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文檔簡介

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2、蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇

3、薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈

4、蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿

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6、蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆

7、螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈

8、螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆

9、袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆

10、袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇

11、袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞

12、薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆

13、薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆

14、薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄

15、蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅

16、蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃

17、螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃

18、螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄

19、螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)

20、袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂

21、袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃

22、蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁

23、薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂

24、薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂

25、蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀

26、螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁

27、蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁

28、螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿

29、螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅聿蕿蟻裊莇蚈螄肁芃蚇袆襖腿蚆薆聿肅芃螈袂肁節(jié)袀膇莀芁薀羀芆芀螞膆膂艿螄罿肈莈袇螁莆莇薆羇節(jié)莇蠆螀羋莆袁羅膄蒞薁袈肀莄蚃肅荿莃螅袆芅莂袈肂膁蒂薇襖肇蒁蝕肀羃蒀

30、螂袃莁葿薂膈芇蒈蚄羈膃蕆螆膇聿蒆袈罿莈蒆薈螂芄薅蝕羈膀薄螃螀肆薃蒂羆羂薂蚅蝿莁薁螇肄芇薀衿袇膃薀蕿肅 承 德 醫(yī) 學 院大學生科研計劃申請書項目名稱:電磁輻射對大鼠學習記憶能力的影響及相關機制研究研究類別:應用基礎申請單位(學生):護理系申 請 人:徐陽星、張曉蒙、李玲玲、張品指導教師:李玉紅、路國兵申報日期:2010年4月10日項目名稱電磁輻射對大鼠學習記憶能力的影響及相關機制研究起止時間2010-4至2011-2申請經費1500.00元研究類別應用基礎預期水平國內先進課 題負責人姓 名部 系 年 級所學專業(yè)徐陽星08護理本科護理指導教師職 稱學 歷學 位年 齡專 業(yè)教授研究生博士39病理學

31、助理研究員研究生碩士27分子生物學項目內容摘要電磁輻射是繼“三廢”污染之后的第四大環(huán)境污染源。近年來隨著移動通訊技術的飛速發(fā)展,移動電話微波電磁場使環(huán)境電磁場的分布特征日趨復雜,它對健康的影響越來越引起人們的重視。因此,對移動電話可能帶來的健康風險進行評估是當前迫切需要解決的問題。移動電話產生的電磁場主要是指經極低頻電磁場調制的頻率在8002000 MHz的電磁場,平均功率密度約為6002170W/cm2,本課題模擬移動電話微波電磁輻射(900MHz),以2000W/cm2的功率密度對大鼠進行近場輻射,模型建立后,通過水迷宮檢驗電磁輻射對大鼠學習記憶能力的影響,通過透射電鏡觀察大鼠海馬突觸超微

32、結構變化,利用免疫熒光組化、免疫印記等方法檢測NMDAR表達情況,進而了解電磁輻射對大鼠學習記憶能力的影響。對闡明電磁輻射的生物學效應具有重要的理論價值,為電磁輻射的防護提供理論依據(jù)。一、立論依據(jù)(包括科學意義、應用背景、國內外研究現(xiàn)狀分析、參考文獻)隨著科學技術的迅猛發(fā)展,在人類生存壞境中出現(xiàn)了越來越多的通訊、廣播及其它電子設備,電磁污染對健康的危害日益受到人們的關注。目前來看,首先迫切需要解決的問題應是環(huán)境中人們接觸機會較廣、有一定潛在威脅的低場強電磁輻射,尤其是移動電話射頻輻射的生物學效應問題1。由于神經元的易受損性、成熟神經元的不可再生性及其他未知因素,中樞神經系統(tǒng)對電磁輻射具有相當大

33、的敏感性。 學習記憶是受多種因素調節(jié)的復雜生理過程,其中海馬在學習記憶和控制神經行為活動中起關鍵作用。有研究表明,海馬毀損會導致學習記憶功能障礙。LTP(long-term potentiation)是公認的研究與學習記憶有關的突觸可塑性的重要實驗模型。NMDAR是配體和電壓雙重依賴的離子通道,在形成 LTP過程中起關鍵作用2。國外主要側重于電磁輻射對各種疾病致病性的研究,例如腫瘤、心血管疾病等。國內目前已有的實驗研究報道已涉及低場強電磁輻射影響腦高級功能的多個方面,包括學習、記憶、情緒、睡眠等3。但具體是腦內哪一亞區(qū)在特定頻率和場強的電磁輻射時主要受到相應影響?其具體的作用機制如何?目前還未

34、完全闡明。因此,研究電磁輻射對人類精神方面及學習記憶能力的影響,尋找正確、有效的防治措施和方案對我們來說有重要的意義。參考文獻:1史長華,路國兵,李玉紅.電磁輻射對大鼠學習記憶能力和海馬神經元形態(tài)的影響. 承德醫(yī)學院學報,2009, 26(4):356-358.2Jarrard LE. Selective hippocampal lesions and behavior: effects of kainic acid lesions on performance of place and cueJ.Behav Neurosci, 1983, 97(6):873-889.3隋建鋒,范鄭麗.電磁場

35、的神經生物學效應及機制研究進展.壞境與職業(yè)醫(yī)學,2009,26(4):409-416.二、研究內容(說明具體研究內容、擬解決的關鍵問題和創(chuàng)新點)1. 研究內容本項目擬從以下幾方面進行研究:(1) 學習記憶障礙動物模型的建立用多功能電磁輻射檢測儀功率密度均為 2000W/cm2。分別將試驗大鼠裝入自制暴露鼠籠,固定體位,頭部接受頻率為900 MHz 的連續(xù)微波輻射,每天將六個輻射組大鼠分別暴露20 min, 40 min, 1h, 2h, 3h, 4h ,連續(xù)暴露30天。假輻射組微波輻射功率密度為 0W/cm2。空白對照組大鼠不做任何處理。(2) 觀察并檢測大鼠的學習記憶功能 行為學檢測(水迷宮

36、實驗)30d后,將各組的大鼠放到事先準備好的水迷宮中,觀察各組大鼠的行為表現(xiàn)并記錄大鼠走水迷宮的反應情況及完成全程所需要的時間。 形態(tài)學檢測(硫堇染色) 采用硫堇染色法檢測其海馬神經元形態(tài)變化(3)突觸超微結構觀察與定量分析通過透射電子顯微鏡觀察海馬CA1區(qū)突觸超微結構。(4)NMDA受體蛋白水平的表達檢測 用免疫熒光組化的方法檢測NMDA受體表達情況 提取海馬組織總蛋白,采用 western-blotting法檢測NMDA受體蛋白表達情況。2. 擬解決的關鍵問題電磁輻射對實驗大鼠的學習記憶能力產生何種影響?其具體的作用機制如何?3. 創(chuàng)新點本研究首次從突觸結構可塑性和功能可塑性兩方面入手,研

37、究電磁輻射對大鼠學習記憶能力的影響及具體的作用機制。三、研究方案(包括研究方法、實驗方案、技術路線)研究方法和實驗方案1. 學習記憶障礙動物模型的建立用多功能電磁輻射檢測儀功率密度均為 2000W/cm2。分別將試驗大鼠裝入自制暴露鼠籠,固定體位,頭部接受頻率為900 MHz 的連續(xù)微波輻射,每天將六個輻射組大鼠分別暴露20 min, 40 min, 1h, 2h, 3h, 4h,連續(xù)暴露30天。假輻射組微波輻射功率密度為 0W/cm2。空白對照組大鼠不做任何處理。2. 大鼠的學習記憶功能檢測(1)用Morris水迷宮測試各組大鼠的空間記憶能力 定位航行試驗:輻射結束后第1d讓大鼠自由游泳2m

38、in以適應周圍環(huán)境。從輻射結束后第2d開始,連續(xù)4天對大鼠進行訓練,每天訓練4次,每次90s,隨機選擇東、南、西、北4個入水點,將動物面向池壁放入水中,記錄動物尋找并爬上平臺所需時間即逃避潛伏期。如果動物在90s內未找到平臺,則將其引至平臺,逃避潛伏期記為90s,將動物在平臺上停留10s,再將大鼠放回起始點進行下一次訓練。輻射結束后第6d對大鼠進行正式測試,記錄逃避潛伏期和軌跡圖。 空間探索實驗:輻射結束后第7d撤去平臺,記錄60s內經過平臺象限的次數(shù),即為空間探測次數(shù)。 可見平臺試驗:為排除感覺或運動功能障礙對空間記憶學習的影響,最后進行可見平臺試驗。(2)海馬組織形態(tài)學觀察 各組大鼠連續(xù)輻

39、射30天后,4%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠,快速斷頭取腦,腦組織于-24恒冷箱切片機中冠狀連續(xù)切片,片厚5m,每隔6張取1張。行神經元尼氏體硫堇染色,二甲苯透明,中性樹膠封固,于光鏡下觀察海馬形態(tài)學變化。3. 突觸超微結構觀察與定量分析取試驗大鼠斷頭取腦,迅速剝離海馬,置于 2.5% 戊二醛溶液中。將其切成長軸垂直于海馬皮層層次的長條形的組織塊,繼續(xù)在 2.5% 戊二醛溶液中預固定4 h,磷酸緩沖液沖洗,1%餓酸固定1 h,磷酸緩沖液沖洗,梯度酒精脫水,每級 7 min,無水丙酮置換,國產環(huán)氧樹脂定向包埋,金剛刀超薄切片機切片切片 30 nm 50 nm。用檸檬酸鉛、醋酸鈾對切片進行雙重染色,于

40、透射電鏡下觀察海馬神經氈區(qū)突觸的數(shù)量和分布情況。觀察時每組選取15個以上視野,拍攝Gray型突觸40個以上。用 MIAS4.0 病理圖像掃描分析系統(tǒng)對突觸界面曲率、突觸間隙寬度、突觸后致密物質厚度和突觸活性區(qū)長度進行定量分析。4. NMDA受體亞基NR1、NR2B在大鼠海馬區(qū)的表達檢測 采用免疫熒光組化法檢測NMDA受體亞基NR1、NR2B在大鼠海馬區(qū)的表達。大鼠腹腔麻醉,多聚甲醛灌注固定,斷頭取腦,冰凍切片機連續(xù)冠狀切片,切片厚40m。對切片進行免疫熒光組化染色,二抗均選用FITC標記的羊抗小鼠IgG,通過激光掃描共聚焦顯微鏡觀察NR1、NR2B、GluR1和GluR2在大鼠海馬結構中的表達

41、和分布情況。 采用免疫印跡法(weastern blots)檢測NMDA受體亞基NR1、NR2B在蛋白的水平。稱取海馬組織,提取總蛋白,BCA法進行蛋白濃度定量,應用Western-Blot方法對大鼠海馬組織GluR1的蛋白水平進行檢測。上樣量40g,10%SDS-PAGE電泳,轉膜,封閉,抗體孵育,采用化學發(fā)光法顯色,用quantity one軟件對蛋白條帶灰度值進行分析。技術路線 提取組織總蛋白突觸超微結構定量觀察Western blotting法探討電磁輻射對大鼠學習記憶的損傷機制水迷宮實驗硫堇染色形態(tài)學檢測行為學檢測透射電鏡觀察NMDA受體表達檢測電 磁 波 輻照Wistar大鼠免疫熒

42、光組化四、預期目標(1)探明電磁輻射對大鼠學習記憶能力的影響,從突觸結構可塑性和功能可塑性兩方面綜合解釋電磁輻射對學習記憶的損傷機制。(2)熟練掌握免疫印記、免疫熒光組化等相關實驗方法。(3)在指導老師的幫助下發(fā)表研究論文。五、研究進度安排(要求具體詳細、切實可行)(1)2010-4到2010-6,造模,取材。(2)2010-7到2010-9,學習記憶功能檢測,形態(tài)學觀察(3)2010-10到2010-12,電鏡觀察,NMDAR蛋白表達檢測(4)2010-12到2011-4,處理數(shù)據(jù),撰寫論文。六、經費預算年 度金 額使用說明2010-20111500用于購買實驗動物,試劑等。七、參加人員及分

43、工姓名性別專業(yè)職務分工張曉蒙女護理本科學生造模取材徐陽星男護理本科學生形態(tài)學檢測李玲玲女護理本科學生電鏡觀察張品女護理本科學生NMDAR蛋白檢測負 責 學生 所 在部 處 系意 見 (蓋 章) 年 月 日 專 家 評審 委 員會 意 見負責人簽字: 年 月 日大 學 生科 研 領導 小 組意 見(蓋 章) 年 月 日 襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆

44、肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃

45、袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈

46、聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄

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51、肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆

52、袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃

53、膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇

54、羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁

55、袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆

56、肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕

57、袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈襖蒄蕆蟻膃蒃蕿袆肈蒂蟻蠆肄蒁蒁羄羀肈薃螇袆肇蚅羃膅肆蒞螆肁肅蕆羈羇膅薀螄袃膄螞薇膂膃莂螂膈膂薄薅肄膁蚆袀羀膀莆蚃袆腿蒈衿膄腿薁螞肀羋蚃袇羆芇莃蝕袂芆蒅裊螈芅蚇蚈膇芄莇羄肅芃葿螆罿芃薁羂裊節(jié)蚄螅膃莁莃薈聿莀蒆螃羅荿薈薆袁莈莈螁袇莇蒀蚄膆莇薂袀肂莆蚅螞羈蒞莄袈

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