  TRAIL和Survivin在喉癌組織中的表達關系百事通     3  討  論&

11、#160;   1995年Wiley等從人心肌的cDNA文庫中克隆出的TRAIL屬TNF超家族成員，人TRAIL基因定位于3號染色體長臂2區6帶(3q26),編碼281個氨基酸，其蛋白的分子質量是3.22×104?u，是二型跨膜蛋白質。TRAIL有兩類受體(死亡受體DR和“誘騙”受體Deft), TRAIL與靶細胞膜上的特異性死亡受體結合，通過其下游的受體結合分子向細胞內傳遞死亡信號，最后通過Caspase引發細胞凋亡3。    本組研究從喉正常黏膜、不典型增生到鱗狀細胞癌組織中TRAIL的表達逐漸減少，提示喉癌發生過程中TRAIL丟

12、失，可能由此造成TRAIL與TRAIL受體結合誘導的凋亡減少，從而促進了喉癌的發生發展，提示TRAIL與喉癌的發生發展有關。這為喉癌的治療提供了新的方向和理論依據。    臨床及病理上不典型增生為癌前病變，本結果顯示，TRAIL及Survivin在不典型增生與浸潤癌中表達差異無統計學意義(P>0.05)，從凋亡調節因子方面支持了不典型增生為癌前病變的觀點。TRAIL在不同級別癌組織中的表達有差異。在高分化癌組織中，以癌巢的中心部位表達最強，而在增生旺盛的周邊部位表達弱，在低分化的癌組織中表達較弱，彌漫分布。細胞分化程度愈差，TRAIL表達愈弱，表明TRAIL

13、的分布與細胞的分化有關。TRAIL低表達可能是分化差的標志。細胞凋亡過程受凋亡促進因子(p53, Fas等)和凋亡抑制因子(Bcl?2, Survivin等)的共同調節。Survivin可直接作用于Caspase，主要抑制Caspase?3和Caspase?9活性，阻斷細胞的凋亡過程4。應用敏感的RT?PCR技術發現，Survivin在癌組織中的表達是一個漸進的過程，隨著正常細胞向癌細胞的惡性轉化，Survivin的表達逐漸升高5。本實驗結果顯示，從正常黏膜-不典型增生-浸潤癌，Survivin蛋白表達的陽性率依次升高，因此認為Survivin的表達可能涉及到細胞生物學轉化的中間環節，正常及增

14、生黏膜上皮Survivin陽性表達提示形態學尚正常的組織存在癌變的可能，因而具有早期診斷的價值。    TRAIL具有誘導細胞凋亡的作用，而Survivin是凋亡抑制因子，二者的表達失調可能是細胞癌變的原因6。本研究表明，在喉癌及其癌前病變中，TRAIL的表達與Survivin的表達提示二者在體內相互抑制，在喉癌的發生發展過程中可能起著一定的作用。但是腫瘤的發生是多基因共同作用的結果，TRAIL, Survivin與其他癌基因、抑癌基因、凋亡相關基因的關系，還有待進一步研究。 【參考文獻】  1 ZK(#Grifith TS, Lynch DH

15、. Trail: a molecule with multiple receptors and control mechanismaJ.Curr Opin Immunol, 1998, 10(4):559?563.2 王孝養，張珍祥.Survivin與腫瘤細胞凋亡J.中華病理學雜志，2002,31(1):68?70.3 Wiley SR, Schooley K, Smolak PJ, et al. Identification and characterization of a new member of the TNF family that induces apoptosisJ. Immunity, 1995, 3(6):673?682.4 Conway EM, Pollefeyt S, Steiner MM, et al. Deficiency of Survivin in transgenicmic