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文檔簡介
1、 酶免疫分析技術(enzyme immunoassay,EIA)是繼熒光免疫技術和放射免疫技術之后建立的一種非放射性免疫技術,是將抗原抗體反應的高度特異性和酶的高效催化作用相結合,發展建立的一種非放射性標記的免疫性標記分析方法。酶免疫分析系統則屬于開放式的,符合標準的各種品牌的ELISA試劑盒均可應用,且有靈敏度高、特異性強、酶免疫試劑的性質比較穩定、操作方法簡便、快速、無放射性污染以及應用范圍廣等很多優點。 酶免疫分析技術非均相酶免疫分析均相酶免疫分析非均相液相酶免疫分析非均相固相酶免疫分析以聚苯乙烯制品作為載體的酶聯免疫吸附實驗-ELISA1)將鏈霉親合素包被的聚苯乙烯塑料試管安置固定。2
2、)將生物素標記的特異性抗體和待測抗原加入鏈霉親合素包被小管內,經溫育,生物素和親和素發生連接,待測抗原和特異性抗體發生結合,形成固相包被親合素-生物素-特異性抗體-待測抗原復合物,然后進行洗滌,除去未結合的抗原和生物素標記抗體。3)加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的特異性抗體(酶標抗體),經溫育形成固相包被鏈酶親合素-生物素-特異性抗體-待測抗原-酶標抗體復合物,再次進行洗滌,除去多余的酶標抗體。4)加入底物ABTS和H2O2,經溫育,ABTS在辣根過氧化物酶的作用下顯色,然后經波長450nm的光度計測定獲得A值,從標準曲線上計算出待測抗原的含量。 光源 光路 微孔板觸摸屏電源 單 A/D轉換
3、 程控放大器 多路開關 光電檢測顯示器 片打印機 步進電機驅動 步進電機 送樣機構電源 機 圖2 工作原理方框圖電源(1)試劑的準備(2)加樣(3)保溫 使用恒溫水箱 使用保溫箱(4)洗滌(5)比色(1)可作標本廣泛,體液(如血清,血漿,各種積液),分泌物(如唾液)和排瀉物(如糞便,尿液)均可。(2)標本采集時應盡量避免溶血,否則造成假陽性;長菌的標本同樣的道理易產生假陽性。(3)抗凝不完全的標本因纖維蛋白元的干擾而造成假陽性,建議盡量不用抗凝血尤其是用肝素抗凝劑。(4)標本保存:血清置4冰箱5天內完成測試;一周以上則要-20冰凍保存,融解時應上下顛倒充分混勻。(5)ELISA的靈敏度1ng/
4、ml水平上,標本間的污染要盡量避免,尤其不應與生化試驗用同一管標本,最起碼應先做免疫后做生化 。(1)移液器:ELISA加樣量小(5-100l),其準確性直接影響實驗結果,利用稱重法檢查,一般應在10%以內;(2)水浴箱:經常檢查水浴箱溫度計所示的溫度和水中(或溫箱內)實測溫度是否一致,允許有1的誤差;(3)洗板機:每個廠家設置洗板后的殘留液有各自的規定一般不超過2ul,人工扣板時,墊紙不濕,定期檢查管孔是否堵塞;(4)酶標儀:經常維護其光學部分,防止濾光片霉變,定期檢測校正,使其保持良好的工作性能。 (1)加樣(2)溫育(3)洗滌(4)顯色(5)酶標儀判讀結果 (1)測試之前,冰箱內試劑一定
5、要復溫(至室溫),并檢查是否已經變質,同時用雙蒸水稀釋濃縮的洗滌液和稀釋液,若用不合格的蒸餾水則可使空白值增高。(2)微量加液器應注意保養并定期校正,否則結果誤差較大,同時加樣時不可出現氣泡,以免反應物間不能充分混勻反應。(3)溫育時要力求受熱均勻,同時避免液體蒸發。(4)洗滌時力求次數足夠,且避免形成氣泡,否則洗滌不完全。(5)比色時反應管內不能留有氣泡,管底不能存有水滴,否則出現較大誤差。 1.選擇試劑 2.加樣 3.孵育 4.洗板 5.顯色 6.終止 7.讀板 1、RT-2100C可廣泛應用于傳染病、腫瘤標志物、血液病、艾滋病、內分泌障礙測定等臨床論斷領域。2、大屏幕漢化界面,利用觸摸屏
6、和筆作為輸入方式,極大地方便了用戶的操作輸入。3 、100個可編程的檢驗項目。4、多種定量、定性計算方法5、96孔可視化布板,空白位、對照位、樣本位、標準品位任意設置,同一板上可同時進行最多12個項目的測試。6、8通道檢測迅速準確(5秒/板),測試前的震動混勻功能。7、大容量歷史數據保存,最多可保存500個項目,1000個病人,10000條樣本記錄。8、形式多樣的綜合中文報告輸出,支持多種品牌系列的外置打印機。9、強大的網絡功能:可與醫院內部計算機網絡、質量監測中心及雷杜用戶服務中心聯網,為工作帶來極大的便捷。10、配合使用雷杜酶標實驗室管理系統,可以在聯網計算機上進行數據管理和分析。11、輔助管理功能:內置科室數據庫、醫生數據庫和系統日志數據庫。(1)開機,待機器自行檢測穩定(2
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