1、蕓香苷的提取、分離和鑒定蕓香苷的提取、分離和鑒定一、實驗目的一、實驗目的 1.熟悉利用化合物的物理、化學性質對其進行分析和鑒定的方法。 2.掌握紫外光譜在黃酮類化合物結構鑒定中的方法和應用。二、實驗原理二、實驗原理 主要是利用蕓香苷的物理化學性質對其進行提取分離。三、操作要點三、操作要點 1.蕓香苷的提取蕓香苷的提取水提取法水提取法 稱取槐花米粗粉20 g（壓碎），加沸水300 ml，加熱煮沸30 min，紗布趁熱過濾，殘渣同法再操作一次，合并兩次濾液，室溫放置析晶，待全部析出后，減壓抽濾，用蒸餾水洗滌蕓香苷結晶，抽干，得粗制蕓香苷，置空氣中干燥后，稱重。 2.蕓香苷的精制蕓香苷的精制 取粗制

2、蕓香苷2 g，加蒸餾水400 ml，煮沸至蕓香苷全部溶解，趁熱抽濾，冷卻后即可析出晶體，抽濾，得蕓香苷精制品，置空氣中干燥后，稱重。 3.蕓香苷的水解蕓香苷的水解 取精制蕓香苷1g，研細后置于250ml圓底燒瓶中，加入2%硫酸100ml，加熱回流30min，瓶中混濁液逐漸變為澄清的棕黃色液體，最后生成鮮黃色沉淀。放冷沉淀，抽濾，保存濾液（應為澄清無色液體），用做糖的檢查，沉淀物為蕓香苷苷元（槲皮素），用蒸餾水洗至中性，抽干水分，晾干，稱重。粗制槲皮素再用50%乙醇重結晶得精制的含2分子結晶水的槲皮素。 取蕓香苷水解后的濾液10 ml，加飽和氫氧化鋇溶液（或碳酸鈣粉末）中和至中性，濾去白色的硫酸

3、鋇沉淀，濾液水浴60濃縮至23 ml，加23 ml乙醇溶解，作為糖的供試液。四、鑒定四、鑒定 1.呈色反應 取蕓香苷及槲皮素精品約10 mg，各用5 ml乙醇溶解，制成樣品溶液，按下列方法進行試驗，比較苷元和苷的反應情況。 a. Molish反應 取樣品溶液l ml，加10-萘酚溶液0.5 ml，振搖后斜置試管，沿管壁滴加0.5 ml硫酸，靜置，觀察并記錄液面交界處顏色變化。 b. 鹽酸鎂粉反應 蕓香苷與槲皮素溶液分別置于兩試管中，加入金屬鎂粉少許，鹽酸2滴3滴，觀察并記錄顏色變化。 c. 醋酸鎂紙片反應 取兩張濾紙條，分別滴兩滴蕓香苷、槲皮素的乙醇溶液，然后各加1醋酸鎂甲醇溶液兩滴，于紫外光

4、燈下觀察熒光變化，記錄現象。 d. 三氯化鋁紙片反應 在兩張濾紙條上分別滴加蕓香苷、槲皮素醇溶液后，各加1%三氯化鋁乙醇溶液兩滴，觀察顏色變化，記錄現象。 e. 鋯檸檬酸反應 取樣品溶液2 ml，加入2%二氯氧鋯甲醇溶液3滴4摘，觀察顏色，然后加入2檸檬酸甲醇溶液3滴4滴，觀察并記錄顏色變化。 2.色譜鑒定 a. 蕓香苷和槲皮素的紙色譜 層析材料：定性濾紙。 點 樣：提取的槲皮素承蕓香苷的乙醇溶液和對照品的乙醇溶液。 展開劑：正丁醇醋酸水（4:1:5）上層溶液。 展開方式：預飽和后，上行展開。 顯 色：噴灑三氯化鋁試劑前后，置日光及紫外光燈、（365nm）下檢視色斑的變化。 觀察記錄：記錄圖譜

5、及斑點顏色。 b. 蕓香苷與槲皮素的聚酰胺色譜 層析材料：聚酰胺薄膜。 點 樣：提取的蕓香苷與槲皮素的乙醇溶液和對照品的乙醇溶液。 展開劑：乙醇水（7:3）或甲醇水（8:2）。 展開方式：上行展開。 顯 色：噴灑三氯化鋁試劑前后，置日光及紫外燈光（365nm）下檢視色斑的變化。 觀察記錄：記錄圖譜及斑色顏色。 c. 糖的色譜鑒定 層析材料：定性濾紙。 點 樣：糖的供試液及葡萄糖、鼠李糖對照品溶液。 展開劑：正丁醇醋酸水（4:1:5）上層溶液。 展開方式：上行展開。 顯 色：苯胺鄰苯二甲酸試液，噴灑后先用電吹風冷吹至于，再吹熱風至出現斑點為止。 觀察記錄：記錄圖譜及斑點顏色。 五、思考題五、思考題 1黃酮類化合物還有哪些提取方