1、非小細(xì)胞肺癌組織MIP1表達(dá)及其與樹突狀細(xì)胞浸潤(rùn)的關(guān)系         11-03-24 15:08:00     編輯：studa20             作者：陳宇平， 穆傳勇, 翁根龍, 宋麗麗, 黃建安  【摘要】  目的： 探討巨噬細(xì)胞炎癥蛋白1（MIP1）在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)樹突狀細(xì)胞之間的關(guān)系。

2、方法： 經(jīng)外科手術(shù)切除的60例非小細(xì)胞肺癌組織標(biāo)本，分別采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)趨化因子受體CCR1，CCR7的表達(dá)，熒光原位雜交法檢測(cè)MIP1的表達(dá)。結(jié)果： （1）肺癌細(xì)胞胞質(zhì)及胞膜表達(dá)MIP1，同時(shí)檢測(cè)到肺癌組織中有CCR1和CCR7陽性樹突狀細(xì)胞的浸潤(rùn)。（2）肺癌組織中CCR1，CCR7及MIP1表達(dá)和肺癌臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，和病理類型、分化程度無關(guān)。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組表達(dá)MIP1的腫瘤細(xì)胞及CCR1陽性樹突狀細(xì)胞數(shù)量明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P0.05），期患者表達(dá)MIP1的腫瘤細(xì)胞及CCR1陽性樹突狀細(xì)胞數(shù)量明顯高于期（P0.05）。（3）肺癌組織中MIP1陽性細(xì)胞表達(dá)率和CCR1陽性樹

3、突狀細(xì)胞數(shù)量呈正相關(guān)，和CCR7陽性樹突狀細(xì)胞數(shù)量呈負(fù)相關(guān)（P0.05）。結(jié)論： 非小細(xì)胞肺癌組織MIP1表達(dá)和肺癌臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，與腫瘤浸潤(rùn)樹突狀細(xì)胞表面分子CCR1,CCR7的表達(dá)關(guān)系密切，推測(cè)MIP1可能影響腫瘤浸潤(rùn)樹突狀細(xì)胞的發(fā)育和趨化功能并參與肺癌的免疫逃逸和疾病進(jìn)展。 【關(guān)鍵詞】  非小細(xì)胞肺癌； 巨噬細(xì)胞炎癥蛋白1； CCR1； CCR7    Abstract  Objective: To explore the relationship of dendritic cell infiltration and MIP1

4、expression in nonsmall cell lung cancer(NSCLC) and its clinical significance.Methods： Immunohistochemical staining was performed to detect expression of CCR1，CCR7，and fluorescent in situ hybridization performed to detect expression of MIP1 in 60 lung cancer tissues. Results： （1）MIP1 positive tumor c

5、ells and CCR1，CCR7 positive dendritic cells were detected in lung cancer tissues；（2）Expression rate of CCR1 and MIP1 with lymph node metastasis was higher than that without lymph node metastasis，and stage were higher than those of stage ，all above differences were statistically significant（P0.05）；（4

6、）The positive percentage of CCR1,CCR7 and MIP1 had no relationship with pathological type and cell differentiation（P>0.05）, but was correlated with clinical stage and lymph node metastases（P0.05）；The expression levels of MIP1 of lung cancer were positive correlation with the percentage of CCR1 po

7、sitive dendritic cells（P0.05）and negative correlation with the percentage of CCR7 positive dendritic cells（P0.05）. Conclusion： The expression of MIP1 may play an important role of tumor immune escape and progression of disease through interfering cell differentiation of TIDC.    Key w

8、ords  nonsmall cell lung cancer；   macrophage inflammatory protein1; CCR7； CCR1    趨化因子及其受體廣泛參與機(jī)體細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡、組織損傷，其與腫瘤的發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系也是近年來的研究熱點(diǎn)。我們通過研究肺癌組織的巨噬細(xì)胞炎性蛋白1（MIP1）表達(dá)與肺癌組織中浸潤(rùn)樹突狀細(xì)胞表面趨化因子受體CCR1，CCR7表達(dá)的關(guān)系，初步探討肺癌的免疫逃逸機(jī)制。    1  材料和方法    1.1

9、  材  料    隨機(jī)選取2004年11月2007年9月吳江市第三人民醫(yī)院及蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院胸外科手術(shù)治療的60例非小細(xì)胞肺癌組織作為研究對(duì)象，標(biāo)本均經(jīng)過病理診斷證實(shí)，患者術(shù)前均未行放療或化療。60例肺癌患者中男44例，女16例，年齡3572歲,平均（53.9±8）歲。根據(jù)1997年國(guó)際抗癌聯(lián)盟(UICC)修訂的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行TNM分期：期9例，期27例,期21例（A期16例，B期5例），期3例。組織學(xué)分級(jí)：高分化6例，中分化35例，低分化19例。病理類型：鱗癌28例，腺癌22例，大細(xì)胞癌6例，其他類型4例。送檢區(qū)域淋巴結(jié)癌轉(zhuǎn)移陽性者

10、25例，陰性者35例。    1.2  試  劑    CCR1，CCR7多克隆抗體、免疫組化SP檢測(cè)試劑盒及MIP1原位雜交檢測(cè)試劑盒均購自武漢博士德生物制品公司。針對(duì)人MIPl 靶基因的mRNA序列為： 5TGCCCTTGCTGTTCTTCTCTGCACCATGGC3; 5GGCAAATTCCACGAAAATTCATTGCTGACT3 。    1.3  方  法    1.3.1  免疫組織化學(xué)  所有標(biāo)本均經(jīng)

11、10%的中性甲醛固定,常規(guī)石蠟包埋, 5 m切片,二甲苯及梯度乙醇脫蠟至水，抗原微波修復(fù)，3H2O2阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，PBS洗滌，山羊血清封閉后加入抗CCR7多克隆抗體, 4過夜，PBS洗滌后依次加入二抗及卵白素過氧化物酶，DAB顯色。操作嚴(yán)格按產(chǎn)品說明書進(jìn)行，滴加PBS液代替一抗作陰性對(duì)照。    1.3.2  熒光原位雜交  MIP1原位雜交檢測(cè)按博士德公司說明書操作。切片脫蠟至水化，3H2O2室溫下處理10 min，蒸餾水沖洗，切片上滴加3檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶消化液，37消化15 min顯露mRNA核酸片段，原位雜交用PBS沖洗，

12、然后蒸餾水沖洗后固定，1低聚甲醛，0.1 mmol/L PBS，含有1/1 000 DEPC，室溫固定10 min，蒸餾水沖洗。預(yù)雜交，每張切片加20 l預(yù)雜交液，放濕盒內(nèi)置38恒溫箱內(nèi)3 h，吸取多余液體，不洗。雜交，按每張切片加20 l雜交液，加蓋原位雜交專用蓋玻片，放濕盒內(nèi)置于38恒溫箱內(nèi)雜交過夜。雜交后洗滌，揭去蓋玻片，37的2×SSC洗脫液洗2 min×2次，0.5×SSC洗滌2 min×1次，0.2×SSC洗滌15 min×1次。滴加封閉液37孵育30 min，傾去多余液體，滴加生物素化鼠抗地高辛，37 60 min，原位

13、雜交用PBS沖洗。滴加SABC 37 20 min，原位雜交用PBS沖洗。滴加生物素化過氧化物酶，37 20 min或室溫30 min，PBS沖洗。加熒光素標(biāo)記的二抗，熒光顯微鏡下計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞。    1.4  免疫組化及熒光原位雜交染色結(jié)果判斷    免疫組化染色陽性細(xì)胞均為胞質(zhì)或胞膜染成棕黃色或棕褐色。熒光顯微鏡下觀察胞質(zhì)中出現(xiàn)亮綠色熒光顆粒為MIP1陽性，陰性細(xì)胞均不染色。隨機(jī)計(jì)數(shù)5個(gè)高倍視野的陽性細(xì)胞數(shù)目，以每高倍視野平均值作為劃分界限，染色5判讀為陽性表達(dá)。    1.5  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法    統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)采用2檢驗(yàn)及Fisher精確檢驗(yàn)，所有結(jié)果經(jīng)過SPSS11.5軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。    2  結(jié)  果    2.1