1、DNA濃度、純度的測定濃度、純度的測定-分光光度法分光光度法 在分子生物學實驗中，提取DNA后，往往需要測定其純度和濃度，在純度達到標準，濃度調整到所需濃度后，才能進行下一步實驗。 實驗目的實驗目的 了解分光光度法檢測DNA純度和濃度的原理 熟練掌握分光光度法檢測DNA純度和濃度的方法。 DNA鏈上堿基的苯環結構在紫光區具有較強吸收，其吸收峰在260nm處。波長為260nm時，DNA的光密度OD260不僅與總含量有關，也隨構型而有差異。實驗原理 當OD2601時，dsDNA濃度約為50g / ml ssDNA濃度約為37g / ml 寡核苷酸濃度約為30g / ml 當DNA樣品中含有蛋白質、

2、酚或其他小分子污染物時，會影響DNA吸光度的準確測定。一般情況下同時檢測同一樣品的OD260、OD280和OD230，計算其比值來衡量樣品的純度。經驗值：純DNA：OD260/OD2801.8(1.9,表明有RNA污染；1.6，表明有蛋白質、酚等污染）資料、試劑及器具資料、試劑及器具1、資料資料上次實驗提取的植物基因組上次實驗提取的植物基因組DNA樣品樣品2、試劑試劑TE緩沖液，滅菌重蒸水緩沖液，滅菌重蒸水3、器皿器皿核酸測定儀；塑料比色皿；移液槍核酸測定儀；塑料比色皿；移液槍Eppendorf BioPhotometer Plus核酸蛋白測定儀 紫外/ 可見光分光光度計 只需按下一個按鍵，即

3、可進行檢測，并顯示計算結果 操作步驟操作步驟1、核酸蛋白測定儀開機預熱10min。2、于-20取出上次實驗所提取的DNA解凍。3、用重蒸水洗滌比色皿，吸水紙吸干，加入TE緩沖液50ul后，放入樣品室的池架上，按下black調零。4、 取待測樣品50ul，按下sample,測定顯示230nm、260nm、280nm。340nm波長時的OD值，并計算出OD260/OD280，OD260/OD2305、取5ul稀釋100倍，供以后的PCR實驗用。 根據其在260、280、310nm下紫外吸收值A260、A280、A310，可確定其純度和濃度。 DNA濃度： 對于dsDNA：1.0A260=50g/mL ssDNA：1.0A260=33g/mL純度： 純DNA溶液的A260/A280應為1.80.1，高于1.8則可能有RNA污染，低于1.8則有蛋白質污染。 A310值是背景，若鹽濃度較高，A310值也高。實驗原理 RNA 根據其在230、260、280nm下紫外吸收值A230、A260、A280，可確定其純度和濃度。 純度： 如果A260/A280比值太小，說明可能RNA樣品中污染了蛋白或苯酚。A260/A230的比值應該大于2.0，否則就可能