1、課時(shí)1 DNA的粗提取與鑒定一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康模撼醪秸莆誅NA的粗提取和鑒定的方法。二、實(shí)驗(yàn)原理：1DNA的溶解性：思考題1：DNA在氯化鈉溶液中的溶解度有什么特點(diǎn)？對(duì)此有什么應(yīng)用？ 思考題2：利用什么原理來(lái)將DNA與蛋白質(zhì)分離開(kāi)？ 2DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性：蛋白酶能水解 ，但對(duì) 沒(méi)有影響。大多數(shù)蛋白質(zhì)不能忍受 的高溫，而DNA在 以上才會(huì)變性。 能夠瓦解細(xì)胞膜，但對(duì)DNA沒(méi)有影響。3細(xì)胞在 中易吸水而導(dǎo)致細(xì)胞膜和細(xì)胞核膜的破裂，據(jù)此可得到含有核DNA的溶液。4DNA的鑒定：思考題3：依據(jù)什么原理來(lái)鑒定DNA？ 三、實(shí)驗(yàn)材料：雞血細(xì)胞液思考題4：生活在牧區(qū)的人們，采集牛、羊和馬血比較方便，

2、他們能否選用牛、羊、馬血做實(shí)驗(yàn)材料？為什么？ 四、實(shí)驗(yàn)步驟：1制備雞血細(xì)胞液：在雞血中加入質(zhì)量濃度為01g/mL的 溶液，離心處理；2提取雞血細(xì)胞的細(xì)胞核物質(zhì)：向雞血細(xì)胞液中加入蒸餾水，攪拌、過(guò)濾；思考題5：加入蒸餾水的目的是什么？為什么能達(dá)到此目的？ 3溶解細(xì)胞核內(nèi)的DNA：加入2mol/L的氯化鈉溶液，攪拌，使DNA呈溶解狀態(tài)；4析出含DNA的黏稠物：加入蒸餾水，用玻璃棒攪拌；思考題6：此時(shí)加入蒸餾水的目的是什么？ 5濾取含DNA的黏稠物：過(guò)濾；思考題7：這次過(guò)濾與上次過(guò)濾的目的一樣嗎？為什么？ 6將DNA的黏稠物再溶解：加入2mol/L的氯化鈉溶液，攪拌，使DNA呈溶解狀態(tài)；7過(guò)濾含有D

3、NA的氯化鈉溶液：過(guò)濾；思考題8：這一步驟的目的是什么？ 思考題9：為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)？8提取含雜質(zhì)較少的DNA：加入冷卻的95%的酒精，攪拌；思考題10：這一步驟的目的是什么？ 思考題11：為什么加入的酒精需要冷卻的？ 9DNA的鑒定：取兩支試管，各加入0015mol/L的氯化鈉溶液5mL，一支加入提取的DNA，兩支各加入4mL的二苯胺試劑。混合均勻后置于沸水中加熱。思考題12：為什么要設(shè)置對(duì)照組？實(shí)驗(yàn)中能觀察到什么現(xiàn)象？ 五、課堂練習(xí)：1為了便于提取雞血細(xì)胞中的DNA，下列所采取的措施中，最恰當(dāng)?shù)氖牵合蚪?jīng)抗凝劑處理的雞血液加入（ ）A蒸餾水BATPC0.3g/mL的

4、蔗糖溶液 D二氧化碳2下列不適宜作為DNA提取的實(shí)驗(yàn)材料是 （ ） A雞血細(xì)胞 B蛙的紅細(xì)胞 C人的成熟紅細(xì)胞 D菜花3用過(guò)濾的方法得到細(xì)胞中的氯化鈉溶液后，還要用酒精處理，可以得到較純化的DNA這是因?yàn)椋?（ ）ADNA易溶于酒精，而濾液中某些雜質(zhì)不易溶于酒精BDNA不易溶于酒精，而濾液中某些雜質(zhì)易溶于酒精CDNA和濾液中其他成分更易溶于酒精DDNA和濾液中其他成分都不溶于酒精4（多選）下表是關(guān)于DNA粗提取與鑒定實(shí)驗(yàn)中所使用的材料、操作及其作用的表述，正確的是： （ ）試劑操作作用A檸檬酸鈉溶液與雞血混合防止血液凝固B蒸餾水與雞血細(xì)胞混合保持細(xì)胞形狀C蒸餾水加入到溶解有DNA的NaCl中析

5、出DNA絲狀物D冷卻的酒精加入到過(guò)濾后DNA的NaCl中產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)5在進(jìn)行DNA粗提取實(shí)驗(yàn)時(shí)，為得到含DNA的黏稠物，某同學(xué)進(jìn)行了如下操作： 在新鮮雞血中加入適量的檸檬酸，經(jīng)離心后，除去血漿留下血細(xì)胞備用。 取510ml血細(xì)胞放入50ml的塑料燒杯中，并立即注入20ml 0.015molL的氯化鈉溶液，快速攪拌5分鐘后經(jīng)濾紙過(guò)濾，取得其濾液。 濾液中加入40ml 2molL的氯化鈉溶液，并用玻璃棒沿一個(gè)方向快速攪拌1分鐘。 上述溶液中緩緩加入蒸餾水，同時(shí)用玻璃棒沿一個(gè)方向不停地輕輕攪拌，直到溶液中出現(xiàn)絲狀物為止，再進(jìn)行過(guò)濾而得到含DNA的黏稠物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果是：所得到的含DNA的黏稠物極少

6、，導(dǎo)致下一步試驗(yàn)無(wú)法進(jìn)行。（1）指出并改正上述實(shí)驗(yàn)操作中的錯(cuò)誤： ， ，。 (2)要進(jìn)一步提取DNA時(shí)，需加入冷卻的酒精，其作用是 和。(3)能否用牛血或牛肝代替雞血做實(shí)驗(yàn)？為什么？6在DNA粗提取與鑒定的實(shí)驗(yàn)中，選擇適當(dāng)濃度的NaCl溶液就能充分溶解DNA而使雜質(zhì)沉淀，或析出DNA過(guò)濾去除溶液中的可溶性雜質(zhì)。請(qǐng)?jiān)谟覉D中作出DNA在NaCl溶液中的溶解度曲線。參考答案思考題：思考題1、DNA在氯化鈉溶液中的溶解度，隨著氯化鈉的濃度的變化而改變的。當(dāng)氯化鈉的物質(zhì)的量濃度為014mol/L時(shí)，DNA的溶解度最低。利用這一原理，可以使溶解在氯化鈉溶液中的DNA析出；思考題2、DNA不溶于酒精，但細(xì)胞

7、中的某些蛋白質(zhì)則溶于酒精，利用這一原理，可以將DNA與蛋白質(zhì)進(jìn)一步地分離。思考題3、DNA遇二苯胺（沸水浴）被染成藍(lán)色，所以可用二苯胺作鑒定。思考題4、不能。因?yàn)椴溉閯?dòng)物成熟的紅細(xì)胞中無(wú)細(xì)胞核，僅靠白細(xì)胞和淋巴細(xì)胞中的少數(shù)DNA，在實(shí)驗(yàn)中很難提取到。思考題5、加速了雞血細(xì)胞的破裂(細(xì)胞膜和核膜的破裂)，從而釋放出DNA；蒸餾水對(duì)于雞血細(xì)胞來(lái)說(shuō)是一種低滲液體，水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞脹裂。思考題6、使氯化鈉溶液濃度接近014mol/L，使DNA最大限度地析出。思考題7、不一樣；這次過(guò)濾是為了去除不溶于氯化鈉溶液的雜質(zhì)，而上次過(guò)濾是為了去除破裂的細(xì)胞膜等物質(zhì)。思考題8、除去含有DNA濾液中的雜質(zhì)；思考題9、用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過(guò)反復(fù)溶解與析出DNA，就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。思考題10、去除溶于酒精的雜質(zhì)；思考題11、可抑制核酸水解酶的活性，防止降解DNA；降低分子的運(yùn)動(dòng)，易于形成沉淀析出；低溫有利于增加DNA分子柔韌性，減少斷裂。思考題12、確定二苯胺不與氯化鈉發(fā)生顏色反應(yīng)；實(shí)驗(yàn)組試管中可看到溶液變藍(lán)色。課堂練習(xí)：1A 2C 3B 4AC5（1）中“20ml 0.015molL的氯化鈉溶液”錯(cuò)