1、項目檢測-腫瘤標志物檢測(09)一、概 述腫瘤概述腫瘤：腫瘤： 生物機體內由遺傳性發生改變并具有相對自主生長能力的細胞所構成的新生組織，統稱為腫瘤。腫瘤的種類腫瘤的種類:l良性腫瘤l惡性腫瘤腫瘤現況l根據WHO資料，全球范圍內惡性腫瘤是人類僅次于心腦血管病的第二大死亡原因，占總死亡人數的22%，并逐年增加。 l2013年腫瘤年報，中國年新發癌癥病例數309萬例，按照平均壽命74歲計算，人一生中患惡性腫瘤的幾率是22%。l2013年腫瘤年報顯示，從發病率來看，肺癌、乳腺癌、胃癌、肝癌、食管癌、結直腸癌、宮頸癌是我國常見的惡性腫瘤。從死亡率來看，肺癌、肝癌、胃癌、食管癌、結直腸癌、乳腺癌、胰腺癌是

2、主要的腫瘤死因。中國腫瘤發病率和死亡率總體情況總體腫瘤發病率和死亡率較高：總體腫瘤發病率和死亡率較高： l腫瘤發病率：每10萬人中有286人患癌；人一生中患癌癥的概率為22%l腫瘤死亡率：每10萬人有181人患癌死亡；人一生中患癌癥死亡的概率為13%患癌人群中，因患癌而死亡的概率高達患癌人群中，因患癌而死亡的概率高達63%前10位惡性腫瘤發病構成2013腫瘤登記年報前10位惡性腫瘤死亡構成2011腫瘤登記年報腫瘤防治原則惡性腫瘤的防治原則：惡性腫瘤的防治原則：l早期發現l早期診斷l早期治療世界衛生組織（世界衛生組織（WHO）指出：）指出：若能早期診斷并及時治療，若能早期診斷并及時治療，90%9

3、5%的腫瘤是可以治愈的。的腫瘤是可以治愈的。腫瘤檢測手段l影像學檢測影像學檢測 通過X線、B超、CT、核磁共振成像等手段。通常發現時腫瘤基本已經錯過治療的最佳時機。l腫瘤標志物檢測腫瘤標志物檢測 簡單易行，選擇合適的腫瘤標志物便于早期發現。l病理切片檢測（金標準）病理切片檢測（金標準） 病理切片結果出來時腫瘤已經到了中晚期。腫瘤重量 1g 10 1mg1061g109 10-100g1010-11 1kg1012臨床前期，可持續數月至數年腫瘤細胞數免疫學方法影像學方法晚期早期的診斷閾值 腫瘤標志物檢測技術腫瘤標志物檢測技術幾乎是迄今為止早期發現無癥狀微灶腫瘤的唯一途徑。可先于X線、超聲、CT

4、、MRI 或 PET-CT 等物理檢查發現腫瘤。腫瘤的發展過程腫瘤標志物u 腫瘤標志物（腫瘤標志物（Tumor Marker，TM）是指在腫瘤的發生和增殖過程中，由腫瘤細胞本身所產生的或者是由機體對腫瘤細胞反應而產生的，反映腫瘤存在和生長的一類物質，包括蛋白質、激素、酶（同工酶）及癌基因產物等。u 腫瘤標志物的作用：腫瘤標志物的作用：l腫瘤早期篩查l腫瘤的診斷和鑒別診斷l腫瘤預后評估和分期l腫瘤療效及復發監測l腫塊良惡性狀況鑒別診斷理想的腫瘤標志物 l靈敏度100%；l特異性100%；l器官特異性；l與腫瘤的大小或分期有關；l與預后有關；l監測腫瘤的復發目前的腫瘤標志物均未達到上述要求，但如正

5、確合理使用，仍有很目前的腫瘤標志物均未達到上述要求，但如正確合理使用，仍有很大臨床價值，關鍵是要正確評價腫瘤標志物檢測的臨床意義。大臨床價值，關鍵是要正確評價腫瘤標志物檢測的臨床意義。 常見腫瘤標志物AFP 甲胎蛋白CEA 癌胚抗原Ferritin 鐵蛋白CA12-5 腫瘤相關抗原CA12-5CA19-9 腫瘤相關抗原CA19-9CA153 腫瘤相關抗原CA153CA72-4 腫瘤相關抗原CA724CA242 腫瘤相關抗原CA242CA50 腫瘤相關抗原CA50CYFRA2101 細胞角蛋白19片段NSE 神經元特意性烯醇化酶PSA 前列腺特異抗原fPSA 游離前列腺特異抗原甲胎蛋白（AFP）

6、臨床意義：臨床意義：lAFP是原發性肝癌的最佳腫瘤標志物，是原發性肝癌的最佳腫瘤標志物， 80% AFP400ng/ml，近，近20% AFP正常；正常；l內胚層癌、畸胎瘤、睪丸癌、卵巢癌、胃癌與其伴肝轉移者AFP可升高。 l病毒性肝炎、肝硬化絕大部分AFP0.25多為良性疾病， fPSA/PSA0.16高度提示前列腺癌。神經特異性烯醇化酶（NSE）臨床意義臨床意義: lNSE是小細胞肺癌（是小細胞肺癌（SCLC）首選腫瘤標志物，診斷陽性率為）首選腫瘤標志物，診斷陽性率為91%。l與CYFRA21-1聯合檢測，將會顯著提高肺癌的檢出率；l有助于鑒別大、小細胞性肺癌；l對療效有很好的指導意義；l

7、是神經母細胞瘤的標志物；l可提示用于神經內分泌腫瘤的診斷及治療檢測，如胰島細胞瘤、嗜細胞瘤、甲狀腺瘤等。NSE主要來源于神經細胞核神經內分泌細胞，以及這些細胞引發的腫瘤細胞中。鐵蛋白（Ferritin）鐵蛋白由人體網狀內皮細胞分泌，人體內的2/3的鐵在肝、脾、骨髓和腸黏膜細胞中，某些腫瘤細胞也可合成并釋放鐵蛋白。臨床意義：臨床意義：l原發性肝癌診斷中鐵蛋白可以作為原發性肝癌診斷中鐵蛋白可以作為AFP的補充指標，尤其在血清的補充指標，尤其在血清AFP呈陰性的呈陰性的疑診者，鐵蛋白測定是不可缺少的一個補充檢查項目。疑診者，鐵蛋白測定是不可缺少的一個補充檢查項目。l肝癌、肺癌、膽管癌、胰頭癌、淋巴瘤

8、、白血病、泌尿系腫瘤、腦腫瘤、鼻咽癌、乳腺癌、宮頸癌、卵巢癌、多發性骨髓瘤、非何杰金氏病等SF升高。l原發性肝癌，76%的肝轉移病人鐵蛋白含量高于400g/L，鐵蛋白與AFP聯合檢測可使陽性率達到90%以上。糖類抗原125（CA125）CA125 是一種高分子量糖蛋白，存在于胎兒的體腔上皮來源的組織中，包括腹膜、胸膜和心包膜。正常人輸卵管、子宮內膜和子宮頸內膜均有表達。臨床意義：臨床意義：lCA125是卵巢癌首選腫瘤標志物，診斷的靈敏度為是卵巢癌首選腫瘤標志物，診斷的靈敏度為79%，特異性，特異性82%；l治療有效的患者CA125下降，復發CA125升高先于臨床癥狀的出現，CA125是判斷卵巢

9、癌療效和復發的良好指標；l其他非卵巢惡性腫瘤也有一定的陽性率，如生殖系統腫瘤、消化道腫瘤、肺癌、 乳腺癌等（廣譜）；l良性婦科疾病和胸、腹水也不同程度的升高，但陽性率較低；l早期妊娠，CA125也有升高。糖類抗原15-3（CA15-3）CA15-3是分子量為400KD的上皮粘蛋白，主要來源于腺體細胞。臨床意義：臨床意義：lCA15-3是乳腺癌首選腫瘤標志物，是乳腺癌首選腫瘤標志物，原發乳腺癌患者CA15-3升高，乳腺癌初期的敏感性60%，乳腺癌晚期的敏感性80%；lCA15-3適用于乳腺癌的輔助診斷，連續檢測可用于II期和III期乳腺癌腫瘤復發的早期診斷，轉移性乳腺癌的療效監測；l其他惡性腫瘤

10、也有一定的陽性率，如肺癌、結腸癌、胰腺癌、卵巢癌、肝臟、子宮頸癌等。l某些子宮內膜癌患者的CA15-3升高，提示預后不佳，特別是血清CA15-3和CA125同時增高。糖類抗原19-9（CA19-9）臨床意義：臨床意義：lCA19-9可作為胰腺癌、膽囊癌、胃癌等惡性腫瘤的輔助診斷指標，監測病情可作為胰腺癌、膽囊癌、胃癌等惡性腫瘤的輔助診斷指標，監測病情變化和復發；變化和復發；l胰腺癌、膽囊癌CA19-9明顯升高，尤其胰腺癌晚期的陽性率可達75%，是重要的輔助診斷指標；l胃癌、結直腸癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌等患者CA19-9也有不同程度升高。CA19-9在胃癌、結直腸癌、肝癌的陽性率分別為：

11、 50%、60%、65%；l某些消化道炎癥CA19-9也有不同程度的升高，如：急性胰腺炎、膽囊炎、膽汁淤積性膽管炎、肝炎、肝硬化等。CA19-9是一種與胃腸道癌相關的糖類抗原，胎兒的胰腺、膽囊、肝臟、腸等組織表達，成年人肺、肝臟、胰腺等組織也有低濃度的表達。糖類抗原72-4（CA72-4）臨床意義臨床意義: lCA72-4是胃癌首選腫瘤標志物，對胃癌具有較高特異性，在轉移是胃癌首選腫瘤標志物，對胃癌具有較高特異性，在轉移性胃癌患者中陽性率更高；性胃癌患者中陽性率更高；l胃癌檢測CA72-4較CEA和CA19-9有更高的敏感性；CA72-4、CA19-9和CEA聯合測定診斷胃癌符合率為86.2%

12、；lCA72-4用于胃癌預后判斷和療效觀察；lCA72-4升高還可見于乳腺癌、結直腸癌人表皮生長因子受體2（HER2）暫未開展暫未開展人表皮生長因子受體2（HER2）是由原癌基因ERBB2編碼，通過參與多種信號途徑調控細胞的分裂、分化和血管表達。臨床意義：lHER2 是乳腺癌的新型腫瘤標志物，可有效評估乳腺癌的預后，并指導乳腺癌是乳腺癌的新型腫瘤標志物，可有效評估乳腺癌的預后，并指導乳腺癌的治療。的治療。lHER 2在10%-25%的乳腺癌患者中過表達，預示了患者有更高的復發風險及更短的存活率。HER2是乳腺癌復發和生存期長短的獨立預后因子。l良性乳腺疾病中檢測到HER2輕微過表達，可增加患者

13、患浸潤性乳腺癌的風險。lHER2 過表達乳腺癌患者，推薦使用基因靶向藥物，如赫賽汀。糖類抗原50（CA50）暫未開展暫未開展CA50是廣泛存在胰腺、膽囊、肝、胃、結直腸、膀胱、子宮等，是一種最常用的的糖類抗原腫瘤標志物之一。臨床意義：臨床意義：lCA50是是胰腺癌和膽囊癌首選腫瘤標志物之一，可用于胰腺癌、膽囊癌的早是是胰腺癌和膽囊癌首選腫瘤標志物之一，可用于胰腺癌、膽囊癌的早期診斷、療效和復發轉移的監測。期診斷、療效和復發轉移的監測。lCA50是一種廣譜腫瘤標志物，在胰腺、膽囊、肝、胃、結直腸、膀胱、子宮等多種惡性腫瘤中均有不同程度的升高。lCA50在胰腺癌和膽囊癌陽性檢出率最高，可達94.4

14、%，其它惡性腫瘤肝癌、卵巢癌、子宮癌、胃癌、結直腸癌中亦有一定的陽性檢出率。l淋巴增生性惡性病變也可見CA50增高。l炎癥如急慢性胰腺炎、結腸炎、肝炎、膽囊炎也有CA50的增高，而炎癥消退后CA50降低。腫瘤標志物臨床應用原則l腫瘤標志物聯合檢測l動態隨訪腫瘤標志物的濃度值l與其他臨床診斷方法相結合如影像學、內窺鏡以及病理檢查等。腫瘤標志物檢測應遵循以下原則：腫瘤標志物檢測應遵循以下原則：二、腫瘤標志物的聯合診斷腫瘤標志物聯合檢測l同一腫瘤可含有一種或多種腫瘤標志物l不同腫瘤或同種腫瘤的不同組織類型可有共同的腫瘤標志物 ，也有不同的腫瘤標志物l使用聯合檢測可提高靈敏度和特異性AFP：1967年

15、開始用于肝CA診斷；公認的早期診斷原發肝癌的指標。上海東方肝膽外科醫院統計：1998-2001年期間，經病理證實1013例肝癌患者，AFP陽性率僅68.8%。如何提高腫瘤的檢出率？如何提高腫瘤的檢出率？來源：腫瘤與腫瘤標志物研究中證據的思考 醫學與哲學 2009年2月 第30卷第2期來源：CEA、NSE、CYFRA211聯合檢測在肺癌診斷中的價值中國腫瘤2005年第14卷腫瘤標志物在肺癌檢測中的應用腫瘤標志物在肺癌檢測中的應用吸煙鈾、鐳肺部慢性病家族遺傳NSE、CYFRA211、CEANSE、CYFRA211、CEANSE、CYFRA211、CEANSE、CYFRA211、CEANSE、CYF

16、RA211、CEA腫瘤標志物小細胞肺癌檢測中的應用來源：肺癌診斷技術研究進展重慶工學院學報 第22卷 第一期腫瘤標志物在胃癌檢測中的應用血清中CEA、CA19-9、CA50、CA72-4、CA24-2在胃癌檢測中的靈敏度與特異性來源：血清腫瘤標志物單項及聯合檢測的臨床意義臨床內科雜志2007年8月第24卷第8期 胃癌診斷標志物研究新進展 醫學綜述 2008年5月第14卷第10期腫瘤標志物聯合診斷在胃癌檢測中的靈敏度及特異性CA724是早期診斷胃癌復發的重要手段是早期診斷胃癌復發的重要手段 CA724是胃癌最有價值的標志物是胃癌最有價值的標志物腫瘤標志物在胃癌檢測中的應用慢性萎縮性胃炎CEA+

17、CA19-9+ CA72-4胃息肉殘胃良性胃潰瘍惡性貧血腫瘤標志物在胰腺癌檢測中的應用來源：腫瘤標志物CA19-9、CA242、CEA 和CA125聯合檢測在胰腺癌診斷中的意義肝膽胰外科雜志 第21卷第2期，2009年3月有多篇報道稱，CA242的特異性高于CA199。四種標志物聯合診斷，是診斷胰腺癌早期而有效的方法。腫瘤標志物在結直腸癌檢測中的應用兩者聯合檢測時，陽性率提高兩者聯合檢測時，陽性率提高至至84.8%來源：結、直腸癌患者血清CEA、CA242聯檢的臨床意義 放射免疫學雜志 2005年第18卷第4期來源：血清腫瘤標記物測定在結直腸癌中的意義腫瘤標志物在結直腸癌檢測中的應用來源：CE

18、A、CA19-9、CA24-2、CA72-4在大腸癌中的應用價值探討放射免疫雜志2005年第18卷第2期腫瘤標志物在結直腸癌檢測中的應用慢性炎癥家族遺傳大腸腺瘤息肉CEA、CA24-2、CA199、CA724來源：血清CA - 724、CA - 199、CEA及CA - 50 聯檢對消化系統腫瘤的臨床應用價值分析放射免疫雜志2005年第18卷第2期對于消化系統腫瘤，四項目聯合檢出率明顯提高，大大降低了漏檢率。對于消化系統腫瘤，建議聯檢：對于消化系統腫瘤，建議聯檢：CA724、CA199、CA50、CEA、CA242消化系統腫瘤篩查腫瘤標志物在卵巢癌檢測中的應用來源：血清CA125、CA724、

19、和CA199聯合檢測對卵巢癌的診斷價值臨床和實驗醫學雜志 2007年11月第6卷第11期來源：聯合檢測血清J6!# 和J6&!$T 對卵巢癌診斷的價值 海南醫學 2005年第16卷第7期腫瘤標志物的聯合檢測項目腫瘤名稱腫瘤名稱首選項目首選項目最佳聯合項目最佳聯合項目原發性肝癌AFPCA50、FE、CA199、CEA胰腺癌CA199CEA、CA242、結、直腸癌CEACA724、CA199、CA242乳腺癌CA153CEA膽囊癌CA199CEA、CA242絨癌B-HCGCA125、CEA、CA50卵巢癌CA125CA153、CEA、CA724肺癌Cyfra21-1NSE、CEA腎癌CA5

20、0CEA、AFP胃癌CA724CA50、CEA、CA199總 結l腫瘤標志物聯合檢測優于單項檢測l腫瘤標志物聯合檢測可提高靈敏度和特異性l遴選出對某一腫瘤適用的“聯合診斷腫瘤標志物群”，可提高診斷效率，降低費用腫瘤標志物在腫瘤篩查的應用l對于腫瘤標志物呈陽性并非一定就是癌癥，檢測呈陰性也不一定就能排除癌癥，因而腫瘤標志物檢測對健康人群篩查作用有限l腫瘤標志物更適用于高危人群及年齡40歲以上群體的腫瘤篩查，特別是對于發生率高的腫瘤，有腫瘤家族史以及有癥狀的患者，對早期發現、早期診斷、早期治療有重要的意義腫瘤標志物體檢套餐配置體檢套餐配置的原則體檢套餐配置的原則l科學性：合理利用各種腫瘤標志物的優

21、勢，聯合檢測達到理想的檢測效果。 測定方法應靈敏、特異性高、重復性好。 原則上腫瘤檢測項目越多越好。l篩查費用經濟、合理。即根據不同的體檢套餐價格來配置腫瘤篩查項目。普通套餐 CEA AFP Ferritin 女性套餐 CA153 B-HCG CA125男性套餐 PSA fPSA 高級套餐 CA50 CA724 CYFRA21-1 CA199 NSE CA242 三、腫瘤標志物的檢測技術臨床腫瘤標志物的檢測方法l放射免疫分析法放射免疫分析法l熒光免疫分析法熒光免疫分析法l酶聯免疫分析法酶聯免疫分析法l膠體金層析免疫分析法膠體金層析免疫分析法l化學發光免疫分析法化學發光免疫分析法l蛋白芯片蛋白芯

22、片基于免疫分析基于免疫分析免疫分析免疫反應免疫反應: : 抗原進入機體，刺激機體的免疫系統，使之產生免疫應答，這種反應叫免疫反應。免疫應答應答包括對抗原物質的感應、反應、效應三個連續的階段。免疫分析（免疫分析（I Immunoassaymmunoassay，IAIA）: : 在臨床檢驗中, 體外模擬抗體抗原的免疫反應，根據抗原與其配對抗體能夠發生特異反應, 用已知的抗原或抗體檢測分析液中的抗體或抗原。l高特異性高特異性 l高親和性高親和性 放免放免酶免酶免發光發光60年代年代70年代年代90年代年代免疫分析技術的發展免疫分析技術介紹l化學發光免疫分析技術（化學發光免疫分析技術（CLIA）是將化

23、學發光體系與免疫反應相結合，用于檢測微量抗原或抗體的一種新型標記免疫測定技術。l放射免疫分析技術（放射免疫分析技術（RIA）是將放射性同位素測量的高靈敏度、精確性和抗原抗體反應的特異性相結合，在體外進行微量分析的一種檢測技術。l酶聯免疫標記分析技術（酶聯免疫標記分析技術（EIA）是用酶標記的抗體或抗原，將抗原-抗體反應的特異性和酶催化底物反應的高效性和專一性結合起來，并通過酶與底物產生顏色，測定光吸收的一種免疫檢測技術。l時間分辨熒光免疫分析技術（時間分辨熒光免疫分析技術（TRFIA）是目前最常用的免疫熒光分析方法。它是利用鑭系元素標記抗原或抗體，根據鑭系元素的發光特點，用時間分辨技術測量熒光

24、，同時檢測波長和時間兩個參數進行信號分辨，可有效地排除非特異熒光的干擾，極大地提高了分析靈敏度。 l免疫膠體金分析技術免疫膠體金分析技術是以膠體金作為示蹤標記物或顯色劑，以膜為載體，利用抗體抗原免疫反應，通過層析過程達到在體外進行微量分析的一種技術。 l蛋白質芯片技術蛋白質芯片技術是將多種抗體或抗原高密度排列在固定支持物表面上，使樣品中的目的蛋白（如抗原）特異性地與之結合，通過微加工技術和微電子技術在固體芯片表面構建微型生物化學分析系統，對目的蛋白進行定性、定量檢測。免疫分析技術介紹幾種標記免疫技術靈敏度的比較酶標熒光放免發光靈敏度(mol/L)10-1810-1510-1210-9幾種標記免

25、疫技術線性范圍的比較酶標熒光放免發光線性范圍105104103102幾種標記免疫試劑的有效期比較酶標熒光放免發光有效期（月）1815129630免疫分析技術的優缺點化學發光免疫化學發光免疫分析（分析（CLIA）酶聯免疫標記酶聯免疫標記分析（分析（EIA）放射免疫分析（放射免疫分析（RIA）膠體金免疫膠體金免疫分析（試紙分析（試紙條）條）時間分辨熒光時間分辨熒光免疫分析（免疫分析（TRFIA）蛋白芯片技術蛋白芯片技術優點優點 靈敏度高、測定范圍寬、穩定性好，檢測快速、簡便，無放射污染等。 技術成熟，操作簡單，成本較低。靈敏度高、測量范圍較寬，試劑成本比較低。快速，操作簡單方便，適合現場和急診檢測

26、。靈敏度高、檢測范圍寬，熒光測定結果穩定時間長。芯片技術的優點是通量高，可以在一次檢測中實現多種標志物的聯合檢測。可以看作是多個化學發光免疫分析或熒光分析的集合。缺點缺點 目前試劑成本相對比較高。靈敏度較低，檢測范圍較窄，干擾因素多，容易出現Hook效應，只能用于定性或半定量檢測。同位素標記半衰期短，試劑盒穩定差，保質期短，具有放射性，對人體有一定的危害，需要嚴格的防護，對其廢棄物也應需要按規定進行處理。靈敏度不夠，只能用于定性檢測。環境中存在的稀土元素會對檢測造成較大干擾，尤其是中國為稀土大國，因而對實驗室的檢測環境清潔度要求很高。固相載體上同時包被多種抗體/抗原，容易產生交叉反應，結果容易

27、互相產生光干擾，靈敏度和特異性容易受影響。同時這種技術比較新，臨床檢測項目比較少。l化學發光免疫分析因為具有靈敏度高、測定范圍寬、使用范圍廣、檢測快速簡便，易自動化，并在測試中不使用有害試劑，無放射污染等特點，因此是目前最理想的體外診斷技術之一。l化學發光免疫分析1980s進入體外診斷領域，第一臺全自動檢測儀1993年誕生。化學發光免疫分析技術包被抗原包被抗原待測抗體待測抗體酶標記的抗體酶標記的抗體發光底物發光底物光子計數光子計數（酶免檢測顏色變（酶免檢測顏色變化，采用分光光度化，采用分光光度計計數）計計數）PMT高速放大信高速放大信號后讀數！號后讀數！化學發光免疫分析原理化學發光按化學反應類

28、型分為：化學發光按化學反應類型分為：u直接化學發光（非酶促化學發光）直接化學發光（非酶促化學發光）l吖啶酯系統l魯米諾系統u間接化學發光（酶促化學發光）間接化學發光（酶促化學發光）l辣根過氧化物酶魯米諾系統（HRP系統）l堿性磷酸酶金剛烷系統（AP系統）u其它其它l電化學發光化學發光的檢測類型CH3C=OORN+OH-H+H2O2+ H2O+ROH光子 + CO2 +CH3C=OORNHOCH3C=OORNHOOCH3ONCH3ONC=OO吖啶酯化學發光系統吖啶酯化學發光系統吖啶酯化學發光系統吖啶酯標記吖啶酯標記 : 西門子Siemens Centaur XP CP 雅培Abbott Arch

29、itect i2000 魯米諾及其衍生物的增敏化學發光系統魯米諾及其衍生物的增敏化學發光系統H2O2+NH2OONHNHN2OH-HRPNH2CO2-CO2-+Photon (425nm)ROHROH NSRBOHOH增強劑（Enhancer）魯米諾在免疫測定中既可用作標記物，也可用作辣根過氧化物酶的底物 魯米諾化學發光系統魯米諾直接標記魯米諾直接標記 ：索林DiaSoin Liaison 新產業 HRP-魯米諾標記：魯米諾標記：源德、科美、安圖金剛烷作為堿性磷酸酶的底物+*光子(477nm)APOOOCH3OPO32-O-OOOCH3OO-OOCH3 金鋼烷（發光底物）及其衍生物的增敏化學發

30、光系統金鋼烷（發光底物）及其衍生物的增敏化學發光系統堿性磷酸酶化學發光系統堿性磷酸酶（堿性磷酸酶（AP）系統）系統：貝克曼：Access 1、Access 2，DXI600、DXI800 西門子：Immulite1000 , Immulite 2000 達成生物：AULIA200 第一代：第一代：魯米諾及其衍生物 第二代：第二代：l直接標記：直接標記：吖叮酯標記l間接標記：間接標記：堿性磷酸酶-金剛烷系統l電化學發光：電化學發光：三聯砒啶釕化學發光的發展史國際主流免疫診斷公司均采用第二代化學發光標記物：國際主流免疫診斷公司均采用第二代化學發光標記物：吖啶酯（雅培、堿性磷酸酶吖啶酯（雅培、堿性磷

31、酸酶-金剛烷（貝克曼、西門子）、三金剛烷（貝克曼、西門子）、三聯砒啶釕（羅氏）聯砒啶釕（羅氏）化學發光檢測方式l隨機處理模式 管式化學發光管式化學發光l批處理模式 板式化學發光板式化學發光l采用管式或微粒子發光，測定快速、準確；l可以隨到隨測，適用于醫院急診；l定量檢測的標準曲線存儲在試劑條形碼中，可在2-4周內直接使用。國外廠家是管式化學發光系統管式化學發光l適合流行病調查、疾病預防與控制、體檢中心，以及醫院血站等大樣本檢測項目的使用（比如HIV、TP、HCV和乙肝兩對半等）；l通常采用96孔白色不透明微孔板進行包被，不方便隨到隨測和醫院急診；l對于定量檢測需要做標準曲線。國內廠家主要是板式

32、化學發光系統板式化學發光管式化學發光 vs 板式化學發光管式化學發光管式化學發光 板式化學發光板式化學發光 檢測方式檢測方式 管式測量，非批量隨機檢測，標本隨到隨測，方便急診板式測量，批量檢測。需要將樣品收集集中檢測，適合大樣本量檢測 抗體抗體/抗原包被方式抗原包被方式 包被磁微粒，包被量更大，有效避免Hook效應，提高檢測靈敏度，縮短反應時間 包被微孔板，包被量有限 試劑盒變異系數（試劑盒變異系數（CV） Ab/Ag包被是通過化學共價耦合，試劑盒CV小 包被是通過非特異性吸附，試劑盒CV大 反應過程反應過程 磁微粒粒徑小，比表面積大，免疫反應過程在近乎均相的條件下反應，反應更充分，更快速 免疫反應過程為固液相反應，反應不充分，速度較慢 讀數干擾讀數干擾檢測管獨立讀數，不存在管間的讀數干擾微孔板整板讀數，微孔間存在讀數干擾自動化自動化 容易實現自動化，通常與專門的自動化檢測儀配套使用 半自動化操作 結 論管式化學發光免疫技術管式化學發光免疫技術是理想的腫瘤標志物體外診斷技術l高靈敏性、特異性和穩定性高靈敏性、特異性和穩定性l寬線性范圍寬線性范圍l使用范圍廣使用范圍廣 l高通量和高度自動化高通量和高度自動化l無放射性危險無放射性危險國際主流化學發光的技術標準l反應方式反應方式 免疫反應l測量方式測量方式 光子計