1、蒽酮法測定可溶性糖方法（一) 實驗原理糖在濃硫酸作用下，可經脫水反應生成糠醛或羥甲基糠醛，生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反應生成藍綠色糠醛衍生物，在一定范圍內，顏色的深淺與糖的含量成正比，故可用于糖的定量。糖類與蒽酮反應生成的有色物質在可見光區吸收峰為630 nm，故在此波長下進行比色。（二）材料、儀器設備及設計1 材料12種源砂生槐葉片，2種處理，4個重復，共96個樣。2 儀器設備分光光度計，恒溫水浴鍋，20 ml刻度試管，5 ml和1 ml刻度吸管，5 ml和1 ml的移液槍，記號筆，吸水紙適量。3 試劑 （1）蒽酮乙酸乙酯試劑：取分析純蒽酮1 g，溶于50 ml乙酸乙酯中，貯于

2、棕色瓶中，在黑暗中可保存數周，如有結晶析出，可微熱溶解。 （2）100 ug/L蔗糖溶液：1%蔗糖標準液：精確稱取蔗糖1.000 g，加入少量水溶解，移入100 ml容量瓶，加0.5 ml濃硫酸，定容至刻度線。100 ug/L蔗糖溶液的配制：用移液槍精確吸取1%蔗糖標準液1 ml，加入到100 ml容量瓶 ，加蒸餾水定容。 （3） 濃硫酸（比重1.84） （三） 實驗步驟1標準曲線的制作：按表1加入標準的蔗糖溶液，然后按順序向試管中加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯試劑和5 ml濃硫酸，充分振蕩，立即將試管放入沸水浴中，逐管準確保溫1 min取出后自然冷卻至室溫，以空白作參比，在

3、630 nm波長下測其光密度，以光密度為縱坐標，以糖含量為橫坐標，繪制標準曲線，并求出標準線性方程。試劑管號01，23,45,67,89,10100µg.1-1蔗糖/ml00.20.40.60.81水/ml21.81.61.41.21蔗糖量/µg0204060801002 取樣取不同種源砂生槐幼苗，用蒸餾水沖洗干凈，隨后用吸水紙吸干水分。將葉片切下，用錫箔紙包住，放入液氮中冷凍。取完后將樣品放入-80冰箱中保存。3 可溶性糖的提取 將樣品從冰箱中取出，稱取0.200.30 g，記錄重量，使用鑷子將樣品夾入刻度試管中，加入10 mL 蒸餾水，塑料薄膜封口，

4、于沸水中提取30 min（提取2次），提取液過濾入25 ml容量瓶中，反復沖洗試管及殘渣，定容至刻度。4 顯色測定吸取樣品提取液0.5 ml于20 ml刻度試管中（重復2次），加蒸餾水1.5 ml，然后加入0.5 ml蒽酮乙酸乙酯試劑和5 ml濃硫酸，充分振蕩，立即將試管放入沸水浴中，逐管準確保溫1 min取出后自然冷卻至室溫，以空白作參比（切勿忘掉對照）。在630 nm波長下測其光密度，測定樣品的光密度。 5計算可溶性糖的含量，計算公式：   C × V總 × D 樣品含糖量（%）= 

5、;  × 100%                          W × V測 × 106 其中：C在標準曲線上查出的糖含量（µg），  V總提取液總體積（ml），  V測測定時取用體積（ml）， 

6、; D稀釋倍數，  W樣品重量（g），  106樣品重量單位由g換算成µg的倍數數據統計表海拔處理編號吸光度標準曲線斜率標準方程求得糖含量C（ug）提取液量V（ml）吸取樣品液體積a（ml）稀釋倍數組織重量（W）計算所得可溶性糖含量平均值2900CK1 1 11 1 21 1 31 1 4 PEG1 2 11 2 21 2 31 2 43000CK2 1 12 1 22 1 32 1 4 PEG2 2 12 2 22 2 32 2 43100CK3 1 13 1 23 1 33 1 4 PEG3 2 13 2 23 2 33 2 43258CK4 1 14 1 2

7、4 1 34 1 4 PEG4 2 14 2 24 2 34 2 43600CK5 1 15 1 25 1 35 1 4 PEG5 2 15 2 25 2 35 2 43600-1CK6 1 16 1 26 1 36 1 4 PEG6 2 16 2 26 2 36 2 43700CK7 1 17 1 27 1 37 1 4 PEG7 2 17 2 27 2 37 2 43800CK8 1 18 1 28 1 38 1 4 PEG8 2 18 2 28 2 38 2 43900CK9 1 19 1 29 1 39 1 4 PEG9 2 19 2 29 2 39 2 44000CK10 1 110 1 210 1 310 1 4 PEG10 2 110 2 210 2 310 2 4410