1、 雌二醇 化學發(fā)光免疫檢測試劑盒使用說明書 ( 美國DRG 編號: CLA-4664 規(guī)格：96T)企業(yè)名稱：德國DRG診斷設備有限公司地址：德國瑪堡市斐恩貝塔思路18號1簡介1.1預期用途此DRG 化學發(fā)光免疫檢測試劑盒可用于血清和血漿中雌二醇的體外定量檢測.1.2前言（略）2實驗原理此CLIA檢測試劑盒采用化學發(fā)光免疫檢測法,基于競爭法原理.微孔內預先包被有兔抗雌二醇分子特性性結合位點的多克隆抗體.患者樣本中內源性雌二醇與辣根過氧化物酶(HRP)標記的雌二醇（酶聯(lián)物） 競相與預包被的抗體結合。 孵育后，洗板洗去未結合的酶聯(lián)物. 結合的過氧化酶復合物（酶聯(lián)物）與患者樣本中雌二醇的量成反比.加

2、入底物液后,發(fā)射光的強度與樣本中雌二醇的濃度成反比3注意事項1. 試劑盒僅供體外診斷用2. 試劑盒相關有害物質的信息請參閱物料安全數(shù)據(jù)單（MSMD）3. 試劑盒中的所有試劑包括人血清/血漿對HIV/II，HbsAg和HCV已檢測為陰性，但所有的試劑在使用和處理的過程中都應當作潛在生物有害物質進行處理4. 勿用嘴移液,同時避免樣品和試劑接觸皮膚和試劑.5. 實驗區(qū)內禁止飲食,化妝6. 處理試劑和樣品時應戴一次性手套。微生物污染可能會導致結果失敗7. 按照相應的國家生物安全管理條理進行操作8. 不要使用過期的試劑,有效期見試劑標簽9. 所有試劑的量都應按說明來，使用校正的移液器和發(fā)光儀可得到最佳的

3、結果10. 發(fā)光底物液（試劑A和試劑B）對光感染,應避光瓶裝保存.11. 不要混合使用不同批次的試劑、板條，即使是同一批次不同板條的也不建議。試劑盒的運輸和貯存環(huán)境不同可能會導致結果有輕微的變化12. 化學物質、即用試劑或稀釋試劑，需根據(jù)相關國家生物危害安全條例或規(guī)范，視為潛在有害物質處理。13. 產品的物料安全數(shù)據(jù)單（MSMD）可直接向DRG索取。物料安全數(shù)據(jù)單（MSMD）符合EU-Guideline 91/155 EC4試劑盒組成4.1提供的試劑1. 微孔板，12x8(可拆),96孔 包被有抗雌二醇 抗體（兔多抗）2. 標準品，（標準品0-5）,6瓶，1ml，即用濃度為：0 25 100

4、250 500 - 1000 pg/mL 單位換算: 1 pg/mL = 3.67 pmol/L含0.3% Proclin、0.005%硫酸慶大小諾霉素作防腐劑3. 酶聯(lián)物,1瓶, 12 mL,即用 辣根過氧化物酶(HRP)標記雌二醇 含0.3% Proclin、0.015% BND、0.010% MIT作為防腐劑4.化學發(fā)光底物液試劑A，1瓶，2ml，注意：光敏感試劑B，1瓶，2ml，注意：光敏感試劑C，1瓶，3ml見“試劑準備”5.洗滌液，1瓶，30ml，(40倍濃縮) 見“試劑準備提示：額外的樣品稀釋液向DRG公司另購4.1.1實驗所需器材(但本試劑盒沒有提供)1. 化學發(fā)光儀2. 各種

5、規(guī)格的標準精密移液管3. 吸水紙4. 蒸餾水或去離子水4.2存儲條件及穩(wěn)定性未開封的試劑在2-8下可保存至有效期，不要使用過期的試劑打開的試劑必須保存在2-8，微孔板也必須保存于2-8，一旦打開了微孔板的袋子，需小心地將其重新密封開封的試劑盒如按以上描述的貯存條件可保存2個月4.3試劑準備使用前，將所有試劑和所需微孔板平衡至室溫洗滌液加 30 mL濃縮洗滌液至1170 mL 去離子水中,制成總體積為1200 mL的稀釋洗滌液。此稀釋洗滌液置室溫下可穩(wěn)定保存2周化學發(fā)光底物液首先用1個單位的試劑A與1個單位的試劑B混勻,再按1:2的比例用試劑C稀釋上述混合液,制成即用的底物液.上述制成底物液僅可

6、保存一個小時,使用時,最好新鮮制取,現(xiàn)配現(xiàn)用.如果使用所有的微孔板,準備所需底物液步驟如下:各加入1.5 mL的試劑A和試劑B至3mL試劑C中,充分混勻.4.4試劑盒廢棄處理試劑盒的廢棄應根據(jù)相關國家規(guī)范處理。產品的特殊信息請見物料安全數(shù)據(jù)單。4.5損壞的試劑盒萬一試劑盒成分嚴重受損，收到試劑盒后，最遲一周以書面形式通知DRG。損壞的試劑成分不能用于實驗。保存至有效解決方案出現(xiàn)。然后，根據(jù)相關官方規(guī)范處理5樣品本實驗可用血清,血漿(EDTA,肝素，檸檬酸)切勿使用溶血,黃疸或脂血的樣品請注意:含有疊氮化鈉的樣品不可用于本實驗.5.1樣品收集血清：靜脈穿刺采血，等待凝集，室溫下離心分離出血清。未

7、完全凝固時不可進行離心。血漿：將全血收集到含有抗凝劑的離心管內，采集后立即離心5.2樣本存儲樣品瓶裝加蓋置于2 °C至 8 °C下可保存5天需存儲更長時間,需置于-20°C凍存。實驗前，解凍的樣品需倒置幾次5.3樣本稀釋初次實驗時,如發(fā)現(xiàn)樣品高于最大標準品濃度,樣品可用零標準品稀釋10倍或100倍 并重測。計算時需考慮稀釋因子示例:a) 1:10稀釋 10 µL血清+ 90 µL零標準品（充分混勻）b)1:100稀釋 10 µL上述a) 1：10稀釋液 + 90 µL零標準品（充分混勻）6實驗步驟6.1一般注意事項實驗前將所

8、有試劑平衡至室溫，混勻，避免產生氣泡實驗一旦開始，所有步驟必須無中斷，完整地進行下去為了避免交叉污染，使用新的一次性加樣槍頭，加各標準品、質控品、樣品 光強度是孵育時間和溫度的相關函數(shù).實驗前將所有試劑準備好，蓋子打開，所需板條固定等，這樣可以確保每個步驟間隔時間一致，無中斷。一般情況下,酶反應與時間和溫度成線性比例關系6.2檢測步驟每次試驗都應建立一條標準曲線。1. 取實驗所需板條固定于板架上2. 用新的一次性加樣槍頭,各加20ul的標準品，質控品和樣品于相應的孔內3. 每孔加100ul酶聯(lián)物，充分混勻10秒.充分混勻這一步驟很重要4. 室溫下孵育35min（無需蓋板）5. 迅速棄去孔內液體

9、每孔用400ul的稀釋洗滌液洗板5次，吸水紙上拍干,去除殘留液滴.重要提醒：實驗的靈敏度和精確度直接受洗板正確與否的影響.6. 每孔加50ul現(xiàn)配的化學發(fā)光底物液7. 室溫下孵育10min 8. 化學發(fā)光底物液孵育后，20min內于發(fā)光儀上讀取相對光單位(RLU)6.3結果計算1. 計算各標準品，質控品和樣品的相對光單位(RLU)平均值2. 在半對數(shù)坐標紙上，以標準品的RLU的均值為Y軸，濃度為X軸繪制標準曲線3. 從標準曲線上通過RLU均值找到相對應的濃度值4. 全自動法：自動法用最合適的4參數(shù)對數(shù)擬合法計算，它是首選計算方法，其它函數(shù)方法得出的結果可能會有細微的不同.5. 樣品濃度可直接從

10、標準曲線上讀取，樣品濃度高于最高標準品濃度的則需進一步稀釋.結果計算時要乘以稀釋因子6.3.1典型標準曲線示例下以數(shù)據(jù)僅供演示示范,不能用于實驗數(shù)據(jù)的獲取.建議用RLU/RLUmax比值作為結果分析,因各個廠商的化學發(fā)光儀的不同導致讀取RLU值的不同,但RLU/RLUmax的比值總是恒定不變的7期望值強烈建議每個實驗室建立自已的正常與非正常值以下數(shù)值可作為參考性別5 95%百分位男10 - 36 pg/mL女絕經前絕經后13 - 191 pg/mL11 65 pg/mL8質控說明根據(jù)GLP規(guī)范要求，質控品應該與標準曲線（標準品）同時檢測。檢測一定統(tǒng)計學意義數(shù)量的質控品建立質控品均值和可接受范圍

11、，保證實驗的有效性。建議根據(jù)相關國家或聯(lián)邦規(guī)范處理質控品。使用質控品是為了驗證實驗的有效性。建議同時使用正常和病理水平的質控品。質控品和相應的值請詳見試劑盒內的質控單（QC單）。QC單上詳細說明參考均值和范圍，并提及當前使用批次號，實驗結果應與QC單上參考值作對比分析。同時建議執(zhí)行國家或國際質量評估體系，保證實驗的準確性。使用適當?shù)慕y(tǒng)計學方法分析質控品的值和趨勢。如果實驗結果沒有滿足建立的質控品的可接受范圍值，實驗應視為無效。如果實驗無效，請檢查以下技術指標：加樣和計時裝置；酶標儀；試劑效期；存儲及孵育條件；洗板步驟。如果檢查完上述情況，均沒有問題的話，請聯(lián)系經銷商或DRG公司。9性能指標9.

12、1檢測范圍實驗盒的檢測范圍：0 1000 pg/mL.9.2抗體特異性（交叉反應）下表為相關物質與試驗交叉反應的情況9.3分析靈敏度分板靈敏度是由均值減去20份零標準品2個標準差計算得出，為2.5 pg/mL9.4精密度9.4.1板內差板內差結果如下所示9.4.2板間差板間結果如下所示：9.5回歸樣品按1：1通過加入已知濃度雌二醇液進行校準分析期望值通過加的未稀釋樣品的半值和已知溶液的半值計算獲得。%回歸值通過多重稀釋計算，期望達100.9.6線性度10局限性（略）本譯文僅供參考，詳情請以原文為準中國獨家總代理：深圳市科潤達生物工程有限公司研發(fā)地址：深圳市蛇口沿山路10號6層 辦公地址：深圳市蛇口沿山路6號佳利泰大廈7D 電話26680196 郵政編碼：518067免費電話：800-8306296 傳真是我們時代的生命別林斯基書籍是巨大的力量列寧書是人類進步的階梯高爾基書籍是人類知識的總統(tǒng)莎士比亞書籍是人類思想的寶庫烏申斯基書籍舉世之寶梭羅好的書籍是最貴重的珍