1、 培養基的制備與分裝1稱量、溶解先在容器中加入所需水量的一半，然后按培養基配方依次將各種原料準確稱取加入水中，用玻璃棒攪拌使之溶化，某些不溶解的原料如蛋白胨，牛肉膏等可事先在小容器中加入少量水加熱溶解后再沖入容器中，有些原料需要量極少不易稱量，可先配成高濃度的溶液，再按比例換算后取一定體積的溶液加入容器中，等原料全部放入容器后，加熱使其充分溶解，在加熱過程中應注意不斷攪拌以防原料沉底燒焦，最后補足所需的全部水分。2調整酸堿度(pH) 有的培養基需要一定的pH，常用鹽酸或氫氧化鈉溶液進行調整。最簡單的調節方法是用精密pH試紙進行測定，即用玻棒沾一滴培養基，點在試紙上進行比色后，如pH偏酸則加1%

2、氫氧化鈉溶液，偏堿則加1%鹽酸溶液，一次加量不宜太多，經反復幾次調節后，即可基本調至所需pH，此法簡便易行，但較粗放，需要較準確調節的，可用pH計測定。使用高濃度的堿液或酸液進行培養基pH的調整，可避免由于使用低濃度溶液調整因使用量過多而影響培養基的總體積和濃度，并可節約工作時間，但宜分小量多次加入調節，不應操之過急。3.過濾和澄清(1)紗布過濾 用34層醫用紗布放在漏斗內，將已配制培養基直接傾倒過濾，這種方法只濾去較粗的渣滓。(2)棉花過濾 用小塊脫脂棉塞在漏斗管的上口，使不致浮起也不要塞得過緊，先用少量的清水浸濕后，再將培養基傾入過濾，可得較透明的培養基，以供微生物計數和觀察菌落特征及某些

3、生化試驗用。(3)高溫澄清 把制好的培養基，置于高壓蒸汽滅菌鍋里，加熱升壓至4.9104Pa壓力，保持30min，降壓冷卻后取出，靜置數小時，即行澄清。液體培養基可用細橡皮管將清液虹吸到另有容器中，再行分裝。加瓊脂的培養基經加熱沉淀后，可在未冷凝前虹吸上部澄清液入另一容器內然后分裝；也可待其凝凍后，將容器周圍稍加熱，使凍膠外圍融化，將整塊膠凍倒出后用刀切去底部沉渣部分，再把澄清部分加熱融化后，分裝。此法可得較透明培養基。(4)保溫過濾 加有瓊脂的培養基，不論用紗布或棉花過濾，都應保持在60以上情況下進行，否則易造成瓊脂凝固后而不能過濾。最簡單易行的方法是，將瓊脂培養基盛在鍋里，并置火上保溫，乘

4、熱過濾。也可用特制的保溫漏斗加熱保溫過濾，特別是在天冷時較好。4.分裝培養基配好后，根據不同的使用目的，使用的量分裝到各種不同的容器中。通常使用一個大漏斗(小容量分裝)或底部有出口的鐵筒(大容量分裝)，放在漏斗架上，下口連接一段軟橡皮管，橡皮管下面再連一小段末端開口處略細的玻璃管，在橡皮管上夾一個手控彈簧夾，分裝時；將玻璃嘴插入試管內，不能觸及管壁，捏開彈簧夾，注入定量培養基后，先止住液流，再抽出玻璃管，仍不要觸及管壁和管口。分裝培養基時，一定要注意勿使培養基沾污管口和瓶口，以免弄濕或粘住棉塞造成污染。培養基中如有某些不溶于水的原料(如碳酸鈣)，應在分裝前不斷攪拌，使成懸浮液狀態，才能均勻地分散到各容器內。5包扎培養基分裝到各種容器后(如試管、三角瓶等)，應按管口或瓶口的大小分別塞以大小適度的棉塞。其作用主要是阻止外界微生物進入培養基內，防止由此可能導致的雜菌污染；同時還可保證良好的通氣性能，使微生物能不斷獲得良好的無菌空氣。塞棉塞