1、孕婦血清中膽固醇硫酸的變化及生理意義【摘要】目的測定妊娠婦女血清及胎盤絨毛中膽固醇硫酸(cholesterol sulfate,CS)含量的變化，分析CS對凝血酶活性的影響，探討CS在妊娠過程中的生理意義。方法利用薄層層析法(thin layer chromatography,TLC)，測定30例妊娠婦女血清及21例胎盤絨毛組織中CS的含量，同時在體外測定CS對凝血酶活性的抑制作用。結(jié)果妊娠婦女血清中CS含量從妊娠早期開始出現(xiàn)上升趨勢，且隨孕周增加而升高，與孕周呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.69，P0.01)。CS含量在妊娠晚期達(dá)到最高值，為非妊娠婦女血清中濃度的2.1倍(P0.01)。胎盤絨毛中CS

2、含量也呈相同變化趨勢。CS具有抑制凝血酶活性作用。結(jié)論胎盤絨毛中CS脫落至血中可能是妊娠婦女血中CS增高的原因之一，妊娠婦女血中CS增加對調(diào)解妊娠血液凝固狀態(tài)具有生理意義。【關(guān)鍵詞】膽固醇硫酸妊娠胎盤絨毛薄層層析法凝血酶膽固醇硫酸(CS)存在于多種組織及體液中，如皮膚、毛發(fā)、子宮內(nèi)膜、血液等，其生理作用被認(rèn)為與受精、縮短血液凝固時間、調(diào)解蛋白激酶C活性等有關(guān)。本實驗首次分析妊娠婦女血清及胎盤絨毛組織中CS含量的變化，以探討CS在妊娠中的生理作用。1資料與方法1.1研究對象隨機(jī)選擇在我院正常妊娠者30例為研究組，其中妊娠早期(12周)、妊娠中期(1328周)、妊娠晚期(3642周)各10例，均無

3、妊娠合并癥，無口服避孕藥史及煙酒史。平均年齡(30.22.5)歲，平均產(chǎn)次(1.160.27)次。另選條件相似未孕健康婦女10例作為對照組。1.2方法1.2.1血清及胎盤絨毛中CS測定(1)標(biāo)本采集兩組病例于晨起空腹，自肘正中靜脈采血5ml，立即分離血清，于-80保存，集中待檢。妊娠早期及中期胎盤絨毛組織來自人工流產(chǎn)及中期引產(chǎn)患者；妊娠晚期胎盤絨毛組織來自正常分娩及剖宮產(chǎn)產(chǎn)婦。妊娠中期及晚期胎盤絨毛取自胎盤中央處。胎盤絨毛組織取材后，用PBS洗凈，冷凍干燥，稱重，-80保存，集中待檢。(2)提取血清及胎盤絨毛中的酸性脂質(zhì)利用改良的巖森正男方法1提取血清中酸性脂質(zhì)。首先利用不同體積比例的氯仿和甲

4、醇(41、11和11，V/V)，連續(xù)在40下提取血清中總脂質(zhì)，然后利用柱狀層析法(DEAE-Sephadex A-25,Pharmacia公司)將其分離成中性和酸性兩部分。再將酸性部分通過堿性處理、透析、蒸餾等方法處理后，將其溶于氯仿及甲醇混合液中(11，V/V)，于4保存，集中檢測。胎盤絨毛組織酸性脂質(zhì)部分利用巖森正男方法抽出1。(3)利用TLC法測定血清及胎盤絨毛中CS將一定量(0.3ml血清或0.5mg凍干胎盤絨毛組織相當(dāng)量)上述酸性脂質(zhì)層析于HP TLC板(Merck公司)。展開溶劑為氯仿、甲醇、丙酮、酢酸及水(82421，V/V)的混合液。利用酢酸酮法進(jìn)行發(fā)色。發(fā)色后HPTLC板利用

5、TLC密度測定儀(CS-9000，Shimadzn公司)進(jìn)行定量測定。標(biāo)準(zhǔn)品CS利用化學(xué)方法合成2。1.2.2分析酸性脂質(zhì)對凝血酶活性的影響在37將凝血酶分別與各種酸性糖脂質(zhì)包括CS、膽固醇、腦硫脂(sulfatide)、半乳糖苷神經(jīng)酰胺(galactosyl ceramide,GalCer)、神經(jīng)節(jié)苷脂(GM3 ganglioside)予先反應(yīng)10分鐘，然后再使其與凝血酶的底物反應(yīng)3。1.2.3統(tǒng)計學(xué)處理采用t檢驗、直線相關(guān)分析法。2結(jié)果2.1各組血清中CS含量比較各組血清中CS含量測定結(jié)果見表1。表1各組血清CS含量比較(s)組別例數(shù)CS(mol/L)非孕組10早期妊娠10中期妊娠101)

6、晚期妊娠102)注：1)與非妊娠比較P0.05；2)與早期妊娠比較P0.01 由表1可見，CS隨孕周增加而升高，妊娠晚期增加最為明顯，達(dá)到非妊娠血清中CS濃度的2.1倍(P0.01)。血清中CS含量和孕周間呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.69，P0.01)。2.2各組胎盤絨毛組織中CS含量比較結(jié)果見表2。表2各組胎盤絨毛CS含量測定值(s)組別例數(shù)每毫克干燥質(zhì)量含CS的pmol數(shù)早期妊娠7中期妊娠71)晚期妊娠72)注：1)與早期妊娠比較P0.01；2)與早期妊娠比較P0.001由表2可見，胎盤絨毛組織中CS含量隨孕周增加而增高，妊娠中期較妊娠早期高4.7倍(P0.01)，而妊娠晚期胎盤絨毛組織中CS含

7、量更高，是妊娠早期的6.2倍，差異非常顯著(P0.001)。胎盤絨毛中CS含量與孕周呈正相關(guān)關(guān)系(r=7.9，P0.01)。2.3酸性脂質(zhì)對凝血酶活性的影響為探討妊娠婦女血清及胎盤絨毛中CS增高生理機(jī)制，本研究測定了各種酸性脂質(zhì)在體外對凝血酶活性的抑制作用。結(jié)果見表3。 表3酸性脂質(zhì)對凝血酶的抑制作用酸性脂質(zhì)相對凝血酶活性(%)對照CS膽固醇SulfatideGalCerGM3由表3可見，在體外CS幾乎可以完全抑制凝血酶的活性，而其他酸性脂質(zhì)除GM3對凝血酶活性稍有抑制外，其余對凝血酶活性無抑制作用。3討論如本文結(jié)果所示，妊娠婦女血清中CS含量隨孕周增加而顯著升高，其原因可能為妊娠期間類固醇類

8、激素水平增高有關(guān)。因為報道證明與硫酸類固醇類的同化和異化作用相關(guān)的酶受類固醇類激素的調(diào)解46。各組織(如胎盤絨毛)中CS合成增加是由于妊娠激素水平增加所致。胎盤絨毛中CS含量隨孕周增加而顯著性增高(P0.01)，妊娠晚期含量為早期的6.2倍，所以胎盤絨毛中CS可能為血中CS的來源之一。血液中CS增加還可能由于其他各種病理性原因所致，如魚鱗癬、肝硬化、高膽固醇血癥、甲亢等。CS在組織中蓄集的原因是由于類固醇硫酸脂酶(steroid sulfatase)的缺乏，或是由于CS合成的增加所致7，8。血液中的CS還與血液凝固有關(guān)9，10。CS作用于第凝血因子和前激肽釋放酶而縮短凝血時間。CS還能促進(jìn)血小

9、板合成血栓素B2(thromboxane B2，TXB2)。妊娠期間，特別是妊娠晚期，血液處于高凝狀態(tài)。妊娠期間血液的高凝狀態(tài)是一種生理過程，對維持妊娠具有一定的生理意義。CS可能是導(dǎo)致妊娠期間血液高凝狀態(tài)的原因之一。血栓素A2(thromboxane A2，TXA2)使血小板內(nèi)cAMP減少，因而有很強(qiáng)的聚集血小板、收縮血管的作用。TXB2為TXA2代謝產(chǎn)物，無活性。CS促進(jìn)TXB2的形成增加，從而降低TXA2的作用，這對抑制血管收縮，降低血小板聚集，減少微血栓形成有著重要意義，特別是胎盤絨毛局部CS高度蓄積對維持胎盤局部微循環(huán)的通暢將發(fā)揮重要作用。本實驗還證明，在體外CS可以幾乎完全抑制凝血

10、酶活性，而血中其他的酸性脂質(zhì)如GM3、sulfatide等則無此作用。這說明CS具有促進(jìn)和抑制凝血的雙重作用。血凝是一種動態(tài)平衡。CS在調(diào)解其平衡過程中如何發(fā)揮作用還尚不清楚，將有待于進(jìn)一步研究解決。作者單位：林蓓(中國醫(yī)科大學(xué)第二臨床學(xué)院婦產(chǎn)科沈陽，110003)歐陽玲(中國醫(yī)科大學(xué)第二臨床學(xué)院婦產(chǎn)科沈陽，110003)張淑蘭(中國醫(yī)科大學(xué)第二臨床學(xué)院婦產(chǎn)科沈陽，110003)參考文獻(xiàn)1，Iwamori M,Sawada K,Hara Y,et al.Neutral glycophingolipids and ganlioside of bovine thyroid.J Biochem,19

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